氣相色譜-質譜聯用法檢測一種頭孢類藥物原料藥中殘留異硫氰酸甲酯的含量

郭 碩，吳凌蓉，董 穎，林妮妮

(北京新領先醫藥科技發展有限公司，北京 100094)

頭孢菌素類藥物是常見的廣譜抗生素藥物之一，其中第三代頭孢菌素對多數革蘭陰性菌有抗菌作用，可用于敏感菌引起的呼吸道、泌尿道、胃腸道、膽道、腹腔、胸腔、盆腔、骨關節、皮膚軟組織等部位的重癥感染，在臨床上廣泛使用[1]。頭孢他啶、頭孢曲松和頭孢哌酮等第三代頭孢菌素具有抗菌譜廣、對β-內酰胺酶穩定性高的優勢，適用于多種類型的感染性疾病。對于病原不明感染的治療中，一般選用第三代頭孢菌素作為經驗性治療用藥，具有廣闊的市場前景[2]。

頭孢匹胺[3]、頭孢哌酮、頭孢孟多等第三代頭孢菌素的重要中間體甲基巰基四氮唑由異硫氰酸甲酯合成而來[4]。但異硫氰酸甲酯具有高毒性，在歐洲化學品管理局注冊的以口服途徑作用于大鼠的無可見有害作用水平(NOAEL)僅為8mg/kg/d。由此可見，異硫氰酸甲酯的殘留量不僅影響藥物質量，更與用藥安全息息相關。在第三代頭孢菌素中，頭孢菌素A是臨床上應用最為廣泛的藥物之一。因此，有必要建立可靠的方法對頭孢菌素A中異硫氰酸甲酯的殘留量進行嚴格控制。毛跟年等[5]通過氣相色譜-質譜聯用技術，采用面積歸一化法測定了阿膠中的異硫氰酸甲酯的含量、確定了阿膠中構成腥味的主要成分為異硫氰酸甲酯；郭小娜等[6]使用氣相色譜-質譜聯用法對刺山柑果實中的異硫氰酸酯進行定性，并采用氣相色譜法進行定量，3種異硫氰酸酯分離良好且具有良好的線性關系和回收率，但未見靈敏度相關實驗數據；馮義志等[7]利用氣相色譜-質譜聯用法分析番茄和土壤中殘留的異硫氰酸甲酯，方法檢出限為0.02 mg/kg。目前國內外有關異硫氰酸甲酯的分析方法比較有限，尚未見有關檢測藥品中異硫氰酸甲酯殘留量分析方法的報道。因此，亟需建立一種專屬、靈敏、準確的檢測頭孢菌素A中痕量異硫氰酸甲酯殘留的分析方法，為頭孢菌素A的質量控制提供科學依據、為頭孢類藥物的質量控制提供參考。

1 材料與方法

1.1 儀器和試藥

氣相色譜-質譜聯用儀(8890-7000D，安捷倫)；百萬分之一天平(225D-1CN，德國賽多利斯公司)。

異硫氰酸甲酯對照品(純度≥99.67%)廣州雋沐生物股份有限公司；頭孢菌素A原料藥(純度≥99.23%)自制；正己烷(色譜純)Fisher Chemical公司。

1.2 分析條件

色譜條件：HP-5MSUI毛細色譜柱(30m×0.25mm×0.25μm)，程序升溫：初始柱溫為40℃，以10℃/min的升溫速率升至100℃，維持5min，以20℃/min的速率升至220℃；載氣為氦氣，流速1.0mL/min；進樣口溫度：220℃；進樣量1.0μL；進樣方式為不分流進樣。

質譜條件：EI源，電離能量70eV；離子源溫度230℃，四級桿溫度150℃，接口溫度230℃；溶劑延遲2min，定時事件：10.0min后，檢測器關閉；掃描方式MRM，掃描離子對：定量離子對73→71.8，定性離子對71.9→45.1和45→44。

