兒舒平顆粒制備工藝優選*

嚴文利，周德勇，龔 韜，朱 青，宋京美，王 夏，楊 薇，李蜀平

（北京市臨床藥學研究所，北京100035）

兒舒平顆粒是由北柴胡、白芍、澤瀉、龍膽、玄參、夏枯草等12味中藥制成的制劑，具有疏肝清熱、滋陰涼血、軟堅散結等功效，主治兒童肝經郁熱、腎陰不足。其中，北柴胡、白芍為君藥，北柴胡具有解熱、鎮痛、保肝、利膽等作用［1］，柴胡皂苷a為北柴胡的主要成分之一。白芍具有保肝、鎮痛、鎮靜、解痙等作用［2］，芍藥苷為白芍的主要成分之一。澤瀉、龍膽、玄參、夏枯草為臣藥，龍膽具有保肝利膽、抗炎、抗病原微生物等作用［3］，龍膽苦苷為龍膽的主要成分之一。本研究中以柴胡皂苷a、龍膽苦苷、芍藥苷為指標性成分，通過L9（34）正交試驗優選兒舒平顆粒的提取工藝，并對成型工藝進行考察，為其新藥開發奠定基礎。現報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

UltiMate3000型高效液相色譜儀（賽默飛世爾科技有限公司）；XP150DR型電子天平（梅特勒-托利多有限公司，精度為十萬分之一）；控溫電熱套（北京中興偉業儀器有限公司）；FL-30型沸騰制粒干燥機（常州力馬干燥機械有限公司）。

1.2 試藥

柴胡皂苷a對照品（批號為110777-201912，含量以91.1%計），芍藥苷對照品（批號為110736-202044，含量以97.4%計），龍膽苦苷對照品（批號為110770-201918，含量以97.6%計），均購自中國食品藥品檢定研究院；乙腈、甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 含量測定

2.1.1 柴胡皂苷a含量測定

色譜條件與系統適用性試驗：色譜柱為Agilent HC-C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相為乙腈-水溶液（梯度洗脫，洗脫程序見表1）；流速為1.0 mL/min；檢測波長為210 nm；柱溫為40℃；進樣量為10 μL。理論板數按柴胡皂苷a峰計不低于10 000。

表1 柴胡皂苷a含量測定流動相梯度洗脫程序（%）Tab.1 Procedure of mobile phase gradient elution for content determination of saikosaponin a（%）

溶液制備：取柴胡皂苷a對照品5.22 mg，精密稱定，置25 mL容量瓶中，加甲醇稀釋并定容，即得對照品溶液。取正交試驗的提取液少量，以12 000 r/min的速率離心，取上清液，即得供試品溶液。

標準曲線繪制：取柴胡皂苷a對照品5.22 mg，精密稱定，置25 mL容量瓶中，加甲醇稀釋并定容，分別精密吸取對照品溶液（質量濃度為0.190 2 mg/mL）1，2，3，4，5 mL，置10 mL容量瓶中，用甲醇定容，作為供試品溶液1，2，3，4，5，分別進樣10 μL，測定峰面積，以柴胡皂苷a進樣量（X，μg）為橫坐標、峰面積（Y）為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程Y=0.136 3X+0.011 5，r=0.999 6（n=5）。結果表明，柴胡皂苷a的進樣量在0.190 2～0.951 0 μg范圍內與峰面積線性關系良好。

樣品含量測定：精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10 μL，進樣測定峰面積，并計算樣品含量。

2.1.2 芍藥苷及龍膽苦苷含量測定

色譜條件與系統適用性試驗：色譜柱為Agilent HC-C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相為乙腈-0.1%磷酸水溶液（梯度洗脫，洗脫程序見表2）；流速為1.0 mL/min；檢測波長為230 nm；柱溫為35℃。理論板數按芍藥苷峰計不低于2 000，按龍膽苦苷峰計不低于3 000。

