動物源性食品中獸藥殘留的快速篩查

何沖，王彬，孫亞南

陜西省產品質量監督檢驗研究院（西安 710048）

獸藥殘留[1]是指動物產品的任何可食部分所含獸藥的母體化合物及（或）其代謝物，以及與獸藥有關的雜質。獸藥殘留既包括原藥，也包括藥物在動物體內的代謝產物和獸藥生產中所伴生的雜質。若長期食用獸藥殘留物質超標的動物源性食品，會引起毒害作用，造成人體免疫力下降，發生過敏反應，甚至可能致畸、致癌、致突變[2]，對人體危害極大。隨著人們生活水平的不斷提高，科技的不斷發展和普及，消費者對食入體內的食品要求越來越高，對動物源食品從需求型轉變為質量型，獸藥殘留的研究已逐漸成為全世界關注的一個焦點。為保障食品質量安全，需加大對畜禽防疫檢疫的監管力度，進而獸藥殘留檢測分析成為保障食品安全的重要手段[6]。目前，大部分獸藥殘留均采用LC-MS/MS法來檢測，但大部分檢測方法的前處理十分復雜，步驟繁瑣，目標物回收率過低[3-5]。同時不同基質也無法同時處理[7-9]，時間、試劑和耗材的消耗量過大，使得現有方法難以實現大批量樣品的快速檢測[10-12]。

此次試驗分別研究了不同基質中喹諾酮類、β-受體激動劑類以及硝基咪唑類等藥物殘留的檢測，結果表明該方法極大程度地縮短了樣品前處理的步驟，同時該方法檢出濃度低，回收率和精密度高，完全滿足目前獸藥殘留檢測的基本要求，適用于不同基質多種獸藥殘留的快速篩查。

1 試驗部分

1.1 儀器與設備

Thermo Fisher TSQ & Endura超高效液質聯用儀[賽默飛世爾科技（中國）有限公司]；BSA224S電子天平[賽多利斯科學儀器（北京）有限公司]；VOrtex Genie2T漩渦混合器（Scientific IndustriesVortex Genie 2T）；TDZ5-WS離心機（湖南湘儀實驗室儀器開發有限公司）；FV64氮吹儀（得泰儀器科技有限公司）。

1.2 試劑和耗材

甲醇、乙腈、甲酸均為色譜純；所用水為超純水；沙丁胺醇（Salbutamol）、克倫特羅（Clenbuterol）、甲硝唑（Metronidazole）、地美硝唑（Dimetridazole）恩諾沙星（Enrofloxacin）、沙拉沙星（Sarafloxacin）、甲硝唑-D3（Metronidazole）：均為First Standard；沙丁胺醇-D3（Salbutamol-D3）、克倫特羅-D9（Clenbuterol- D9）：均為Bepure標準溶液。

1.3 標準曲線的配制

用甲醇分別將標準物質及同位素內標配制成質量濃度為10 μg/mL的儲備液（-18 ℃避光保存）；分別精確吸取一定量的儲備液配制成質量濃度為200 ng/mL的混合標準溶液和混合內標溶液；用10%的甲醇水稀釋成質量濃度為1，2，5，10，20，50和100 ng/mL的標準工作溶液；每1 mL該標準工作溶液中含有沙丁胺醇-D3、克倫特羅-D9、甲硝唑-D3各10 ng；現配現用。

1.4 樣品前處理

準確稱取2 g（精確至0.01 g）試樣置于50 mL具塞離心管中，加入200 μL混合同位素內標液，渦旋混勻；再加入10 mL純乙腈，渦旋5 min后轉移至振蕩器充分振搖30 min，在高速離心機上以5 000 r/min的速度離心5 min；最后取5 mL上清液，在45 ℃下氮吹至干，準確加入1 mL 10%甲醇水超聲復溶，過0.22 μm濾膜，上機待分析。

空白基質中分別加入一定量標準溶液，使其濃度水平為1，2，5和10 μg/kg，樣品前處理同上。同時做空白試驗。

1.5 液相色譜-串聯質譜檢測

1.5.1 液相色譜條件

色譜柱：Agilent Poroshell 120 EC-C18（2.1 mm× 100 mm，2.7 μm）或性能相當者；流動相：A為含0.1%甲酸水溶液，B為甲醇；梯度洗脫程序見表1；流速：300 μL/min；柱溫：40 ℃；進樣量：5 μL。

表1 梯度洗脫程序

1.5.2 質譜條件

離子源：電噴霧離子源（ESI+）；檢測方式：多反應監測（MRM）；噴霧電壓：3.5 kV（ESI+）；離子傳輸管溫度：350 ℃；霧化器溫度：300 ℃；鞘氣壓力：30 Arb；輔助器壓力：10 Arb；掃氣壓力：0 Arb。

1.6 定性與定量

在相同試驗條件下測定試樣和濃度相近的標準工作溶液，記錄試樣和標準工作溶液中的色譜保留時間，以相對于最強離子豐度的百分比作為定性離子的相對離子豐度。若試樣中檢出與標準溶液中興奮劑保留時間一致的色譜峰，且其定性離子與濃度相當的標準溶液中相應的定性離子的相對豐度相比，偏差不超過表2規定的范圍，可以確定試樣中檢出相應的目標物。

表2 定性確證時相對離子豐度的最大允許偏差

根據試樣中目標物的含量情況，選取濃度相近的混合標準工作液進行液相色譜-質譜/質譜分析。混合標準工作液和待測液中目標物的響應值均在儀器線性響應范圍內。以色譜峰面積按內標法和外標法分別定量。

2 結果與討論

圖1為6種獸藥殘留以及其相對應的內標的標準溶液總離子流圖譜（標準物質濃度均為10 ng/mL，內標濃度為10 ng/mL）。可以看出，目標物在該色譜條件下分離度較好，質譜響應值完全滿足信噪比要求，液相和質譜條件均能滿足后續試驗要求。

圖1 6種獸藥殘留標準物質及內標總離子流圖譜

2.1 線性關系

2.2 準確度和精密度

選取動物源性食品中具有代表性的豬肉和魚肉兩種基質，在樣品中添加不同濃度水平的6種獸藥殘留標準物質進行回收率試驗，結果見表4。試驗結果表明方法在1～10 μg/kg添加濃度范圍內，回收率為60.2%～105.2%。在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不超過算術平均值的20%。

表3 6種獸藥殘留標準物質標準曲線

表4 6種獸藥殘留回收率和精密度

3 結論

試驗分別對豬肉和水產樣品進行了低濃度下目標物的平行試驗、精密度測試和加標試驗。綜合不同基質的復雜性，得出3種獸藥殘留在1～100 ng/mL濃度范圍內線性關系良好，相關系數R2均大于0.999。回收率范圍為60.20%～105.2%，相對標準偏差范圍為1.08%～ 7.21%。與目前國內通用方法相比，研究在滿足對檢出限、回收率和精密度要求的前提下極大地簡化了試驗步驟，縮短了樣品前處理的時間。該方法操作簡便，分析速度快，回收率高，穩定性好，同時試驗對動物源性食品中一次性檢測出不同藥物殘留量都進行了檢測研究，結果表明該方法還具有廣泛的應用性。該方法解決了現有方法中針對大批量、快速地檢測動物源性食品中處理方法的問題。