下調晚期糖基化終末產物受體對乳腺癌細胞增殖、凋亡、侵襲、遷移能力的影響*

李海云 楊東光 洪秀麗 李金波 王 輝

（河北省涿州市醫院普外科，涿州 072750）

乳腺癌屬于一種較為常見的惡性腫瘤，由乳腺上皮細胞增殖失控引發惡變所致，目前對于乳腺癌的具體致病機制尚不完全明確，因此逆轉細胞增殖、遷移對提高臨床療效和降低患者死亡率尤為重要。臨床研究表明[3]，晚期糖基化終末產物受體（receptor for advanced glycation end products，RAGE）在惡性腫瘤細胞增殖、遷移中具有重要的調控作用。本研究探討下調RAGE對乳腺癌細胞增殖、凋亡、侵襲、遷移能力的影響，以明確RAGE與乳腺癌惡性轉變的關系，為臨床乳腺癌的診治提供參考。

1 材料和方法

1.1 材料

人乳腺癌BT474細胞株購自中國科學院上海生命科學研究院細胞資源中心。RAGE siRNA序列的設計、合成由上海生工生物工程有限公司完成；PI染液（武漢塞維爾生物科技有限公司）；PI3K抗體、p-PI3K抗體、Akt抗體、p-Akt抗體p-PI3K抗體、兔抗大鼠p-Akt抗體（貝克曼庫爾特公司）；Bcl-2抗體（Dako公司）；Bax抗體（BD公司）；caspase 3抗體（深圳市豪地華拓生物科技有限公司）。

1.2 人乳腺癌BT474細胞培育和分組

將人乳腺癌BT474細胞使用含10%胎牛血清、雙抗的RPMI1640完全培養基在溫度為37℃、5%CO2、飽和濕度環境下進行培養，每3天更換1次新鮮培養液，待細胞融合度達70%～80%時，行傳代培養，將細胞分為對照組（不做任何處理的乳腺癌BT474細胞）、上調組（乳腺癌BT474細胞+RAGE陰性對照）、下調組（乳腺癌BT474細胞+RAGE siRNA）3組，取對數生長期細胞進行后續實驗。

1.3 RAGE siRNA序列的設計、合成及細胞轉染實驗

根據基因序列數據庫GenBank查找序列并獲得RAGE序列，使用Ambion公司的在線設計軟件，在RAGE序列中獲取特異序列作為干擾靶序列，之后利用BLAST分析序列特異性，根據siRNA一般設計原則，兩端酶切點分別為EcoRⅠ、BamHⅠ，選擇其中1對序列送至上海生命生物工程有限公司合成?！?br>