GOLPH3及PI3K在卵巢癌組織中的表達及意義

沈艷麗 馮文廣 易金玲

卵巢癌患者早期診斷預后情況佳，中晚期病情進展率可超過25%以上［1］。由于卵巢癌細胞浸潤及轉移能力較強，不同措施治療后，卵巢癌患者的病死率及致殘率仍然超過了30%［2］。通過對卵巢癌發病過程中的細胞因子表達進行分析，能夠為臨床上卵巢癌的早期診斷及臨床預后評估提供依據。高爾基磷酸化蛋白3（Golgi phosphorylated protein 3，GOLPH3）是細胞骨架結構蛋白，能維持癌細胞骨架結構，提高癌細胞骨架結構蛋白的翻譯合成速度［3］。3 羧基磷脂酰肌醇激酶（3?carboxyphosphati?dylinositol kinase，PI3K）是磷酸激酶蛋白家族成員，可修飾癌細胞內信號通路蛋白，能夠顯著加劇癌細胞生物學行為的惡化［4］。為了揭示GOLPH3 及PI3K 在卵巢癌患者中的表達情況，評估GOLPH3 及PI3K 在卵巢癌發生發展過程中的作用，本研究將探討了GOLPH3 及PI3K 的表達及其與卵巢癌臨床分期或者淋巴結轉移等的關系。現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019年1月至2021年3月于本院保存的卵巢癌組織標本87 份，納入標準：①均經病理組織學確診［5］；②臨床資料保存完整；③術前未行放化療等抗腫瘤治療。排除標準：①合并有其他惡性腫瘤者；②卵巢轉移癌。同時選取正常卵巢組織50 份（因宮頸癌或子宮內膜癌切除術后留存），兩組年齡、體重指數比較差異無統計學意義（P>0.05），見表1。本次研究獲得醫院倫理委員會批準，且經患者或家屬知情同意。

表1 兩組一般資料比較（±s）Table 1 Comparison of general data between 2 groups（±s）

表1 兩組一般資料比較（±s）Table 1 Comparison of general data between 2 groups（±s）

組別卵巢癌組織正常卵巢組織t 值P 值n 87 50年齡（歲）49.82±9.22 50.28±9.03-0.283 0.777體重指數（kg/m2）22.04±3.10 21.97±2.94 0.130 0.897

1.2 實驗方法

采用石蠟切片，脫水操作后采用3% H2O2室溫條件下孵育20 min，磷酸鹽緩沖液清洗3 次，每次5 min，磷酸鹽緩沖液稀釋后的山羊血清封閉抗體5 min，倒去血清后不清洗，加入一抗（購自賽默飛世爾中國濃度：1∶1 000）5 mL，37℃孵育2 h，或者放置4℃冰箱過夜孵育，磷酸鹽緩沖液清洗3 次，每次5 min，加入生物素熒光標記的二抗（購自賽默飛世爾中國濃度：1∶2 000）3 mL，37℃孵育20～30 min，磷酸鹽緩沖液清洗3 次，每次5 min，加入Streptavidin/HRP 辣根酶標記鏈霉卵白素，37℃孵育20～30 min，磷酸鹽緩沖液清洗3 次，每次5 min，增強型HRP?DAB 底物顯色試劑盒（PA110）顯色，自來水沖洗，復染，封片。

1.3 判斷標準［6］

采用半定量積分方法進行判斷，對染色強度和陽性細胞比例進行評分，其中染色強度：無著色為0分，淺黃色為1 分，棕黃色為2 分，棕褐色為3 分；陽性細胞比例：≤5%為0 分，6%～10%為1 分，11%～50%為2 分，51%～74%為3 分，≥75%為4 分。染色強度和陽性細胞比例得分之和，分數≥4 分為陽性表達。

1.4 統計學處理

采用SPSS 22.0 統計軟件進行統計分析，計量資料采用（）表示，比較使用t檢驗，計數資料采用n（%）表示，比較使用χ2檢驗，相關性采用Spear?man 秩相關分析，生存分析采用Kaplan?Meier 法。以P<0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 卵巢癌和正常卵巢組織GOLPH3 及PI3K 表達

卵巢癌組織GOLPH3 及PI3K 陽性表達率明顯高于正常卵巢組織，差異均有統計學意義（P>0.05）。見表2、圖1。

圖1 免疫組化染色圖（SP，×400）Figure 1 Immunohistochemical staining diagram（SP，×400）

表2 卵巢癌和正常卵巢組織GOLPH3及PI3K表達［n（%）］Table 2 expression of GOLPH3 and PI3K in ovarian cancerand normal ovarian tissues［n（%）］

2.2 GOLPH3 及PI3K 表達與卵巢癌臨床病理關系

漿液性、FIGO 分期Ⅲ～Ⅳ期、中低分化、有淋巴結轉移卵巢癌組織GOLPH3 陽性表達率明顯高于非漿液性、Ⅰ～Ⅱ期、高分化、無淋巴結轉移卵巢組織，FIGO 分期Ⅲ～Ⅳ期、中低分化、有淋巴結轉移卵巢癌組織PI3K 陽性表達率明顯高于Ⅰ～Ⅱ期、高分化、無淋巴結轉移卵巢組織，差異均有統計學意義（P<0.05）。見表3。