1.3 溶液配制

對照品溶液的配制：取異硫氰酸甲酯對照品適量，精密稱定，加入正己烷稀釋至50 ng·mL-1，過0.22μm尼龍濾膜，于2～8℃保存。

供試品溶液的配制：取頭孢菌素A原料藥適量，精密稱定，加入正己烷稀釋至10 mg/mL，過0.22μm尼龍濾膜，于2～8℃保存。

2 結果

2.1 專屬性考察

將對照品溶液和供試品溶液分別進樣分析，待測物質峰形良好，拖尾因子為1.5，溶劑、樣品基質和待測物質分離均良好，溶劑和樣品基質均不干擾待測物質檢測。

2.2 定量限與檢測限

以正己烷為溶劑，取對照品溶液逐級稀釋，以信噪比(S/N)為10～30時的濃度作為待測物質的定量限；以信噪比(S/N)為3～8時的濃度作為待測物質的檢測限。結果見表1。

2.3 線性范圍和精密度

以正己烷為溶劑，將待測物質配制成濃度為10、20、30、40、50、100 ng·mL-1的溶液，進樣分析。以異硫氰酸甲酯的質量濃度為橫坐標，以各質量濃度對應的峰面積為縱坐標繪制曲線，線性回歸方程為y=174033.5902x-364.7213，線性相關系數(r)為0.9968。選擇50 ng·mL-1的溶液，連續進樣6次，進行精密度測試，RSD值為6.79%。

2.4 準確度

取頭孢菌素A原料藥，精密稱定，分別加入低、中、高3個濃度的標準溶液，過0.22μm尼龍濾膜，進行加樣回收率試驗。每個濃度平行配制3份?；厥章式Y果見表2。

表2 異硫氰酸甲酯的回收率結果(n=3)

3 結論

目前報道的氣相色譜法或氣相色譜-質譜聯用法檢測異硫氰酸酯類化合物使用的色譜柱多為強極性色譜柱[6,8-10]，少部分使用中等極性[5,7]或弱極性色譜柱[11]。異硫氰酸甲酯在強極性色譜柱上峰形良好，且保留時間適中，與各溶劑分離均良好，在弱極性色譜柱上保留較弱，導致保留時間較短，存在與部分低沸點溶劑難分離的可能性。本試驗對三種型號、不同極性(DB-WAXUI、DB-FFAP、HP-5MSUI)的色譜柱進行對比發現，使用強極性色譜柱(DB-WAXUI、DB-FFAP)進行分析時，峰形良好，拖尾因子為1.1，保留時間為5.990min，但頭孢菌素A原料藥與異硫氰酸甲酯分離不佳，對檢測造成干擾；使用弱極性色譜柱(HP-5MSUI)進行分析時，峰形良好，拖尾因子為1.5，保留時間為2.841min，且與頭孢菌素A原料藥分離良好。故在綜合考慮色譜柱極性對分離度的影響、分析時間長短等因素的情況下，選擇HP-5MSUI毛細色譜柱(30m×0.25mm×0.25μm)進行試驗。

使用HP-5MSUI毛細色譜柱進行分析時，由于異硫氰酸甲酯在此色譜柱上保留較弱，部分低沸點溶劑與其分離不佳。本實驗對兩種低沸點溶劑(二氯甲烷、正己烷)進行對比考察：二氯甲烷與異硫氰酸甲酯分離不佳，干擾檢測，經調整升溫程序等色譜條件依舊難以達到良好的分離度；正己烷與異硫氰酸甲酯分離良好，且無雜峰干擾檢測，故選擇正己烷作為本實驗的溶劑。

本文建立了檢測一種頭孢類藥物原料藥中殘留異硫氰酸甲酯含量的檢測方法。該方法專屬性強、靈敏度高、操作簡便且準確可靠，適用于頭孢菌素A原料藥中殘留異硫氰酸甲酯的含量測定，為頭孢類藥物的質量控制以及用藥安全提供了技術支持。