南疆地區棗二倍體及其同源四倍體表型性狀比較

劉金霞，劉 盼，米娜瓦爾·亞森，王玖瑞，劉孟軍，閆芬芬

(1.塔里木大學 園藝與林學學院，南疆特色果樹高效優質栽培與深加工技術國家地方聯合工程實驗室，新疆阿拉爾 843300；2.河北農業大學 中國棗研究中心，河北保定 071001)

棗(ZiziphusjujubaMill.，2n=2x=24)為鼠李科(Rhamnaceae)棗屬(ZiziphusMill.)植物，是原產中國優勢特色果樹，其與桃、李、杏、栗并稱為古代五果，栽培歷史有7 000多年之久[1]。棗樹具有抗旱、耐瘠薄、耐鹽堿、早果速豐、經濟壽命長、營養豐富和用途廣泛等突出特點，經濟價值高[2]，是兵團乃至新疆的優勢農業產業和支柱產業。經過近20年迅猛發展，新疆棗樹面積達到47萬hm2，年產量300多萬t，均高居全國首位[3]。但隨著產量的大幅增加，棗樹出現品種結構單一問題，其中兩大制干品種灰棗和駿棗占比90%以上，導致產品供過于求，種植效益大幅下降。因此，篩選培育棗類新型優良品種，進一步豐富南疆地區品種結構，是產業發展的需要。

多倍化是高等植物基因組進化的顯著特征之一，在自然界中廣泛存在并且具有獨特的優勢[4]。果樹中有65%以上都具有多倍化的特征，如梨樹、柑橘、葡萄等，均有多倍體類型[5]，通過加倍的多倍體植株具備葉面積增大、光合速率增強、可溶性固形物增多、口感變好、果實大且無籽，抗性增強等特點[6-7]。另外，多倍體材料還可作為育種材料開展雜交并獲得三倍體、四倍體等多倍體種質材料[8-9]，在倍性育種中發揮重要作用。

本研究以二倍體‘梨棗’和‘酸棗0604’及其同源四倍體為材料，通過在南疆地區引種栽培后，調查分析其葉片、花及果實等表型性狀，找出棗二倍體及其同源四倍體表型性狀差異，以期為南疆地區棗品種選育和棗倍性育種工作提供理論基礎。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

‘梨棗’和‘酸棗0604’及其同源四倍體引自河北農業大學棗資源圃，2018年引種高接于新疆阿拉爾市十團七連果園，砧木為8 a生駿棗。每個品種嫁接3棵，每棵樹3～4個接穗。于2020年嫁接，第2年調查各單株葉片、花及果實等表型性狀。

1.2 試驗方法

1.2.1 葉片及氣孔性狀調查 9月份葉片停長后，取新生棗頭中部二次枝三到四節位的葉片共計30片，利用葉片掃描儀(萬深全功能植物圖像分析儀LA-S)測定葉片長度、葉片寬度、葉面積、葉周長、葉柄長寬、葉柄面積指標。采集成熟葉片，用鑷子取葉片部分表皮，置于載玻片上，滴一滴清水，蓋上蓋玻片后用顯微鏡(GAZERXSP-63)目測鏡微尺測量葉片的氣孔長度、氣孔寬度，并統計視野內的氣孔數量。每個品種30次重復，運用DPS 9.01軟件對測定出的數據進行顯著差異分析。

1.2.2 花性狀調查 于5月中旬盛花期采集二次枝中部棗吊黃蕾期花蕾和綻放期花朵，利用掃描儀(萬深全功能植物圖像分析儀LA-S)測定花蕾直徑、花朵直徑、蜜盤直徑大小，每品種30個重復。盛花期采集半裂期花蕾，采用碘-碘化鉀染色法測定花粉活性[10]。取碘-碘化鉀2 g溶于5～10 mL蒸餾水中，然后加入碘1 g,待全部溶解后定容到200 mL，貯于棕色瓶。將試材萼片展開，用鑷子取其花粉2～3粒置于載玻片，滴1滴碘-碘化鉀試劑，用解剖針混合花粉粒與試劑，蓋上蓋玻片，于顯微鏡(GAZERXSP-63)觀察，取30個視野記錄并拍照。深紅色的為有活力的花粉，淺色或無色為無活力的花粉，每品種30個視野重復。采用血球計數器法測定花粉量大小[11]，用鑷子取各品種花藥30枚放于青霉素瓶中，自然風干使其充分散粉后，加入1%偏大磷酸鈉溶液2 mL，使花藥從花粉中充分分離出來。將處理后的花粉加蓋置于震動儀上充分震蕩1 min左右，使花粉浮于上層。然后用20 μL移液槍取20 μL溶液滴于血球計數板上，于顯微鏡下觀察統計400個小方格的花粉粒數，每個品種重復30次。運用DPS 9.01軟件進行顯著差異分析得出結果。計算公式如下：

