不同產(chǎn)地烏梅理化指標(biāo)和枸櫞酸含量的分析和比較*

陳 蕾，張 倩，朱育鳳，邱明鳴，趙林鋼，2**

1 南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院/江蘇省中醫(yī)院 藥學(xué)部，南京 210029；2 南京市六合區(qū)中醫(yī)院/江蘇省中醫(yī)院江北院區(qū)，南京 211599

烏梅為薔薇科植物梅Prunus mume（Sieb.）Sieb.et Zucc.的干燥近成熟果實(shí)經(jīng)加工制成，具有斂肺、澀腸、生津驅(qū)蟲的功效[1]。烏梅是重要的藥食兩用品，應(yīng)用廣泛[2]。近年來本院門診烏梅年均用量已達(dá)9 噸，且隨著中藥制劑蓬勃發(fā)展，投料的烏梅飲片用量也日益增長(zhǎng)[3]。為保障其優(yōu)質(zhì)穩(wěn)定的質(zhì)量，建設(shè)烏梅種植基地、從源頭把控是最有效的措施[4]。

《中國(guó)藥材學(xué)》記載，“烏梅主產(chǎn)于福建、四川、浙江、湖南、廣東等地。以浙江產(chǎn)品質(zhì)佳，四川產(chǎn)量最大”[5]。

藥材和飲片的質(zhì)量，理化指標(biāo)、特別是有效成分含量是其重要內(nèi)容。本研究收集了來自四川、浙江、福建、云南的烏梅樣品，檢測(cè)其主要理化指標(biāo)和有效成分含量，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)和分析，以評(píng)價(jià)不同產(chǎn)地的樣品質(zhì)量?jī)?yōu)劣，旨在為本院烏梅道地藥材種植基地的合理布局以及內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)的制定提供依據(jù)[6]。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 烏梅樣品 于2019 年6～12 月收集烏梅樣品共36 批次，樣品來自于藥材的主要產(chǎn)地（四川、浙江、福建、云南）和主要流通市場(chǎng)，經(jīng)鑒定（江蘇省中醫(yī)院）均為薔薇科植物梅Prunus mume（Sieb.）Sieb.et Zucc.的干燥近成熟果實(shí)經(jīng)過加工而成。樣品信息見表1。

表1 烏梅樣品信息

1.1.2 儀器和藥品、試劑 Agilent 1260 型高效液相色譜儀（含G1312B 型二元泵，G1367E 型高性能自動(dòng)進(jìn)樣器，G1316A 型柱溫箱，G4212B 型DAD 檢測(cè)器，G1322A 型脫氣機(jī)）；X224ZH/E 型十萬分之一電子天平（常州奧豪斯儀器有限公司）；DHG-910A電熱鼓風(fēng)干燥箱（常州超群干燥設(shè)備有限公司）；BWS-5 電熱恒溫水浴鍋（上海捷呈實(shí)驗(yàn)儀器有限公司）；H5201 熱風(fēng)循環(huán)式馬弗爐（蘇州貫旭儀器有限公司）。

枸櫞酸對(duì)照品（上海源葉生物科技有限公司，批號(hào)：B20035-20 mg，純度≥98%）；乙腈、磷酸二氫銨為色譜純；水為純化水。

1.2 理化指標(biāo)測(cè)定

1.2.1 水分 按照《中國(guó)藥典》2015 版（四部）通則0832 第二法（烘干法）[7]，對(duì)烏梅36 個(gè)批次樣品進(jìn)行水分含量的測(cè)定。

取烏梅樣品粉末4 g，精密稱定，平鋪于干燥至恒重的扁形稱量瓶中，精密稱定，打開瓶蓋在105 ℃干燥5 h，將瓶蓋蓋好，移置干燥器中，冷卻30 min，精密稱定，再以上述溫度干燥1 h，放冷，稱重，至連續(xù)兩次稱重的差異不超過5 mg 為止。根據(jù)減失的重量，計(jì)算烏梅樣品中的含水量（%）。

1.2.2 總灰分 按照《中國(guó)藥典》2015 版（四部）通則2302[7]法，對(duì)烏梅36 個(gè)批次樣品進(jìn)行總灰分的測(cè)定。