表2 芍藥苷及龍膽苦苷含量測定流動相梯度洗脫程序（%）Tab.2 Procedure of mobile phase gradient elution for content determination of paeoniflorin and gentiopicroside（%）

溶液制備：取芍藥苷對照品18.08 mg，精密稱定，置25 mL容量瓶中，加甲醇稀釋并定容，即得芍藥苷對照品溶液。取龍膽苦苷標對照品26.10 mg，精密稱定，置25 mL容量瓶中，加甲醇稀釋并定容，即得龍膽苦苷對照品溶液。取正交試驗的提取液少量，以12 000 r/min的速率離心，取上清液，即得供試品溶液。

標準曲線繪制：取芍藥苷對照品18.08 mg，精密稱定，置25 mL容量瓶中，加甲醇稀釋并定容，分別精密吸取對照品溶液（質量濃度為0.704 mg/mL）1，2，3，4，5 mL，置10 mL容量瓶中，用甲醇定容，作為供試品溶液1，2，3，4，5，分別進樣10 μL，測定峰面積，以芍藥苷進樣量（X，μg）為橫坐標、峰面積（Y）為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程Y=0.054 54X+0.015 96，r=0.999 9（n=5）。結果表明，芍藥苷進樣量在0.704～3.520 μg范圍內與峰面積線性關系良好。取龍膽苦苷對照品26.10 mg，精密稱定，置25 mL容量瓶中，加甲醇稀釋并定容，分別精密吸取對照品溶液（質量濃度為1.019 mg/mL）1，2，3，4，5 mL，置10 mL容量瓶中，用甲醇定容，作為供試品溶液1，2，3，4，5，分別進樣10 μL，測定峰面積，以龍膽苦苷進樣量（X，μg）為橫坐標、峰面積（Y）為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程Y=0.069 31X-0.003 193，r=0.999 95（n=5）。結果表明，龍膽苦苷進樣量在1.019～5.095 μg范圍內與峰面積線性關系良好。

樣品含量測定：精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10 μL，進樣測定峰面積，并計算樣品含量。

2.2 水提工藝優選

正交試驗設計：根據預試驗結果，選取加水量（因素A）、提取時間（因素B）、提取次數（因素C）［4-5］作為考察因素，以柴胡皂苷a、龍膽苦苷、芍藥苷轉移率為評價指標，采用L9（34）正交試驗篩選最佳工藝條件，并進行綜合評價。按處方比例，稱取處方量藥材飲片，置1 000 mL圓底燒瓶中，按正交試驗條件進行提取。因素與水平見表3。

表3 水提工藝正交試驗因素與水平Tab.3 Factors and their levels of the orthogonal test of the water extraction process

結果與分析：結果見表4和表5，P＜0.05為對結果有顯著影響，P＜0.01為對結果有極顯著影響。可見，因素C對柴胡皂苷a、龍膽苦苷、芍藥苷3種成分的轉移率均有極顯著影響，其中C3條件下3種成分的轉移率均最高，故選擇C3；因素A對龍膽苦苷的轉移率有極顯著影響，其中A2和A3條件下3種成分的轉移率基本一致且均高于A1，基于成本和效率考慮選擇A2；因素B對龍膽苦苷的轉移率有極顯著影響，其中B2和B3條件下的轉移率基本一致且均高于B1。但柴胡皂苷a在B1條件下的轉移率最高，故對A2B1C3和A2B2C3進行單獨考察，結果見表6。可見，在A2B1C3與A2B2C3提取條件下，3種成分的轉移率差異不顯著。綜合考慮，選取提取方式A2B1C3，即加10倍量水，提取3次，每次1.0 h。

表4 水提工藝正交試驗設計與結果Tab.4 Design and results of the orthogonal test of the water extraction process

