Epothilone D對體外培養的BTBR小鼠皮質神經元興奮性突觸結構的影響*

陳永紅 楊 樺# 劉永峰 雷 強 蔚洪恩△

（山西醫科大學，1 第五臨床醫學院神經內科，2 基礎醫學院，太原 030012）

孤獨癥譜系障礙（autism spectrum disorder，ASD）是一種神經發育障礙性疾病，患病率呈逐年上升趨勢，其病因和發病機制尚未闡明。興奮性突觸的發育和功能是腦發育過程中的重要事件，研究表明突觸功能障礙參與了ASD的發病機制[1]。微管作為細胞骨架中最大的一種，參與調節神經元和大腦發育的所有過程[2]，微管的穩定性對神經元突觸發育起著重要作用[3-4]。研究表明ASD的發病與微管的穩定性有著密切的聯系[5]。微管穩定劑埃博霉素D（epothilone D，Epo D）具有促進微管蛋白聚合和微管裝配的作用，可以減輕STOP基因敲除小鼠的行為缺陷和改善突觸功能異常[6]。據此，本研究擬探討微管穩定劑 Epo D對體外培養的ASD模型 BTBR小鼠皮質神經元興奮性突觸結構的影響及機制，以期為ASD的治療提供新的理論基礎和藥物靶標。

1 材料和方法

1.1 實驗動物和主要試劑

BTBR小鼠（購自南京大學模式動物研究所，飼養于山西省人民醫院實驗動物中心）；埃博霉素D（MedChemExpress公司）；DMSO（索萊寶公司）；Neurobasal培養液、DMEM高糖培養基、神經生長因子B27、青霉素-鏈霉素、0.25%胰酶、胎牛血清及胎馬血清（美國Gibco公司）；多聚-D-賴氨酸氨溴酸鹽（美國Sigma公司）；SDS-PAGE凝膠制備試劑盒、BCA蛋白測定試劑盒（BOSTER公司）；抗MAP2、STOP、α-tubulin、PSD95、GluN2B、mGluR5抗體（CST公司）；抗acetyl-tubulin抗體（美國Sigma公司）；抗VGLUT1抗體（Synaptic Systems公司）；抗GADPH抗體（Bioworld公司）；羊抗兔 IgG、羊抗鼠 IgG（EarthOx公司）；FITC羊抗兔IgG（ABclonal公司）。

1.2 BTBR小鼠原代皮質神經元細胞的分離培養

取孕15～16 d孕鼠脫臼處死，無菌條件下快速取出胚胎置于解剖液中，在體……