LncRNA NONSUST004358.1 在豬脂肪細胞分化中的作用研究

吳小敏，張雙翔*，朱二鵬，許厚強，趙佳福，程振濤，代興紅，陳秀華，袁超

（1.貴州省草地技術試驗推廣站，貴州貴陽 550025；2.貴州大學動物科學學院，貴州貴陽 550025；3.貴州省農業(yè)科學院畜牧獸醫(yī)研究所，貴州貴陽 550002）

脂肪細胞起源于胚胎中胚層，由前體脂肪細胞分化形成，過氧化物酶體增殖物激活受體（Peroxisome Proliferator-Activated Receptor，PPAR）、脂肪酸合酶（Fatty Acid Synthase，F(xiàn)AS）和激素敏感性脂肪酶（Hormone-Sensitive Lipase，HSL）是其分化與沉積中最重要的轉錄因子和關鍵酶基因。近年來一系列研究發(fā)現(xiàn)，長鏈非編碼RNA（Long noncoding RNA，lncRNA）在脂肪沉積中發(fā)揮重要的調控作用。大部分lncRNA 由RNA 聚合酶II 轉錄，具有與mRNA 相似的5帽子結構和3polyA 尾巴，在胚胎發(fā)育、脂肪沉積和肌肉生長中發(fā)揮重要調控作用。Liu 等通過lncRNA 微陣列分析發(fā)現(xiàn)，lncRNA Gm15290 能促進脂質沉積增加，調控脂肪形成基因和等表達。過表達lncRNA AK043773 可顯著抑制小鼠骨髓基質細胞中脂肪細胞分化和脂滴的形成。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，AMP 活化蛋白激酶1（Protein Kinase，AMP Activated Alpha 1，）是影響從江香豬肉品質的重要候選基因。根據(jù)PRKAA1 篩選的lncRNA NONSUST004358.1 在從江香豬皮下脂肪和背最長肌組織中有較高表達，提示lncRNA NONSUST004358.1可能在從江香豬脂肪沉積中發(fā)揮重要調控作用。本實驗通過分離培養(yǎng)從江香豬皮下和肌內前體脂肪細胞，分析lncRNA NONSUST004358.1 在前體脂肪細胞分化過程中的表達規(guī)律，構建pEGFP-C1-lncRNA NONSUST004358.1 過表達載體，分析轉染后前體脂肪細胞中PRKAA1、FAS、HSL、PPAR的表達變化，以及對前體脂肪細胞中甘油三酯和膽固醇含量的影響，探究lncRNA NONSUST004358.1 在前體脂肪細胞分化中的作用。

1 材料與方法

1.1 組織來源 5日齡從江香豬背最長肌和皮下脂肪組織。

1.2 實驗材料 T4 DNA 連接酶、限制性內切酶I、I 和逆轉錄試劑盒為美國Thermo Fisher 公司的產品；……