表5 方差分析結果Tab.5 Results of the ANOVA

表6 最佳工藝篩選結果（%）Tab.6 Results of the optimal process screening（%）

驗證試驗：按優選的提取工藝條件制備樣品3批，測定樣品中柴胡皂苷a、龍膽苦苷、芍藥苷的轉移率，并計算RSD。結果3種指標性成分轉移率的RSD均小于2.0 %，符合相關規定，表明優選的水提工藝的穩定性和重復性均良好，工藝合理。詳見表7。

表7 3批樣品中柴胡皂苷a、龍膽苦苷、芍藥苷轉移率測定結果（%）Tab.7 Results of transfer rate determination of saikosaponin a，gentiopicrin and paeoniflorin in the three batches of samples

2.3 成型工藝優選

2.3.1 濕法制粒考察

干燥方法考察：選用FZG-15型蒸汽真空干燥箱，工藝參數設置為干燥溫度不高于80℃，真空度-0.09～-0.08 MPa。取600個處方用量（28.8 kg）藥材，按提取工藝提取，濃縮，真空干燥，可得干膏8.64 kg。

制粒條件考察：取水提工藝驗證試驗中的一個臨床湯劑處方量飲片，按提取工藝，加10倍量水，提取3次，每次1.0 h，可得干膏約14 g，按加輔料21 g進行制粒計算，可加輔料約7 g，干膏與輔料比為2∶1（m/m）。選用濕法制粒中最常用的輔料糊精作為輔料，選用乙醇作為潤濕劑，對乙醇體積分數進行考察。分別稱取400 g浸膏粉末（80目）、200 g糊精（80目），各3份，采用85%，90%，95%乙醇對制粒條件進行考察。結果見表8。可見，90%乙醇制粒容易，成品率高，故確定濕法制粒條件為90%乙醇適量。

表8 不同乙醇體積分數考察結果Tab.8 Results of investigation of ethanol with different volume fractions

2.3.2 噴霧制粒考察

選用FL-30型沸騰制粒干燥機進行制粒。以干膏-輔料（2∶1，m/m），將噴霧制粒常用輔料糊精和甘露醇按比例混合，作為底料。通過預試驗，確定噴霧制粒的工藝參數，進風口溫度低于100℃，物料溫度為45～55℃，鼓風頻率為30～50 Hz，出風口溫度為40～50℃，抖袋間隔為1.5～2.5 min，時間為30 s，藥液相對密度為1.20～1.25（50℃）。取600個處方用量（28.8 kg）藥材，按提取工藝提取，提取液經濃縮得相對密度為1.24（50℃）的清膏2 600 g，折合得干膏1 000 g。以不同比例的糊精和甘露醇為底料制粒（只抖袋1次，抖下細粉加水溶解重新噴入），結果見表9。可見，以糊精-甘露醇（3∶1，m/m）噴霧制成的顆粒形狀和成品率均最佳。

表9 不同糊精和甘露醇比例考察結果Tab.9 Results of different ratios investigation of dextrin to mannitol

2.3.3 顆粒吸濕性考察

取干燥器10個，底層分別加入蒸餾水或不同鹽飽和溶液，以保持一定相對濕度。分別精密稱定濕法制粒樣品（90%乙醇制粒）和噴霧制粒樣品［糊精-甘露醇（3∶1，m/m）］各30份，每種樣品各取3份，裝入恒定質量的稱量瓶中，打開瓶蓋，放入上述干燥器中，密閉，置室溫環境中保持7 d，打開干燥器，蓋嚴稱量瓶蓋，精密稱定質量。計算干重和濕重，并由此計算顆粒的吸濕率，繪制吸濕平衡曲線，詳見表10和圖1。可見，濕法制粒和噴霧制粒在不同相對濕度條件下的吸濕率基本無差異。臨界相對濕度均在85%。

圖1 噴霧制粒和濕法制粒制得顆粒的吸濕率平衡曲線Fig.1 Balance curve of moisture absorption rate of granules prepared by the spraying granulation and the wet granulation

