大鼠延髓頭端腹內側區內G蛋白偶聯雌激素受體與多種神經元的免疫熒光共定位關系

孟 立 戎偉芳

（上海交通大學醫學院基礎醫學院，上海 200025）

痛覺信息傳遞和阿片類藥物鎮痛存在明顯的性別差異，女性對某些以疼痛為主要癥狀的疾病較男性更易感[1-2]。雌激素被認為可能參與痛覺的調控，但具體機制不清楚。G蛋白偶聯雌激素受體（G protein-coupled estrogen receptor，GPER）能夠介導雌激素的快速非基因組效應[3-4]，有研究表明其在痛覺傳導通路中發揮作用[5-7]。延髓頭端腹內側區（rostral ventromedial medulla， RVM）由中縫大核（nucleus raphe magnus， NRM）、網狀巨細胞核（nucleus reticularis gigantocellularis， Gi）及鄰近的網狀結構構成[8-9]，在痛覺的下行調控和阿片類藥物鎮痛中起重要作用[10-11]，但其神經元構成和局部環路尚不清楚。本研究對大鼠的RVM區域GPER和5-羥色胺（5-hydroxytryptamine，5-HT）能神經元標志物色氨酸羥化酶（tryptophan hydroxylase，TPH）、兒茶酚胺能神經元標志物酪氨酸羥化酶（tyrosine hydroxylase， TH）、神經元型一氧化氮合 酶（neuronal nitric oxide synthase， nNOS）、膽堿能神經元標志物膽堿乙酰轉移酶（choline acetyltransferase， ChAT）以及腦啡肽（enkephalin，ENK）進行雙重免疫組織化學顯色，旨在探究GPER在RVM的表達特征以及與上述多種神經元的共定位關系，從而了解雌激素影響痛覺下行調控通路和阿片鎮痛效應可能的結構和分子基礎。

1 材料和方法

1.1 實驗動物

6周齡雄性SD大鼠，由上海交通大學醫學院實驗動物科學部提供。動物飼養室內保持25°C恒溫，光照時間為早8∶00點至晚8∶00點，通風良好，水食充足。實驗操作均符合上海交通大學動物倫理相關規定。

1.2 主要試劑

兔 源GRER抗 體（LifeSpan BioSciences Inc.，LS-A4272）；山羊源ChAT抗體（Millipore， AB144P）；鼠源Enkephalin抗體（Abcam， ab150346）；山羊源nNOS抗體（Abcam， ab1376）；鼠源TH抗體（Immunostar，22941）；鼠源TPH抗體（Sigma， T0678）；驢抗兔Alexa 488（Invitrogen， A21206）；驢抗羊Alexa 568（Invitrogen，A11057）；羊抗兔 Alexa 568（Invitrogen， A11036）；羊抗 鼠Alexa 488（Invitrogen， A11029）；羊抗鼠Alexa 568（Invitrogen， A11031）；羊抗兔 Alexa 488（Invitrogen，A11034）。

1.3 免疫熒光組織化學顯色檢測RVM內GPER與多種神經元的共定位關系

以60 mg/kg的劑量腹腔注射戊巴比妥麻醉大鼠，將動物固定在解剖板上，剪開胸腔暴露心，將連接灌流泵的注射針頭從心尖刺入，灌注生理鹽水的同時剪開右心耳。……