QuEChERS-GC-MS/MS法測定植物源性 食品中的百菌清

◎ 王 琴，張若良，王 靜，楊慧敏

（贛州市食品藥品檢測所，江西 贛州 341000）

百菌清是一種多作用位點的保護性廣譜殺菌劑，主要用于葉面噴灑，防治多種作物如蔬菜、果樹和小麥等的多種病害，如早疫病、晚疫病、霜霉病、白粉病和葉斑病等[1-4]。百菌清在蔬菜和水果中的應用廣泛，主要通過抑制孢子萌發和游動孢子運動而起作用。目前百菌清的檢測方法有氣相ECD檢測法，該法前處理需要過柱等，較為煩瑣，且樣品基質干擾較大。本文建立了以QuEChERS為前處理方法，三重四極桿氣質聯用法測定植物源性食品中的百菌清，此法方便快捷且樣品基質干擾較小，能快速、準確地檢測出植物源性食品中的百菌清，檢測結果可為植物源性食品的種植生產和流通監管提供參考[5]。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

樣品均為市場采購，總共有13種，分別是番茄、梨、沃柑、芒果、火龍果、韭菜、大白菜、茄子、辣椒、胡蘿卜、蘋果、香蕉和甜瓜。

標準物質：百菌清（批號：T16A7T13207；HPLC≥98%），源葉生物；環氧七氯B（批號：07102KC），Accustandard；QuEChERS salts（4 g 硫酸鎂+1 g氯化鈉+1 g檸檬酸鈉+0.5 g檸檬酸氫二鈉），深圳逗點生物技術有限公司；QuEChERS凈化管1（150 mg PSA+900 mg MgSO4），深圳逗點生物技術有限公司；QuEChERS凈化管2（150 mg PSA+15 mg GCB+885 mg MgSO4），深圳逗點生物技術有限公司；乙腈為色譜純，乙酸乙酯為農藥殘留級。

1.2 儀器與設備

TQ8050NX 氣相色譜質譜儀，配有電子轟擊源（EI），日本島津公司；BP211D型萬分之一電子天平和HLD-6002百分之一電子天平。

1.3 試驗方法

1.3.1 氣相色譜條件

色譜柱：SHIMADZU SH-RXi-5SilMS毛細管柱（30 m×250 μm×0.25 μm）；載氣：高純氦；碰撞氣：高純氬；柱溫程序：100 ℃保持1 min，以30 ℃·min-1升溫至270 ℃，保持4 min；進樣口溫度：260 ℃；進樣量：1 μL；進樣方式：不分流進樣；進樣量：1 μL。

1.3.2 質譜條件

檢測器增益：相對于調諧結果，+0.30 kV；接口溫度：270 ℃；溶劑延遲：5.0 min；電子轟擊源：70 eV，離子源溫度：200 ℃，接口溫度：280 ℃；動態多反應監測（MRM），百菌清及內標的質譜參數見表1[1]。

表1 百菌清及內標的質譜參數表

1.3.3 溶液的制備

（1）內標溶液的制備。精密稱取環氧七氯B約0.02 g置于10 mL容量瓶中，用乙酸乙酯溶解并稀釋至刻度，制得約2 mg·mL-1環氧七氯B溶液，再精密量取適量環氧七氯B溶液用乙酸乙酯稀釋至5 μg·mL-1內標溶液。

（2）百菌清標準溶液制備。精密稱取百菌清約0.015 g，置于10 mL容量瓶中，用乙酸乙酯溶解并稀釋至刻度；精密量取百菌清標準溶液適量，逐級用空白基質稀釋成質量濃度為 0 μg·mL-1、0.005 μg·mL-1、0.010 μg·mL-1、0.050 μg·mL-1、0.100 μg·mL-1、0.250 μg·mL-1和 0.500 μg·mL-1的百菌清標準系列工作溶液，用0.22 μm濾膜過濾，用于上機測定。