取烏梅樣品粉末3 g（過2 號(hào)篩），精密稱定，置經(jīng)熾灼恒重的坩堝中，稱定重量（準(zhǔn)確至0.01 g），緩慢熾熱（注意避免燃燒），至樣品完全炭化，逐漸升高溫度至550 ℃，使完全灰化并至恒重。根據(jù)殘?jiān)亓浚?jì)算烏梅樣品中總灰分的含量（%）。

1.2.3 浸出物 按照《中國(guó)藥典》2015 版四部通則2201 法項(xiàng)下“水溶性浸出物測(cè)定法”[7]，對(duì)烏梅36個(gè)批次樣品進(jìn)行浸出物測(cè)定。

取烏梅樣品粉末約4 g（過3 號(hào)篩），精密稱定，置于100 mL 錐形瓶中，加水50 mL，密塞，稱定重量，靜置1 h，連接回流冷凝管，加熱至沸騰，并保持微沸1 h。放冷后，取下錐形瓶，密塞，再稱定重量，用水補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用干燥濾器濾過，精密量取濾液25 mL，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，于105 ℃干燥3 h，置干燥器中冷卻30 min，精密稱定重量，計(jì)算烏梅樣品中水溶性浸出物的含量（%）。

1.3 枸櫞酸含量測(cè)定

1.3.1 色譜條件 色譜柱：Agilent ZORBAX SBAq（4.6 mm × 250 mm，5 μm）；流 動(dòng)相：乙腈（A）-0.5%磷酸二氫銨溶液（B）3∶97（用磷酸調(diào)節(jié)pH 值至3.0），等度洗脫；柱溫：35 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：210 nm；流速：1 mL·min-1；進(jìn)樣量：10 μL。

枸櫞酸對(duì)照品與烏梅樣品色譜圖見圖1。

圖1 枸櫞酸對(duì)照品（A）與烏梅樣品（B）的HPLC 圖

1.3.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取枸櫞酸對(duì)照品適量，以1 mL 純水溶解，倍比稀釋為系列濃度標(biāo)準(zhǔn)品溶液，離心5 min（8000 r·min-1），取上清液，過0.20 μm 微孔濾膜，作為對(duì)照品溶液。

1.3.3 供試品溶液的制備 取烏梅細(xì)粉0.4 g，精密稱定，置于100 mL 錐形瓶中，量取100 mL 水，超聲提取1 h，放冷，離心5 min（8000 r·min-1），取上清液，過0.20 μm 微孔濾膜，作為供試品溶液。

1.3.4 含量測(cè)定 按照高效液相色譜法（《中國(guó)藥典》2015 版通則0512 法）[7]測(cè)定36 個(gè)批次樣品中枸櫞酸的含量。

1.4 數(shù)據(jù)處理

采用Excel2015 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果

由表2 可見，36 個(gè)批次的樣品中的8 號(hào)（產(chǎn)地浙江）、22 號(hào)（產(chǎn)地四川）、26 號(hào)（產(chǎn)地四川）、34 號(hào)（產(chǎn)地四川）和35 號(hào)（產(chǎn)地四川）樣品，枸櫞酸含量低于《中國(guó)藥典》限定值（不得少于12.0%）為不合格品，共5 個(gè)批次，故不再納入后續(xù)的統(tǒng)計(jì)分析。

表2 不同產(chǎn)地烏梅的理化指標(biāo)含量/%

由表3 可見，烏梅的枸櫞酸、浸出物、水分和總灰分含量隨產(chǎn)地、批次不同均存在一定差異，首先枸櫞酸和總灰分變異較大，其次為浸出物、水分。

表3 含量和各烏梅樣本理化指標(biāo)的分類統(tǒng)計(jì)

2.1 枸櫞酸

在31 個(gè)批次烏梅樣品中，枸櫞酸的含量為12.2%～24.0%，平均值16.1%，變異系數(shù)為0.20。其中，8 個(gè)浙江樣品中枸櫞酸含量平均值最高，為17.5%，變異系數(shù)為0.22；5 個(gè)云南樣品中枸櫞酸含量平均值為15.9%，變異系數(shù)為0.30；14 個(gè)四川樣品枸櫞酸含量平均值為15.7%，變異系數(shù)為0.17；4個(gè)福建樣品枸櫞酸含量平均值為15.4%，變異系數(shù)為0.11。