表10 噴霧制粒和濕法制粒制得顆粒的吸濕率（%，n=3）Tab.10 Moisture absorption rate of granules prepared by the spraying granulation and the wet granulation（%，n=3）

2.3.4 顆粒流動性考察

通過固定漏斗法測定濕法制粒樣品和噴霧制粒樣品的休止角，結果濕法制粒樣品、噴霧制粒樣品的休止角分別為38°26′14″和37°11′32″。可見，2種制粒方法的流動性均能滿足生產要求（休止角小于40°），噴霧制粒樣品的流動性優于濕法制粒樣品。

2.3.5 顆粒含量考察

分別取濕法制粒樣品（90%乙醇制粒）和噴霧制粒樣品［糊精-甘露醇（3∶1，m/m）］，測定柴胡皂苷a、龍膽苦苷、芍藥苷的轉移率。結果見表11。可見，噴霧干燥的效率更高，且各指標成分的損失相對較小。濕法制粒和噴霧制粒在不同相對濕度條件下的吸濕率基本無差異，臨界相對濕度均在85%左右。但噴霧制粒效率高、速度快、成型好、顏色均一、成品率高、流動性好，且成品中3個指標成分的轉移率均高于濕法制粒的成品。故確定成型條件為噴霧制粒，底料為糊精-甘露醇（3∶1，m/m）的混合物，底料-干膏（2∶1，m/m）。

表11 不同制粒方法顆粒的3種成分轉移率測定結果（%）Tab.11 Results of transfer rate determination of three components in Ershuping Granules prepared by the different granulation methods（%）

2.4 矯味劑品種和用量選擇

選擇甜葉菊苷、阿斯巴甜、蛋白糖作為矯味劑，并對甜味感覺進行比較，最后確定阿斯巴甜作為本品的矯味劑，對其用量進行考察。選擇阿斯巴甜的用量分別為0.2%，0.5%，1.0%，2.0%，按上述優選工藝制備兒舒平顆粒，并包裝成7 g/袋，200 mL水沖服，采用單盲法提供給志愿者品嘗，根據志愿者的口感確定矯味劑的用量。結果見表12。可見，0.5%阿斯巴甜用量志愿者認可度最高，甜度較合適，口感較好，故最終選擇0.5%阿斯巴甜作為兒舒平顆粒的矯味劑。

表12 矯味劑阿斯巴甜的用量選擇結果Tab.12 Results of dosage selection of flavoring agent aspartame

3 討論

本試驗處方中的藥材有效成分多為苷類、多糖類等水溶性成分，故采用水提法進行提取。參考文獻［4-5］，以柴胡皂苷a、龍膽苦苷、芍藥苷轉移率為評價指標，選取加水量、提取次數、提取時間為考察因素進行正交試驗。通過高效液相色譜法測定，最終確定最佳水提方法為加10倍量水，提取3次，每次1.0 h。選取的最佳條件通過重復試驗進行驗證，確定為最佳水提工藝。

柴胡皂苷a水提取率低，且能轉換為柴胡皂苷b1，故正交試驗提取工藝中柴胡皂苷a的轉移率相對較低［6-7］，而且制成成品后其轉移率進一步下降。而此藥為兒童用藥，故加入一定量的矯味劑，以改善其苦澀味道，便于兒童服用。采用單盲法提供給志愿者品嘗，根據志愿者的口感，最終確定0.5%阿斯巴甜作為矯味劑。

本研究中通過顆粒吸濕性考察和成品轉移率考察，最終確定顆粒成型條件為噴霧制粒，底料為糊精-甘露醇（3∶1，m/m）的混合物，底料-干膏（2∶1，m/m），加入0.5%阿斯巴甜作為矯味劑。采用噴霧制粒法制得兒舒平顆粒的吸濕性、流動性、成型性均較好，優選的工藝穩定可行，可用于工業化生產。