磷酸酯酶與張力蛋白同源物、Ki-67 在腦膠質瘤中的表達及與患者預后的關系

張玉富，景蕓蕓，鄔迎喜，張蘊澤，陳隆

空軍軍醫大學第二附屬醫院神經外科，西安 710038

腦膠質瘤屬于神經上皮性腫瘤，病死率較高，是中樞神經系統的原發腫瘤，源于神經外胚層，其特點為呈浸潤性生長或膨脹性生長，與周圍正常腦組織界限不清，手術難以完全切除，且術后復發率較高。據統計，腦膠質瘤的發病率呈逐年上升趨勢[1]。Ⅰ～Ⅱ級膠質瘤生長緩慢，病程長，但術后復發率高。Ⅲ～Ⅳ級膠質瘤生長迅速，病程短，且瘤體占位性效應可引起嘔吐、視神經萎縮和癲癇等。膠質瘤的起病機制較為復雜，常與多種因素密切相關。隨著醫療技術的不斷發展，臨床對膠質瘤的檢查、診斷更為快捷[2]。第10 號染色體缺失性磷酸酯酶與張力蛋白同源物（phosphatase and tensin homolog，PTEN）是近年來發現的腫瘤抑制基因，與腫瘤的發生發展密切相關[3]。Ki-67 是一種抗增殖細胞核蛋白的單克隆抗體，可準確反映細胞增殖活性，用于評價腫瘤的生物學行為[4]。因此，有研究認為，PTEN、Ki-67 與腦膠質瘤的發生發展密切相關[5-6]。因此，本研究探討PTEN、Ki-67 在腦膠質瘤中的表達及與患者預后的關系，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015 年10 月至2018 年12 月空軍軍醫大學第二附屬醫院收治的腦膠質瘤患者。納入標準：①符合腦膠質瘤的診斷標準，經CT、MRI 檢查及術后病理學檢查確診；②均為原發性腦膠質瘤；③未出現遠處轉移。排除標準：①合并血液系統疾病；②合并其他惡性腫瘤；③合并臟器功能異常；④合并免疫系統疾病或結締組織病變。依據納入和排除標準，本研究共納入152 例腦膠質瘤患者，其中男87 例，女65 例；年齡51～80 歲，平均（63.09±6.49）歲；世界衛生組織（WHO）腦膠質瘤分級：Ⅰ～Ⅱ級（惡性程度較低）90 例，Ⅲ～Ⅳ級（惡性程度較高）62 例。本研究經醫院倫理委員會批準通過，所有患者均知情同意并簽署知情同意書。

1.2 免疫組化法檢測PTEN、Ki-67蛋白的表達情況

取152 例腦膠質瘤患者的腫瘤組織及相應的癌旁組織，免疫組化法檢測PTEN、Ki-67 蛋白的表達情況。組織標本切片、脫蠟、水化處理后，浸泡于3%過氧化氫中20 min，封閉其內源性過氧化物酶活性。高壓枸櫞酸鹽抗原修復，溫水清洗后使用磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered solution，PBS）清洗3 次，每次5 min，滴加10%血清以阻斷非特異性結合，37 ℃孵育10 min。滴加一抗兔抗人Ki-67 多克隆抗體（1∶400）、鼠抗人PTEN 單克隆抗體（1∶400），4 ℃過夜，PBS 再次清洗，滴加生物素標記的Ki-67、PTEN 二抗，37 ℃孵育10 min，PBS清洗3 次后，滴加過氧化物酶標記的鏈霉素卵白素工作液孵育10 min。二氨基聯苯胺顯色，蘇木素復染，脫水、干燥后中性樹脂封片，用PBS 代替一抗作為陰性對照。結果判定：選擇5 個不同視野進行全面觀察，每個視野中細胞應不少于200 個，計算每個視野中陽性細胞所占比例。陽性細胞所占比例﹤5%為陰性，陽性細胞所占比例5%～50%為弱陽性，陽性細胞所占比例﹥50%為強陽性，其中弱陽性、強陽性判定為陽性[7]。

1.3 隨訪

采用電話、微信、回院復查等方式對所有患者進行為期1 年的隨訪，記錄并統計患者的預后情況，以全因性死亡或復發再入院為隨訪終點，隨訪截止時間為2019 年12 月，并將全因性死亡或復發再入院作為預后不良的標準，分析腦膠質瘤患者預后的影響因素。

1.4 統計學方法

采用SPSS 22.0 軟件對所有數據進行統計分析，計量資料以均數±標準差（±s）表示，組間比較采用t 檢驗；計數資料以例數和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗；腦膠質瘤患者預后的影響因素采用多元Logistic 回歸分析；以P﹤0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 Ki-67、PTEN 表達情況的比較