（3）樣品溶液的制備。準確稱取樣品10 g，置于50 mL塑料離心管中，準確加入10 mL乙腈和QuEChERS salt及一顆陶瓷均質子，蓋上離心管蓋，劇烈振蕩1 min后，4 200 r·min-1離心5 min。吸取6 mL上清液加到QuEChERS凈化管1中，對于顏色較深的樣品將6 mL上清液加到QuEChERS凈化管2中，渦旋混勻1 min后，4 200 r·min-1離心5 min，準確吸取2 mL上清液于10 mL試管中，40 ℃水浴中氮氣吹至近干。氮吹管中加入20 μL的內標溶液，1 mL乙酸乙酯復溶，過0.22 μm濾膜，用于上機測定。

2 結果與分析

2.1 線性范圍

取1.3.3（2）的百菌清標準系列工作液，供氣相色譜-質譜聯用儀測定。以標準溶液質量濃度和內標質量濃度的比值為橫坐標，以定量離子峰面積和內標定量離子峰面積的比值為縱坐標，繪制標準曲線，計算回歸方程。當百菌清濃度在0～0.5 μg·mL-1，得到線性回歸方程為Y=8.983 0X-0.067 599，相關系數為0.999 1，線性良好。

2.2 回收率試驗

取陰性樣品（樣品中百菌清結果為未檢出），精密稱取陰性樣品9份，每份取樣量為10 g。將這9份陰性樣品分為3組[6]。每組3份陰性樣品，分別加入百菌清標準溶液適量，3組樣品加標量分別為0.10 μg、0.25 μg、1.25 μg，按1.3.3（3）樣品溶液的制備進行制備，上機測定含量，計算回收率，結果見表2。

表2 回收率測定結果表

2.3 精密度試驗

取標準溶液濃度為0.1 μg·mL-1的百菌清，連續進樣5針，記錄百菌清定量離子峰面積，再分別計算各成分峰面積的RSD。試驗得到5針百菌清標準物質的峰面積平均值為4 938，精密度為1.8%，可見此方法測定百菌清穩定性和重復性良好。

2.4 樣品測定

取13種蔬菜水果每個品種各一批，共計13批，分別按1.3.3（3）制備樣品溶液，供上機測定。百菌清標準圖譜、樣品陰性結果圖譜和樣品陽性結果圖譜（樣品中檢出百菌清）結果分別見圖1、圖2與圖3。

圖1 百菌清標準溶液測定圖譜圖

圖2 陰性樣品測定圖譜圖

圖3 陽性樣品測定圖譜圖

2.5 重復性試驗

取“2.4”項下陽性樣品5份，測定其含量，結果見表3。

表3 重復性試驗結果表

3 結論與討論

3.1 討論

①提取溶劑的選擇。乙腈作為QuEChERS法中最常用的提取溶劑，適用于提取極性范圍較寬的農藥，對蔬菜水果含水量較高的樣品可直接提取。②質譜條件的選擇。

色譜柱應選用強極性的色譜柱，試驗前選用SHIMADZU毛細色譜柱SH-Rtx-1701（30 m×250 μm×0.25 μm），百菌清在50～60 min出峰，時間過長，故采用SHIMADZU毛細色譜柱SH-RXi-5SilMS（30 m×0.25 mm×0.25 μm），百菌清在6.4 min出峰。結合常規農藥殘留檢驗基礎，參考島津農藥數據庫，并以基質加標進行驗證，多反應檢測掃描方式響應高，干擾小，利于植物源性食品中百菌清的檢測。

3.2 結論

本文的樣品制備方法、氣相色譜條件和質譜條件適合百菌清的檢測。其中QuEChERS技術應用于樣品前處理，處理速度快，溶劑使用量少，百菌清回收率以及精確度和準確度高。本文建立的以QuEChERS為前處理方法，三重四極桿氣質聯用法方法能快速、準確地檢測出植物源性食品中的百菌清，為百菌清的檢測提供了一種高效的新方法。