5株假臭草來源內生真菌生物轉化檸檬烯產物分析

梁佩芳，楊道茂

（1.開封大學 醫學部，河南 開封 475000；2.華僑大學 化工學院，福建 廈門 361021）

單萜類物質主要存在于揮發油中，有止痛、抑菌、作昆蟲信息素及昆蟲驅避劑等作用，廣泛應用于醫藥、香料等方面［1］。單萜類化合物由于結構簡單、價格低廉，一直是理想的生物轉化底物。細菌、真菌、酵母菌和植物細胞等都可以充當生物催化劑角色完成對檸檬烯［2］、α-蒎烯和β-蒎烯［3］的轉化工作，在已報道的微生物催化劑中，細菌占41%，真菌占33%［4］。比如：在細菌中，假單胞屬細菌（Pseudomonas sp.）能以D-檸檬烯為唯一碳源和能源轉化合成紫蘇醇［5-6］，繼而進一步氧化成紫蘇醛和紫蘇酸［7-8］。在真菌中，尖孢鐮刀菌（Fusarium oxysporum 152b）可以將R-（+）-檸檬烯和S-（-）-檸檬烯轉化為R-（+）-α-terpineol和limonene-1,2-diol［9］；指狀青霉（Penicillium digitatum）和解脂耶氏酵母（Yarrowia lipolytica）可以將（+）-檸檬烯分別轉化為α-萜品醇（α-terpineol）［10］和紫蘇酸［11-12］；白曲霉可以轉化（+）-檸檬烯，主要轉化產物為異辣薄荷酮［13］。

除了從細菌和真菌菌種庫中篩選具有生物轉化劑功能的微生物外，近年來植物內生真菌在生物催化領域的作用開始受到重視，并且已經有利用植物內生真菌轉化單萜化合物的文獻報道。比如從海藻Bostrychia radicans分離到的內生真菌Botryosphaeria sp.能將外消旋樟腦轉化為6-endo-羥基樟腦、6-exo-羥基樟腦、5-exo-羥基樟腦、5-endo-羥基樟腦、3-exo-羥基樟腦和8-羥基樟腦［14］。火炬松（Pinus taeda）來源的植物內生真菌Phomopsis sp.能轉化1%的檸檬烯合成0.536 g/L香芹酮和2.08 g/L檸檬烯-1,2-二醇，如果用柑橘皮提取物為底物則生成2.10 g/L檸檬烯-1,2-二醇［15］。因此，無論從理論還是從實踐上看，用植物內生真菌生物轉化單萜類化合物具有可行性。

本實驗選取無環單萜的月桂烯、單環單萜的（+）-檸檬烯和（-）-檸檬烯為代表，以假臭草來源的5株內生真菌作為測試菌株，采用GC-MS手段分析轉化產物，以期為工業生物催化尋找合適的微生物菌種。……