2.2 總灰分

在31 個(gè)批次烏梅樣品中，總灰分的含量為2.6%～5.2%，平均值3.9%，變異系數(shù)為0.20。其中，5 個(gè)批次云南樣品中總灰分含量平均值最低，為3.6%，變異系數(shù)為0.25，但其中有一樣品（批號(hào)20180515）總灰分含量為5.0%，臨界《中國(guó)藥典》 限定值（不得過5.0%）；次低的是4 個(gè)批次福建樣品中總灰分含量，平均值為3.7%，變異系數(shù)為0.33，其中有一樣品（批號(hào)20180609）總灰分含量為5.0%，臨界《中國(guó)藥典》限定值（不得過5.0%）；8 個(gè)批次浙江樣品中總灰分含量平均值是3.9%，變異系數(shù)是0.19；14 個(gè)批次四川樣本中總灰分含量平均值是4.0%，變異系數(shù)是0.16，但其中有2 個(gè)樣品（批號(hào)1804123、1806123）總灰分含量分別為5.2%、5.1%，超過《中國(guó)藥典》限定值（不得過5.0%）。

2.3 浸出物

在31 個(gè)批次烏梅樣品中，浸出物的含量為21.4%～42.4%，平均值33.5%，變異系數(shù)為0.13。其中在8 個(gè)批次浙江樣品中，浸出物含量平均值最高，為35.3%，變異系數(shù)為0.11；在5 個(gè)批次云南樣品中，浸出物含量平均值為33.7%，變異系數(shù)為0.09；在4 個(gè)批次福建樣品中浸出物含量平均值為33.1%，變異系數(shù)為0.09；在14 個(gè)批次四川樣品中浸出物含量平均值為32.6%，變異系數(shù)為0.16，但其中有一樣品（批號(hào)180302）浸出物含量為21.4%，未達(dá)到《中國(guó)藥典》限定值（不得少于24.0%）。

2.4 水分

在31 個(gè)批次烏梅樣品中，水分的含量為9.1%～12.4%，平均值為10.4%，變異系數(shù)為0.08。其中，在8 個(gè)批次浙江樣品中，水分含量平均值最低，為10.1%，變異系數(shù)為0.09；在14 個(gè)批次四川樣品中，水分含量平均值為10.4%，變異系數(shù)0.09；在4 個(gè)批次福建樣品中，水分含量平均值為10.7%，變異系數(shù)為0.03；在5 個(gè)批次云南樣品中，水分含量平均值為11.0%，變異系數(shù)為0.06。

3 小 結(jié)

本試驗(yàn)表明，在不同產(chǎn)地、不同批次的烏梅中，枸櫞酸、浸出物、水分、總灰分的含量均有差異。枸櫞酸作為有效成分是評(píng)價(jià)烏梅藥材質(zhì)量?jī)?yōu)劣的主要指標(biāo)，根據(jù)本試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果看出，浙江產(chǎn)烏梅樣品枸櫞酸平均含量較四川高，但含量均一性并沒有四川樣品好，這與《烏梅本草考證》所述烏梅產(chǎn)地一致[5]。綜合各項(xiàng)測(cè)定結(jié)果，建議本院發(fā)展烏梅藥材以枸櫞酸及浸出物含量相對(duì)較高的浙江地區(qū)優(yōu)先建立基地，同時(shí)將四川烏梅優(yōu)質(zhì)產(chǎn)區(qū)作為候補(bǔ)基地，以滿足日益增長(zhǎng)的臨床需求。

根據(jù)本院中藥材應(yīng)用發(fā)展戰(zhàn)略要求，結(jié)合浙江、四川產(chǎn)地烏梅樣本的枸櫞酸含量測(cè)定結(jié)果，在本院建立烏梅種植基地后，建議將理化指標(biāo)的內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)可稍高于《中國(guó)藥典》要求，以符合建設(shè)高標(biāo)準(zhǔn)、高要求的道地藥材基地的需求。

由于本次試驗(yàn)尚無法完全分析所有指標(biāo)與生態(tài)環(huán)境、采收時(shí)間、炮制程度的相關(guān)性，故其試驗(yàn)結(jié)果可能與生產(chǎn)實(shí)際有所差異，相關(guān)成分含量的限定區(qū)間還需開展進(jìn)一步的研究。