腦膠質瘤患者腫瘤組織中Ki-67 的陽性表達率明顯高于癌旁組織，PTEN 的陽性表達率明顯低于癌旁組織，差異均有統計學意義（P﹤0.01）。Ⅲ～Ⅳ級腦膠質瘤患者腫瘤組織中Ki-67 的陽性表達率明顯高于Ⅰ～Ⅱ級患者，PTEN 的陽性表達率明顯低于Ⅰ～Ⅱ級患者，差異均有統計學意義（P﹤0.01）。（表1、表2）

表1 腦膠質瘤患者腫瘤組織和癌旁組織中Ki-67、PTEN表達情況的比較[n（%）]

表2 不同分級腦膠質瘤患者腫瘤組織中Ki-67、PTEN 表達情況的比較[n（%）]

2.2 腦膠質瘤患者預后影響因素的單因素分析

隨訪1 年，152 例腦膠質瘤患者中，預后不良47例，預后良好105 例。單因素分析結果顯示，預后不良和預后良好腦膠質瘤患者年齡、性別、合并高血壓、合并糖尿病、合并冠心病情況比較，差異均無統計學意義（P﹥0.05）；預后不良和預后良好腦膠質瘤患者WHO分級、Ki-67表達情況、PTEN表達情況比較，差異均有統計學意義（P﹤0.01）。（表3）

表3 腦膠質瘤患者預后影響因素的單因素分析

2.3 腦膠質瘤患者預后影響因素的多因素分析

將單因素分析中差異有統計學意義的WHO分級、Ki-67 表達情況、PTEN 表達情況作為自變量，腦膠質瘤患者的預后作為因變量納入多元Logistic 回歸分析，結果顯示，WHO 分級為Ⅲ～Ⅳ級、Ki-67 陽性表達、PTEN 陰性表達均為腦膠質瘤患者預后的獨立危險因素（P﹤0.01）。（表4）

表4 腦膠質瘤患者預后影響因素的多元Logistic回歸分析

3 討論

腦膠質瘤根據臨床病理類型可分為星形膠質細胞瘤、少突膠質細胞瘤、混合型少突星形膠質細胞瘤及室管膜瘤，其中以星形膠質細胞瘤最為常見[8]。統計數據顯示，腦膠質瘤占原發性腦腫瘤的40%～50%，多呈浸潤性生長，治療十分困難[9-10]。雖然影像學檢查技術的不斷進步和顯微神經外科技術的應用對神經外科的發展發揮了明顯的促進作用，但對惡性腦腫瘤的治療似乎并沒有突破性進展，惡性程度較高的膠質瘤患者大多在確診1 年內死亡。近年來，分子生物學認為，腫瘤的發生發展與基因的異常表達密切相關，腫瘤的發生與原癌基因激活及過表達、抑癌基因缺失及突變有關，是細胞增殖和凋亡失衡等多基因參與、多步驟演變的過程，并認為這些基因的變異和失控會導致基因編碼與表型的不恰當表達，以細胞的生長繁殖不受控制為特征[11-13]。

本研究結果顯示，腦膠質瘤患者腫瘤組織中Ki-67的陽性表達率明顯高于癌旁組織，PTEN的陽性表達率明顯低于癌旁組織，與既往研究結果相似[14]。Ki-67是一種與細胞增殖密切相關的核內蛋白，普遍存在于人類增生細胞核中，具有半衰期短的特點，與細胞周期關系密切，還與惡性腫瘤的發生發展、轉移和預后密切相關，Ki-67過表達可反映腫瘤細胞增殖活性過度[15]。PTEN 屬于抑癌基因，具有磷酸酶活性，通過發揮磷酸酶活性來減弱磷酸根活性，阻斷細胞內的信號轉導通路，從而抑制細胞轉化，對腫瘤發生、發展起負調控作用[16]。有研究認為，Ki-67 表達上調、PTEN 表達下調提示膠質瘤病理級別較高[17]。本研究結果顯示，Ⅲ～Ⅳ級腦膠質瘤患者腫瘤組織中Ki-67 的陽性表達明顯高于Ⅰ～Ⅱ級患者，PTEN 的陽性表達率明顯低于Ⅰ～Ⅱ級患者。這可能是因為PTEN屬于抑癌基因，參與調節細胞的正常生長和發育，通過作用于細胞周期蛋白來抑制細胞轉化、促進細胞凋亡，從而抑制腫瘤的發生發展、侵襲和轉移過程；而Ki-67 是一種與細胞增殖密切相關的核內蛋白，其過表達可明顯促進細胞增殖[18-20]。本研究多元Logistic 回歸分析結果顯示，WHO 分級為Ⅲ～Ⅳ級、Ki-67 陽性表達、PTEN 陰性表達均為腦膠質瘤患者預后的獨立危險因素（P﹤0.01）。

綜上所述，腦膠質瘤患者腫瘤組織中Ki-67 的陽性表達率較高、PTEN 的陽性表達率較低，WHO分級為Ⅲ～Ⅳ級、Ki-67 陽性表達、PTEN 陰性表達均為腦膠質瘤患者預后的獨立危險因素。