circRNA_103809 對(duì)結(jié)腸癌SW480 細(xì)胞線粒體功能和炎癥因子水平的調(diào)節(jié)作用①

李 毅 李文忠 師 路 高志勇 王聆宇

（西南醫(yī)科大學(xué)附屬成都三六三醫(yī)院胃腸外科，成都 610097）

結(jié)腸癌（colon cancer，CC）是人類最常見、最具侵襲性的惡性腫瘤之一，其病死率在惡性腫瘤中排名第二［1］。由于其發(fā)展速度快及高度轉(zhuǎn)移性，治療策略受到限制［2］。因此，急需發(fā)現(xiàn)用于早期檢測(cè)、術(shù)后監(jiān)測(cè)和管理的新型生物標(biāo)志物。環(huán)狀RNA（circular RNAs，circRNAs）是一類新型的非編碼RNA，具有閉環(huán)結(jié)構(gòu)且缺乏編碼潛力［3］。隨著高通量測(cè)序方法的發(fā)展，circRNAs 在各種動(dòng)物組織和細(xì)胞樣品中表現(xiàn)出高豐度和高組織特異性表達(dá)［4］。重要的是，已有研究證明circRNA 失調(diào)與多種人類疾病（如神經(jīng)系統(tǒng)疾病和癌癥）有關(guān)［5-6］。據(jù)報(bào)道，circRNA_103809 可促進(jìn)肺癌發(fā)展［7］。circRNA_103809 參與調(diào)控與肝癌和結(jié)直腸癌的發(fā)生［8-9］。在既往研究中，ZHANG 等［10］發(fā)現(xiàn)hsa_circRNA_103809在結(jié)直腸癌中下調(diào)，且與腫瘤分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。然而hsa_circRNA_103809 在結(jié)直腸癌中的功能和機(jī)制尚未在體內(nèi)或體外深入研究。本文主要探究hsa_circRNA_103809 在結(jié)腸癌中的表達(dá)及circRNA_103809對(duì)結(jié)腸癌SW480細(xì)胞的作用。

1 材料與方法

1.1 材料 DMEM培養(yǎng)基、Trizol試劑和4%多聚甲醛溶液（美國(guó)Invitrogen）；10%胎牛血清（FBS，美國(guó)Gibco）；牛血清白蛋白（bovine serum albumin，BSA）（美國(guó)Sigma）；CCK8試劑盒、RIPA裂解液、BCA試劑盒、ECL 發(fā)光液和DAPI 染色液（上海碧云天）；Lipo?fectamine2000轉(zhuǎn)染試劑和反轉(zhuǎn)錄試劑盒（美國(guó)Thermo Fisher）；SybGreenⅠ（上海捷瑞生物）；Annexin-V-PI（美國(guó)BD Pharmingen）；聚偏二氟乙烯（PVDF）膜（美國(guó)Millipore）；兔抗胱天蛋白酶（caspase，cas）-3 抗體多克隆抗體（ab13847）、兔抗caspase-9 單克隆抗體（ab185719）、兔抗Bcl-2單克隆抗體兔抗（ab32124）、兔抗Bax 單克隆抗體兔抗（ab32503）、辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的山羊抗兔IgG（ab205718）、HRP-兔抗小鼠IgG（ab6728）、山羊抗兔IgG（Alexa Fluor?488，ab150077）（英國(guó)Abcam）；小鼠抗Lamin A 單克隆抗體（#86846）、p65 單克隆抗體（#8242）（美國(guó)CST）；BD MitoScreen（JC1）試劑盒（美國(guó)BD Biosci?ences）；超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）和丙二醛（malonaldehyde，MDA）測(cè)定試劑盒（美國(guó)Sigma-Aldrich）；……