循環腫瘤干細胞檢測對蒽環類藥物治療乳腺癌療效的評估價值研究

張娟娟，劉小瑜，蔡志兵，李明珠

(福建醫科大學附屬泉州第一醫院腫瘤外科，福建 泉州 362000)

乳腺癌是世界范圍內發病率和死亡率較高的惡性腫瘤之一，也是威脅女性生命健康的第一大惡性腫瘤，給患者生活質量、家庭負擔帶來了極大的影響[1]。目前，對于乳腺癌的治療手段主要包括手術切除、局部放療、化療、內分泌治療以及靶向治療等，均有一定的治療效果。蒽環類藥物是治療乳腺癌的常用化療藥物，其屬于一種拓撲異構酶Ⅱ抑制劑，可通過干擾腫瘤細胞DNA的復制和解旋促進腫瘤細胞的凋亡。需要指出的是，乳腺癌的復發率較高，且90%以上的患者死亡是由于復發轉移導致，極少數患者是由于原位復發致死[2]。循環腫瘤干細胞(CTC)是指腫瘤原發灶脫落進入血液循環系統中的腫瘤細胞，是導致遠處轉移復發的重要原因[3]。因此，檢測血循環系統中的循環腫瘤干細胞(CTC)對乳腺癌患者的療效和預后評估至關重要。本研究選取了我院收治的60例乳腺癌患者為研究對象，探討了CTC檢測對蒽環類藥物治療乳腺癌療效的評估價值。現匯報如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2020年4月-2020年9月我院收治的60例乳腺癌患者為研究對象，其中絕經后22例，絕經前38例；年齡30～71(50.52±8.46)歲；臨床分期：Ⅰ期14例，Ⅱ期27例，Ⅲ期19例。納入標準：①經病理檢查確診為乳腺癌；②KPS評分≥70分；③入組前未進行化療的患者；④臨床資料完整；⑤對本研究用藥和療效評估方式知情同意；⑥依從性良好。排除標準：①除乳腺癌外，存在其他惡性腫瘤的患者；②存在化療禁忌證者；③預計生存時間<6個月；④存在血液系統疾病或免疫系統疾病者；⑤肝、腎、心臟等全身重大器官患有器質性疾病者；⑥近期或正在參與其他臨床試驗者；⑦治療期間因轉院、失訪等因素導致病例脫落者。

1.2 治療方法

協助患者進行全身檢查，包括肝、心、腎臟等重要臟器以及血液系統等，并采用蒽環類藥物輔助化療：給予注射用鹽酸表柔比星(生產廠家：輝瑞制藥(無錫)有限公司，國藥準字H20000496)100mg/m2治療，并給予環磷酰胺600mg/m2(生產廠家：山西普德藥業股份有限公司，國藥準字H14023686)治療，3周為一個周期，連續治療兩個周期。治療期間，給予保肝、營養支持等常規治療，并密切監測患者血常規、肝腎功能及其他不良反應的發生情況。

1.3 CTC檢測

采用膜過濾法檢測CTC：為了避免上皮組織污染，棄去首先抽取的靜脈血2mL，隨后采集靜脈血5mL，上下顛倒充分混勻后在2h內完成CTC檢測。將采集的5mL血液樣本用緩沖液(含0.2%甲醛)稀釋至8mL，隨后固定血液樣本，上機檢測，經過過濾、漂洗、染色等操作后取下濾膜，并置于載玻片上進行干燥封片，采用光學顯微鏡觀察結果。參考膜過濾法檢測CTC的判讀標準進行閱片：①細胞核大小不均勻；②細胞核存在異型性；③細胞核直徑在18μm以上；④染色質可見三維層次；⑤高核質比；若滿足以上5個條件中的任意4條或4條以上，即可判定為CTC，檢測出≥1個CTC即為陽性。為確保閱片的客觀性，由2名專業的醫師采用獨立雙盲的方式閱片，判讀結果一致則納入數據庫，判讀結果相左則加入第3名專業醫師進行閱片討論得出最終結果。

1.4 觀察指標

①比較本組患者化療前后CTC檢測結果。②以病理學Miller-Payne評估結果為金標準，分析CTC評估療效的敏感度和特異度，并分析其與病理學Miller-Payne評估標準的一致性。CTC評估療效判定標準[4]：根據化療前后CTC檢出數目情況進行療效評估，即治療后CTC檢出數目減少判定為CTC評估有效，治療后CTC檢出數目沒有減少判定為CTC評估無效。病理學Miller-Payne評估標準[5]：病理檢查殘留腫瘤細胞無明顯變化，判定為Ⅰ級；殘留腫瘤細胞數量減少幅度為0～30%，判定為Ⅱ級；殘留腫瘤細胞數量減少幅度為31%～90%，判定為Ⅲ級；殘留腫瘤細胞數量減少幅度超過90%，判定為Ⅳ級；其中Ⅰ～Ⅱ級為無效，Ⅲ～Ⅳ為有效。③對本組患者進行隨訪，分析CTC陽性和CTC陰性患者的長期生存率。

