巴戟天多糖對精索靜脈曲張大鼠睪丸修復作用的蛋白質組學分析*

張麗虹 趙小貞 王 瑋

（福建醫科大學人體解剖學系，臨床應用解剖學研究室，腦老化與神經變性疾病福建省高校重點實驗室，福州 350122）

精索靜脈曲張（varicocele，VC）是男性生殖系統中常見的疾病之一[1-6]。VC的病理學機制以及造成男性不育的機制包括由于血液循環受阻造成的睪丸高溫、神經內分泌系統紊亂、血-睪屏障（blood-testis barrier，BTB）損傷等[7-9]。巴戟天為茜草科藤狀灌木的根（拉丁名為Morinda officinalis F.C.How），中醫認為巴戟天具有壯陽補腎、固精安神、強筋壯骨的功效[10]，巴戟天多糖（Morinda officinalis polysaccharide，MOP）是巴戟天中主要的生物活性成分之一，含量為11%～35%[11-12]。本課題組前期研究表明MOP能夠修復損傷的生精上皮和BTB，減少生殖細胞凋亡，調節紊亂的激素水平趨于正常，減少血清抗精子抗體水平等[13-15]，但具體機制尚未明確。蛋白質組指由一個基因組、一個細胞或組織、一種生物體所表達的全部蛋白質的總稱[16-17]。本研究將300 mg/kg MOP用于VC大鼠的治療，采用串聯質譜標簽（Tandem Mass Tag，TMT）分析法對左側睪丸組織進行蛋白質組學研究，旨在從蛋白質組水平闡述VC的致病機制以及MOP修復作用的機制。

1 材料和方法

1.1 主要試劑

蛋白酶抑制劑（康成生物公司）； 三（2-羧乙基）膦（Sigma-Aldrich公司）；碘乙酰胺（Sigma-Aldrich公司）；三乙胺碳酸氫鹽（Sigma-Aldrich公司）；無水乙腈（Sigma-Aldrich公司）；C18液相色譜柱（Sigma-Aldrich公司）；羥胺（Sigma-Aldrich公司）；甲酸（Sigma-Aldrich公司）；Trypsin/Lys-C Mix（Promega公司）；脫氧膽酸鈉（生工生物工程公司）；乙基苯基聚乙二醇（Nonidet P-40，生工生物工程公司）；Dextran（Sigma-Aldrich公司）。

1.2 MOP提取和化學指紋圖譜分析

1.2.1 MOP提取 巴戟天粉末200 g，用3倍量的95%乙醇沸水浴回流提取2 h，共3次，除去巴戟天藥材中的脂溶性成分以及寡糖；藥渣自然揮發至無醇味，用6倍量的雙蒸水沸水浴提取2 h，共3次；……