單花藥花粉量(粒/花藥)=(400個小方格的總花粒數×1 000×2/0.2)/30

1.2.3 果實性狀調查 于果實全紅期，每個品種選取30個果實，用電子天平測定單果質量和單核質量。

果實縱橫徑：用游標卡尺測量1個縱徑，2個橫徑，計算平均值。

果實硬度：隨機在10個果實上選取3處位置削去果皮，露出果肉，用GY-3型果實硬度計垂直對準待測部位，慢慢施加壓力，讀取數值。

含仁率：調查30個果實中含仁數量。

參照《棗種質資源描述規范和數據標準》進行果皮顏色、果實風味及外觀性狀調查以及DPS 9.05對所得數據進行顯著性分析。

2 結果與分析

2.1 葉片性狀比較

對二、四倍體棗葉片大小性狀進行比較分析可見(表1)。發現2種棗各自同源四倍體葉片寬度增大，較二倍體葉片寬度差異極顯著。四倍體‘酸棗0604’的葉片長、葉周長、葉面積也呈增大趨勢，且與二倍體差異極顯著。‘梨棗’四倍體除葉片寬度增大外其他性狀無顯著變化。因此可知由二倍體加倍后的四倍體植株呈現葉片寬度變大的特點。

表1 棗二、四倍體葉片大小性狀比較Table 1 Comparison of leaf size traits of diploid and tetraploid in Chinese jujube

對二、四倍體棗葉柄大小性狀進行比較分析(表2)，‘酸棗0604’四倍體葉柄面積為7.32 mm2，較二倍體5.92 mm2顯著增大，而葉柄長、葉柄寬上無顯著差異。‘梨棗’二、四倍體葉柄長、葉柄寬、葉柄面積均無顯著差異。

表2 二、四倍體棗葉柄性狀比較Table 2 Comparison of petiole traits between diploid and tetraploid in Chinese jujube

2.2 氣孔性狀比較

通過對氣孔觀察測定(表3)發現，‘酸棗0604’的四倍體保衛細胞最大，長為36.68 μm，寬為25.25 μm。‘酸棗0604’和‘梨棗’的各自同源四倍體的保衛細胞長和寬都極顯著大于二倍體(圖1)。二倍體‘梨棗’的氣孔密度為265.63 個/mm2，四倍體為174.50個/mm2，二倍體‘酸棗0604’的氣孔密度為236.70個/mm2，四倍體為144.65個/mm2，可見2種二倍體棗氣孔密度都顯著大于四倍體。由此可得四倍體植株葉片氣孔大小較二倍體呈變大趨勢，而氣孔密度呈變小趨勢。

表3 二、四倍體棗氣孔大小比較Table 3 Comparison of stomatal size between diploid and tetraploid in Chinese jujube

圖1 二、四倍體棗氣孔大小及氣孔密度比較Fig.1 Comparison of stomatal size and stomatal density between diploid and tetraploid in Chinese jujube

2.3 花性狀比較

對二、四倍體棗花性狀進行比較分析(表4)可見，‘酸棗0604’和‘梨棗’各自的同源四倍體花朵直徑、花朵面積、花蕾直徑和密盤直徑均大于二倍體，二者呈極顯著差異，因此可以得出四倍體棗花直徑、花朵面積、花蕾直徑和密盤直徑均較二倍體呈現變大趨勢。

表4 二、四倍體棗花大小性狀比較Table 4 Comparison of flower size traits between diploid and tetraploid in Chinese jujube

由表5可見，‘酸棗0604’四倍體花粉量達9518粒，較二倍體顯著提升，而‘梨棗’四倍體花粉量達1870粒，較二倍體極顯著降低。2個棗各自的二、四倍體均具有較高的花粉活性，其中‘酸棗0604’四倍體與二倍體之間差異不顯著，‘梨棗’的四倍體花粉活性極顯著低于二倍體，由此可見2個棗品種二倍體加倍變為四倍體后花粉活性下降。

表5 二、四倍體棗花粉活性和花粉量比較Table 5 Comparison of pollen activity and pollen quantity between diploid and tetraploid in Chinese jujube

2.4 果實性狀比較

2.4.1 果實、果核外觀性狀比較 對二、四倍體棗果實和果核外觀性狀進行比較(表6)，可以看出‘酸棗0604’和‘梨棗’各自的二、四倍體整齊度較高，果頂全為凹，梗洼廣度為中度，萼片全為脫落狀態。‘酸棗0604’二、四倍體果實顏色均為赭紅色，果實形狀均為長圓形，柱頭都呈殘存狀態，果實表面光滑。‘梨棗’二、四倍體果實顏色均為紅色，果實為扁柱形，柱頭狀態由宿存變為殘存，二倍體果實表面有隆起，四倍體果實表面光滑。除二倍體‘酸棗0604’果肩是平的以外，四倍體酸棗和二、四倍體‘梨棗’的果肩均為凸起。在果點密度方面，‘酸棗0604’二倍體加倍為四倍體后由密變稀疏，而‘梨棗’果點由密變為中密，果點密度呈變小趨勢(圖2)。‘酸棗0604’二倍體核形為紡錘形、四倍體為橢圓形，‘梨棗’加倍后核形由二倍體的紡錘形變為四倍體的倒紡錘形(圖3)。