1.5 統計學方法

采用SPSS 21.0統計學軟件進行數據分析，計量資料以(%)表示，采用χ2檢驗；采用Kappa檢驗分析CTC評估療效和病理學Miller-Payne評估的一致性；生存分析采用Mantel-Cox檢驗；P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 化療前后CTC檢測結果比較

化療前CTC檢測陽性率為65.0%(39/60)，化療后CTC檢測陽性率為40.0%(24/60)，二者比較差異有統計學意義(χ2=7.519，P=0.006)。見表1。

表1 化療前后CTC檢測結果比較[n(%)]

2.2 CTC檢測對蒽環類藥物化療乳腺癌的療效評估價值分析

CTC檢測評估蒽環類藥物化療乳腺癌療效的敏感度為83.9%(26/31)，特異度為79.3%(23/29)；Kappa檢驗分析顯示，CTC評估療效與病理學Miller-Payne評估標準的一致性中等(Kappa值=0.663，P=0.000)。見表2。

表2 CTC評估療效與病理學Miller-Payne評估標準對比分析

2.3 CTC陽性和CTC陰性患者的生存分析

隨訪時間為2～18個月,中位隨訪時間11個月，其中CTC陰性的乳腺癌患者生存率為91.7%，CTC陽性的乳腺癌患者生存了為83.3%，二者差異無統計學意義(P>0.05)。見圖1。

圖1 CTC陽性和CTC陰性患者的生存分析

3 討論

隨著醫療技術水平的快速發展，靶向治療、免疫治療等新的治療方式在臨床中的應用越來越廣泛，但即使如此，蒽環類藥物仍然是目前治療惡性腫瘤的常用基礎性藥物。臨床上常用的蒽環類藥物主要包括多柔比星、表柔比星、吡柔比星等，這類藥物均屬于細胞周期非特異性藥物，通過嵌入腫瘤細胞DNA雙螺旋后形成可逆性結合，進而影響DNA的復制和解旋，誘導細胞凋亡[6]。近年來，蒽環類藥物聯合其他藥物治療乳腺癌的臨床優勢越來越凸顯，普遍認為通過序貫給藥可發揮協同藥效，提高臨床療效。徐冬梅[7]研究指出，與單一用藥相比，蒽環類藥物聯合紫杉醇治療乳腺癌的臨床療效更為顯著，且不會明顯增加不良反應的發生。但在實際臨床工作中，化療方案和周期的選擇與臨床療效密切相關，尋找一種科學有效的療效評估方式對患者選擇最佳的治療方案、實現個體化治療具有重要的意義。既往主要是通過影像學檢查、切除活檢、細胞學檢查等方式對乳腺癌進行診斷和預后評估，但是病理檢查存在創傷性、低重復性等弊端，而影像學檢查的敏感度、特異性相對降低，都存在明顯的局限性。

CTC屬于一種無創高效的腫瘤負荷指標，甚至有“液體活檢”一說，可以實時、動態地檢測病情變化，有助于為臨床調整化療方案提供參考[8]。在國內的一項研究中，郝帥等[9]學者選取了94例乳腺癌患者為研究對象，通過檢測入組患者化療前后CTC進行療效評估，指出CTC檢測評估療效的敏感度和特異度分別為76.5%、69.8%，并指出CTC陽性檢出率與療效有關，這與本研究結果相似。本研究結果顯示，化療后乳腺癌患者CTC陽性率低于化療前(P<0.05)，且化療后CTC檢測評估乳腺癌治療效果的敏感度和特異度為83.9%、79.3%，與病理學Miller-Payne評估標準的一致性中等(P<0.05)。由此可見，CTC檢測對乳腺癌化療后的效果評估具有顯著的價值，可作為乳腺癌療效評估的有效手段，這在梁志洪等[10]研究中也得以體現。通常來說，病理檢查是乳腺癌療效評估的金標準，但存在一定的滯后性，且屬于有創檢查，而上述研究結果說明了CTC可作為乳腺癌療效評估方式的有效補充。我們觀察到，根據CTC檢測結果，隨訪了CTC陽性組和CTC陰性組患者的長期生存率，發現兩組患者總生存率比較差異不顯著(P>0.05)，這可能與隨訪時間較短、病例數不足等因素有關，需要后續進一步深入探究。

綜上所述，乳腺癌患者經蒽環類藥物化療的CTC變化與療效有關，檢測CTC的變化對評估乳腺癌化療效果具有一定的臨床價值。