液相色譜-質譜法分析磷酸蘆可替尼中強制降解后的產物

劉發貴，孫麗霞，李敏，劉思光，李鐵健，張貴民（.山東新時代藥業有限公司，山東 臨沂 273400；2.魯南制藥集團股份有限公司，山東 臨沂 276002）

骨髓纖維化實質上是一種骨髓增殖性腫瘤[1]。磷酸蘆可替尼作為一種 JAK抑制劑[2-3]，具有潛在的抗腫瘤和免疫調節活性，用于治療中間或高危骨髓纖維化，包括原發性骨髓纖維化，真性紅細胞增多癥后骨髓纖維化和原發性血小板增多癥后骨髓纖維化的治療[4-5]。磷酸蘆可替尼作為首個骨髓纖維化治療藥物（結構見圖1），也是目前唯一批準針對其發病機制的靶向藥物[6-7]。

圖1 磷酸蘆可替尼化學結構圖Fig 1 Chemical structure of ruxolitinib phosphate

本文主要采用高效液相色譜法（HPLC）和液相色譜-質譜聯用技術（LC-MS）研究磷酸蘆可替尼的強制降解產物，了解其穩定性及降解途徑[8-10]，為藥品的質量控制提供依據。

1 材料

1.1 儀器

安捷倫UPLC串聯6540B Q-TOF色譜-液質聯用儀（安捷倫）；高效液相色譜儀Thermo Ultimate 3000，配DAD檢測器（Thermo）；高效液相色譜儀Waters ALLIANCE e2695，配PDA檢測器（Waters）；電子分析天平（XSR105U/A、XPR10）、pH計（S210）（Mettler Toledo）。

1.2 試藥

乙酸銨（Merck，LC-MS專用，50 g，批號：A1468804117）；氫氧化鈉（批號：2009172）、鹽酸（批號：2103151）、30%過氧化氫（批號：190826）（西隴科學，分析級）；乙腈（Merck，色譜級，批號：I1102930036）；磷酸蘆可替尼（佰麥生物，純度：99.9%，批號：BM20210111）。

2 方法

2.1 液相色譜條件

色譜柱：YMC Triart C18（4.6 mm×150 mm，3 μm）；以水為流動相A，甲醇為流動相B；梯度洗脫（0～5 min，45%B；5～20 min，45%～70%B；20～25 min，70%～75%B；25～26 min，75%～45%B；26～35 min，45%B）；柱溫40℃；流速1.0 mL·min-1；檢測波長230 nm，同時開啟3D數據采集（190～400 nm）；進樣量20 μL。

2.2 色譜-質譜條件[11]

色譜柱：YMC Triart C18（2.1 mm×150 mm，1.9 μm）；以10 mmol·L-1乙酸銨水溶液為流動相A，乙腈為流動相B；梯度洗脫（0～2 min，20%B；2～14.5 min，20%～60%B；14.5～14.6 min，60%～20%B；14.6～20 min，20%B）；柱溫40℃；流速0.3 mL·min-1；檢測波長230 nm；進樣量10 μL。

電噴霧解吸電離源DESI，正離子檢測模式；離子源霧化溫度300℃；毛細管電壓400 V；錐孔電壓45 V；裂解電壓60 V（Fragmentor）；干燥氣流量8 L·min-1；MS掃描范圍50～1600m/z。……