圖2 二、四倍體果實外觀性狀Fig.2 Fruit appearance traits between diploid and tetraploid in Chinese jujube

圖3 二、四倍體果核性狀Fig.3 Jujube pit traits between diploid and tetraploid

表6 棗二、四倍體果實外觀性狀比較Table 6 Comparison of fruit appearance traits between diploid and tetraploid in Chinese jujube

2.4.2 果實風味及可食率性狀比較 對二、四倍體棗果實風味及可食率性狀進行調查比較(表7)后發現‘酸棗0604’和‘梨棗’各自的二、四倍體果實可食率均很高，在94%以上。‘酸棗0604’二、四倍體汁液含量少，風味偏酸，果肉顏色綠色，果核含果仁，且四倍體含仁率為1.82%。‘梨棗’二、四倍體果實風味甜，果肉質地由疏松變成酥脆，口感更加優質，四倍體汁液變多，均呈淺綠色果肉。

表7 二、四倍體棗果實風味及可食率性狀比較Table 7 Comparison of fruit flavor and edible rate between diploid and tetraploid in Chinese jujube

2.4.3 果實大小性狀比較 通過對二、四倍體棗果實的鮮果質量、果實縱橫徑、果實硬度和單核質量的測定可得四倍體果實較二倍體果實變大。由表8可見，‘酸棗0604’和‘梨棗’四倍體果實的單果質量和果實橫徑均大于二倍體果實，且差異極顯著。其中‘梨棗’四倍體單果質量可達45.76 g，較二倍體單果質量顯著增大；‘酸棗0604’四倍體單果質量達11.56 g，二倍體質量7.98 g，可見四倍體果實較二倍體顯著增大。‘酸棗0604’四倍體果實單核質量為0.37 g，二倍體為0.22 g，四倍體大于二倍體且差異極顯著。可見四倍體棗果實相對于二倍體呈變大趨勢。

表8 二、四倍體棗果實大小比較Table 8 Comparison of fruit size between diploid and tetraploid in Chinese jujubes

3 討論與結論

果樹多倍化是由于染色體增加一般表現出枝粗、葉大、花大和果大等巨大型特征[12]。本研究發現‘酸棗0604’和‘梨棗’各自的同源四倍體葉片寬度、葉面積及葉片厚度均顯著大于二倍體植株，葉色較二倍體顏色變深。四倍體保衛細胞變大，氣孔密度變小，與二倍體差異極顯著。四倍體植株花朵大小和花蕾大小較二倍體明顯變大，花粉活性呈降低變化。四倍體果實外觀形態表現為果點密度稀疏，果實表面光滑，果實和果核顯著性增大等變化。可見，在南疆地區引種同源四倍體表現出葉片變大、葉形指數變小、葉片厚、氣孔增大，氣孔密度降低，花和果實器官增大等特征，與河北等地區栽培表現一致[13]，表明四倍體棗引種后多倍體形態特征表現穩定。

劉平等[14]通過對四倍體與二倍體棗花及花粉特性的比較發現，四倍體辣椒棗的花粉量明顯少于二倍體，四倍體冬棗和四倍體臨猗‘梨棗’的花粉量變化不明顯。本研究發現‘梨棗’四倍體花粉量較二倍體極顯著降低，而‘酸棗0604’四倍體花粉量較二倍體顯著增大，原因可能是栽培地區環境差異不同導致，也可能是嫁接第二年花期表現不穩定所致。吳改娥[13]研究發現四倍體花粉活性較二倍體降低，與本研究結果表現一致。表明同源四倍體棗在不同栽培區域均存在減數分裂異常的現象，這可能是導致其花粉育性降低的主要因素。研究發現兩種棗的同源四倍體具有花粉育性，可以作為親本開展雜交育種，是南疆地區理想的倍性雜交育種材料。

劉慶忠等[15]研究發現，四倍體嘎拉蘋果的單果質量、果實縱徑和橫徑、果柄粗度極顯著高于二倍體，果實明顯變大。劉穎等[16]通過調查天然二、四混倍體棗后發現同源四倍體冬棗具有果實變大，果形指數變小，果實維生素C含量增加，果實可溶性糖和可滴定酸含量變化無規律等特點。本研究也發現2種棗同源四倍體果實在橫徑、單果質量等方面都極顯著大于二倍體果實，果實的可食率增加，果肉含汁量、口感風味上都優于二倍體，同時發現‘酸棗0604’四倍體的含仁率為 1.82%，可以獲得種子。可見隨著染色體加倍，棗同源四倍體的果實性狀得到提升，這在今后的生產實踐中具有直接利用價值。