表3 GOLPH3 及PI3K 表達與卵巢癌臨床病理關系［n（%）］Table 3 Relationship between the expression of GOLPH3 and PI3K and clinicopathology of ovarian cancer［n（%）］

2.3 相關性分析

卵巢癌組織GOLPH3 及PI3K 表達呈正相關（rs=0.456，P<0.05）。

2.4 生存分析

GOLPH3 陽性表達患者無進展生存時間為18個月，明顯短于GOLPH 陰性患者的29 個月（χ2=7.998，P=0.005）；PI3K 陽性表達患者無進展生存時間為13 個月，明顯短于PI3K 陰性患者的26 個月（χ2=17.177，P=0.000）。見圖2。

圖2 生存曲線圖Figure 2 Survival curve

3 討論

卵巢癌細胞生物學浸潤及侵襲的能力較強，對于盆腔內或者腹腔內臟器浸潤轉移的風險較高［7］。在多種病理生理機制的激活過程中，卵巢癌細胞生物學行為的改變能夠加劇卵巢癌患者整體臨床預后的惡化［8］。臨床觀察發現，卵巢癌患者多臟器功能衰竭的比例可超過35%，其遠期總體生存時間不足38 個月［9?10］。通過對于卵巢癌生物學行為的調控分析，或者通過對于卵巢癌臨床病理特征影響因素的分析，能夠為臨床上卵巢癌的預后評估提供依據。鑒于近年來惡性腫瘤的免疫靶向治療已經在婦科惡性腫瘤整體治療過程中發揮了重要作用，本次研究將通過分析卵巢癌病灶組織中GOLPH3 及PI3K 的表達，以期為臨床上卵巢癌患者免疫靶向治療提供研究靶點。

GOLPH3 是高爾基體磷酸化修飾蛋白，在高爾基骨架結構蛋白空間構象形成過程中，蛋白磷酸的修飾能夠影響到癌細胞骨架結構的穩定性。GOLPH3 作為蛋白激酶成分，可調控細胞骨架結構，提高癌細胞偽足的形成風險，促進癌細胞的浸潤和轉移過程［11］。PI3K 是磷酸肌醇蛋白激酶成員，能激活下游腫瘤蛋白效應因子，影響PI3K/AKT 信號通路的上調程度。基礎分子生物學領域的分析認為，PI3K 能夠影響癌基因的激活，提高癌基因的轉錄活性，提高腫瘤細胞核DNA 的復制速度［12］。研究證實，PI3K 蛋白的高表達能夠影響婦科惡性腫瘤的發生過程，提高婦科惡性腫瘤細胞的轉移風險［13?14］。但目前對于GOLPH3、PI3K 的表達與卵巢癌臨床分期、淋巴結轉移之間關系的研究相對較少，故本研究針對兩者與臨床病理特征的關系進行研究。

本研究中卵巢癌組織患者免疫組化研究結果提示：GOLPH3 及PI3K 蛋白具有較高的陽性表達率，其表達陽性率明顯高于正常卵巢組織，差異具有明顯的統計學意義，原因可能為：在卵巢癌病情發生發展中由于癌細胞凋亡、周期變化及癌細胞骨架結構的形成造成GOLPH3、PI3K 的異常表達。周艷［15］等研究發現，卵巢癌細胞中PI3K 蛋白的表達陽性率可隨著癌細胞增殖活性的上升而上升，在癌細胞凋亡比例較低或者增殖活性較高的細胞中，PI3K蛋白的表達陽性率可超過65%以上，這一結論與本研究具有相似性。本研究結果表明GOLPH3 能夠顯著影響卵巢癌總體病情進展，可能是由于GOLPH3 能夠加劇卵巢生發上皮細胞對于盆腔內臟器的浸潤風險，提高癌細胞對于引流部位淋巴結的侵襲能力。另外，在漿液性卵巢癌患者中，GOLPH3 蛋白的表達陽性率較高，提示GOLPH3 的表達還具有一定的細胞來源特異性［16］。在臨床分期較晚、淋巴結轉移明顯等患者中，PI3K 蛋白的表達也明顯上升，表明PI3K 的表達也與卵巢癌的病情有關，其機制可能與PI3K 影響到了癌細胞內MAPK 信號通路的激活水平有關［17］。本研究采用Spearman 秩相關分析分析卵巢癌組織中GOLPH3與PI3K 表達成正相關，說明兩者的表達具有一定的內在聯系，臨床可通過檢測卵巢癌病灶組織中GOLPH3 及PI3K 的表達，判斷卵巢癌病變程度，為臨床上患者免疫靶向治療提供依據。本研究還發現GOLPH3 陽性表達患者無進展生存時間為18 個月，PI3K 陽性表達患者無進展生存時間為13 個月，均明顯短于GOLPH、PI3K 陰性患者，說明GOLPH、PI3K3 陽性表達會縮短生存期，可能與患者陽性患者臨床特征有關，這一觀點與以往研究一致［18］。

綜上所述，卵巢癌組織中GOLPH3 及PI3K 表達在疾病發生發展中有重要作用，兩者間存在一定相關性。