脂多糖刺激干擾素調節因子3促進小鼠腹腔巨噬細胞白介素-17表達

李 婷 黃小園 馬 鳳 廖承浩 王 凱

（1 杭州醫學院基礎醫學與法醫學院，杭州 311399；2 浙江大學醫學院附屬口腔醫院，浙江大學口腔醫學院，浙江省口腔生物醫學研究重點實驗室， 杭州 310006；3 浙江大學醫學院附屬第二醫院，杭州 310009）

脂多糖（lipopolysaccharide， LPS）是革蘭陰性菌內毒素，為引起炎癥的病原模式相關分子（pathogen associated molecular pattern， PAMP），可與Toll 樣受體4（Toll like receptor 4， TLR4）特異性結合，激活炎癥反應信號轉導通路[1]。白細胞介素-17（interleukin-17，IL-17）主要由CD4+T細胞亞群分化形成Th17細胞后所分泌的炎癥因子[2]，在自身免疫病和慢性炎癥中作為驅動因素受到關注[3]。

LPS刺激可促進IL-17的產生[4-5]。在妊娠期間接觸病毒所引發的IL-17相關的母體免疫應答，會增加后代神經系統發育異常的風險，如自閉癥[6]。干擾素調節因子（interferon regulatory factor 3，IRF3）是轉錄因子，可促進干擾素β（interferon-β，IFN-β）的產生，從而抵抗病毒感染[7]。在不同的刺激條件下，IRF3還可以促進IL-6、CXCL9、CXCL10和CCL5等炎癥因子的產生[7-10]。本研究針對IL-7產生相關的細胞因子及轉錄因子進行了初步檢測，探討LPS刺激小鼠腹腔巨噬細胞后IRF3對IL-17表達的影響。

1 材料和方法

1.1 動物和試劑

C57BL/6野生型小鼠和IRF3基因敲除小鼠飼養于杭州師范大學實驗動物中心，取6～8周齡雄性小鼠進行實驗。3% 巰基乙酸肉湯（70157）和脂多糖（L2880）購自Sigma；胎牛血清（11012-8611）購自四季青生物；DMEM高糖培養基（MA0212）和BCA蛋白濃度測定試劑盒（MA0082）購自美侖生物；BSA封閉液（E661003）購自生工生物；β-actin（#3700）、NFκB（#8242）、核因子IκB抑制蛋白α（IκBα）（#9242）、磷酸化信號轉導子和轉錄激活子3（phosphorylated signal transducer and activator of transcription 3，p-STAT3）（#9131）、Anti-Rabbit-HRP（#7074）及Anti-Mouse-HRP（#7076）抗體購自Cell Signaling Technology；IL-6 DuoSet ELISA（DY406）和IL-17 DuoSet ELISA（DY421）購 自R&D System； Immobilon Western Chemiluminescent HRP Substrate（ECL）（WBKLS0100）購于MILLIPORE公司。

1.2 小鼠腹腔巨噬細胞的提取與培養

C57BL/6品系野生型和IRF3基因敲除小鼠，腹腔注射3%巰基乙酸肉湯2.5 mL，3 d后將小鼠頸椎脫臼處死，用75%乙醇浸泡3 min。……