液相色譜法快速測定黃瓜中克百威及3-羥基克百威殘留

吳新華,盧勇國

(惠東縣農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣中心，廣東 惠州 516300)

黃瓜營養(yǎng)豐富，含有大量的水分和維生素A、維生素C，有美容作用，新鮮黃瓜中的丙醇二酸能夠抑制糖類轉(zhuǎn)化為脂肪，具有減肥和預(yù)防冠心病的作用[1]。克百威是一種廣譜內(nèi)吸殺蟲殺螨劑，它與膽堿酶的結(jié)合不可逆，毒性高[2]。根據(jù)《農(nóng)藥管理條例》及食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定，克百威禁止在蔬菜、瓜果上使用[3]，在農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)督抽查工作中會重點監(jiān)測克百威及其衍生物3-羥基克百威的殘留情況。目前，液相色譜法檢測蔬果中克百威及3-羥基克百威的檢測多使用NY/T 761-2008標(biāo)準(zhǔn)方法[4]。該標(biāo)準(zhǔn)方法檢測準(zhǔn)確，特別適合對復(fù)雜基質(zhì)蔬菜樣品，對于基質(zhì)簡單、檢測農(nóng)藥種類少的檢測，其前處理可以進(jìn)一步簡單優(yōu)化，以提高檢測效率。當(dāng)前，QuEchERS快速處理樣品的方法比較常見，但其使用的吸附材料易對部分農(nóng)藥產(chǎn)生吸附，影響檢測準(zhǔn)確性，同時其研究多需色譜質(zhì)譜聯(lián)用[5-10]，基層檢測機構(gòu)較難實現(xiàn)。因此，結(jié)合現(xiàn)有設(shè)備、針對基質(zhì)較簡單的黃瓜樣品中克百威及其衍生物3-羥基克百威的篩查，研究操作簡單、溶劑損耗小、測定快速的液相色譜儀檢測方法具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

儀器：液相色譜儀1260Ⅱ,美國安捷倫公司；柱后衍生儀Vector PCX,美國 Pickering 公司；高速勻漿機,德國艾卡；樣品粉碎機,德國飛利浦公司；

試劑：克百威、3-羥基克百威，1000.0μg/mL, 農(nóng)業(yè)部環(huán)境質(zhì)量監(jiān)督檢驗測試中心(天津)；氫氧化鈉溶液、OPA試劑，美國 Pickering 公司；乙腈、甲醇，均為色譜純；水為一級水；黃瓜,市售。

1.2 樣品處理

取黃瓜，切塊，充分混勻，放入樣品粉碎機,制成待測樣。準(zhǔn)確稱取 20.0 g 試樣置于離心管中，加入一定量克百威、3-羥基克百威標(biāo)樣，加入氯化鈉 5 g，加入 40 mL 乙腈，18200 r/min 勻漿 2 min，然后 3000 r/min 離心 6 min，使乙腈相和水相分層。吸取分層后的上層清液 4 mL，在 60 ℃ 經(jīng)氮吹至近干，加入甲醇定容至 1 mL，過濾膜裝瓶待測。

1.3 液相洗脫條件

色譜柱為ZORBAX Eclipse Plus C18USP L1 Analytical, 4.6 mm×250 mm；柱溫 42 ℃，進(jìn)樣體積 10 μL；熒光檢測器，入射波長 330 nm，激發(fā)波長 465 nm；梯度洗脫條件 0 min,甲醇15%，2～8 min，甲醇25%，9 min,甲醇40%，10 min，甲醇45%，19～25 min，甲醇80%，26 min，甲醇15%、流量保持 1 mL/min。

1.4 柱后衍生條件

柱后衍生條件同NY/T 761-2008標(biāo)準(zhǔn)，0.05 mol/L 氫氧化鈉溶液，流速 0.3 mL/min;OPA試劑，流速 0.3 mL/min；水解溫度 100 ℃；衍生溫度為室溫。

2 結(jié)果分析

2.1 黃瓜提取液凈化選擇

黃瓜提取液經(jīng)勻漿、離心后取上清液,氮吹、甲醇定容、過濾后裝瓶進(jìn)樣，分析液相色譜圖(圖1)。發(fā)現(xiàn)雜質(zhì)對目標(biāo)物峰無影響，采用無農(nóng)藥殘留黃瓜制備基質(zhì)空白，配制標(biāo)準(zhǔn)曲線，避免基質(zhì)效應(yīng)。

圖1 2種氨基甲酸酯類農(nóng)藥色譜圖

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限

在0.02～1 μg/mL 范圍內(nèi)，使用黃瓜基質(zhì)液配制標(biāo)準(zhǔn)溶液，克百威、3-羥基克百威濃度對應(yīng)峰面積有良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)R均大于0.999，以信噪比等于3對應(yīng)的目標(biāo)化合物濃度作為方法的檢出限，得出方法檢出限分別為 0.008 μg/mL、0.01μg/mL(表1)。

表1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.3 回收率和精密度

對黃瓜樣品添加3種不同濃度標(biāo)準(zhǔn)樣品，做3個平行樣，克百威、3-羥基克百威回收率為82.7%～98.2%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD在1.7%～5.4%(表2)。結(jié)果表明，本方法符合檢測要求。

表2 回收率、相對標(biāo)準(zhǔn)偏差

3 結(jié)論

參考NY/T761-2016蔬菜水果中氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留檢測方法，對黃瓜中克百威、3羥基克百威檢測前處理進(jìn)行了優(yōu)化。結(jié)果表明，直接將提取液氮吹至近干，再用甲醇定容進(jìn)樣檢測，液相色譜圖中目標(biāo)物不受雜質(zhì)影響，整個過程步驟少，農(nóng)藥殘留損失少，回收率較好，且方法簡單。該方法回收率在82.7%～98.2%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD在1.7%～5.4%，滿足定量檢測要求；適合基層檢測單位黃瓜中克百威及3羥基克百威的批量檢測工作。