急性淋巴細(xì)胞白血病P-gp、CD31及LDH水平變化及臨床意義

汪明利，楊麗萍，黃 剛，黃亞麗

急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)是由于分化極差或未分化的淋巴細(xì)胞在造血組織無(wú)限增殖所致的惡性血液病。ALL以兒童為主，但目前成年人發(fā)病率呈逐漸增高趨勢(shì)[1]。大量研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)失衡是腫瘤細(xì)胞可免疫逃逸的機(jī)制之一，且ALL患者體內(nèi)細(xì)胞因子水平與其發(fā)病、預(yù)后密切相關(guān)[2]。P-糖蛋白(P-gp)具有能力依賴性“藥泵”作用。CD31是ALL患者常見(jiàn)的一種髓系抗原。而乳酸脫氫酶(LDH)在ALL發(fā)生、發(fā)展中具有重要作用。目前已有研究認(rèn)為ALL患者P-gp、CD31及LDH水平變化與其病情進(jìn)展、預(yù)后具有密切聯(lián)系[3]。本研究對(duì)上述因子在ALL患者中的表達(dá)進(jìn)行觀察，分析其對(duì)預(yù)后復(fù)發(fā)預(yù)測(cè)價(jià)值。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集本院2016年1月—2020年7月收治的76例ALL的臨床資料。納入標(biāo)準(zhǔn)：符合ALL相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]；臨床相關(guān)資料無(wú)缺損或丟失；未合并其他惡性疾病者；入組前未行化療、放療等治療者。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他免疫系統(tǒng)疾病者；合并心肌梗死、心肌病、腦血栓等疾病者；合并全身變態(tài)反應(yīng)性疾??；意識(shí)、溝通嚴(yán)重障礙者。將76例ALL納入ALL組。另選取同期在本院進(jìn)行健康體檢的健康人員56例作為對(duì)照組。2組一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)執(zhí)行。

1.2方法

1.2.1P-gp、CD31檢測(cè)：ALL組檢測(cè)試劑為鼠抗人P-gp單克隆抗體，兔抗人CD31多克隆抗體，均購(gòu)自北京中杉金橋生物工程有限公司。入組時(shí)常規(guī)骨髓穿刺，抽取2 ml骨髓液，置于肝素抗凝管中，PBS稀釋，注入含有3 ml淋巴細(xì)胞分離液的離心管上層，2000 r/min,20 min后分離單個(gè)核細(xì)胞，PBS洗滌，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度為1×106/L，待檢。于P-gp測(cè)定管中加入P-gp抗體，CD31測(cè)定管中加入CD31抗體，PBS洗滌，加入500 μl PBS混勻，隨后采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)。P-gp表達(dá)量以2%為界限[5]，≤2%為陰性，>2%為陽(yáng)性。CD31通過(guò)CD45/SSC設(shè)門對(duì)幼稚細(xì)胞群識(shí)別，幼稚細(xì)胞群核抗原、胞質(zhì)抗原≥10%，表達(dá)膜抗原≥20%為陽(yáng)性。對(duì)照組于清晨空腹抽取靜脈血5 ml，采用四色直接免疫熒光流式細(xì)胞術(shù)、使用FC500流式細(xì)胞儀檢測(cè)抗原CD31、P-gp。判斷標(biāo)準(zhǔn)同ALL組。

1.2.2LDH檢測(cè):空腹抽取所有受檢者5 ml靜脈血，4 ℃下離心機(jī)離心，3000 r/min,10 min后留取上層血清，立即送檢或-80 ℃低溫保存待檢。全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)LDH,>268 U/L為陽(yáng)性。

1.2.3ALL治療:初治ALL患者均采用長(zhǎng)春新堿+柔紅霉素+潑尼松方案化療，復(fù)發(fā)患者采用長(zhǎng)春新堿+阿霉素+地塞米松方案治療。全緩解期患者予腰穿及鞘內(nèi)注射預(yù)防中樞神經(jīng)系統(tǒng)白血病。

1.3觀察指標(biāo) 比較2組P-gp、CD31及LDH表達(dá)情況。對(duì)患者進(jìn)行1年電話或門診隨訪，分析其預(yù)后復(fù)發(fā)情況，比較復(fù)發(fā)、未復(fù)發(fā)者P-gp、CD31及LDH表達(dá)情況，并分析其對(duì)預(yù)后復(fù)發(fā)的預(yù)測(cè)價(jià)值及影響ALL預(yù)后復(fù)發(fā)的危險(xiǎn)因素。

2 結(jié)果

2.1P-gp、CD31及LDH表達(dá) ALL組P-gp、CD31、LDH陽(yáng)性表達(dá)率高于對(duì)照組(P<0.01)。見(jiàn)表1。

表1 ALL組和對(duì)照組P-gp、CD31及LDH表達(dá)情況[例(%)]

2.2不同預(yù)后患者P-gp、CD31及LDH表達(dá)情況 76例ALL經(jīng)1年隨訪，其中復(fù)發(fā)31例(復(fù)發(fā)組)，未復(fù)發(fā)45例(未復(fù)發(fā)組)。復(fù)發(fā)組P-gp、CD31、LDH陽(yáng)性表達(dá)率高于未復(fù)發(fā)組(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 不同預(yù)后ALL患者P-gp、CD31及LDH表達(dá)情況[例(%)]

2.3ALL預(yù)后復(fù)發(fā)的影響因素分析 年齡≥35歲及Ph染色體、P-gp、CD31、LDH陽(yáng)性為影響ALL患者預(yù)后復(fù)發(fā)的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.01)。見(jiàn)表3。

表3 ALL預(yù)后復(fù)發(fā)影響因素分析

2.4P-gp、CD31及LDH預(yù)測(cè)ALL預(yù)后復(fù)發(fā)的價(jià)值 ROC曲線分析結(jié)果顯示，P-gp、CD31、LDH單獨(dú)預(yù)測(cè)的曲線下面積(AUC)均低于三者聯(lián)合檢測(cè)(P<0.01)。見(jiàn)表4。

表4 P-gp、CD31及LDH對(duì)ALL預(yù)后復(fù)發(fā)的預(yù)測(cè)價(jià)值

3 討論

近年來(lái)，隨著分子生物學(xué)的不斷進(jìn)步與發(fā)展，大量學(xué)者發(fā)現(xiàn)P-gp、CD31及LDH等因子可能對(duì)ALL進(jìn)展、患者預(yù)后有一定影響。本研究結(jié)果顯示，ALL組P-gp、CD31、LDH陽(yáng)性表達(dá)率高于對(duì)照組。提示P-gp、CD31及LDH在ALL的發(fā)病、進(jìn)展中具有重要作用，其檢測(cè)可能有助于對(duì)患者預(yù)后進(jìn)行評(píng)估。

P-gp是目前為止研究較透徹的耐藥蛋白之一，同時(shí)也是一種跨膜蛋白。WATANABE等[6]發(fā)現(xiàn)，在口腔癌、直腸癌等惡性腫瘤中，P-gp表達(dá)水平隨其惡性程度增高而增高，化療效果差，復(fù)發(fā)率高，反之亦然。CD31是ALL患者常見(jiàn)的一種髓系抗原。CD31除在髓系細(xì)胞中有所表達(dá)外，在淋巴細(xì)胞成熟的早期階段亦存在表達(dá)。既往報(bào)道指出，CD31抗原可抑制原始淋巴細(xì)胞凋亡，誘發(fā)白血病[7]。GRZYWOCZ等[8]研究顯示，CD31與ALL患者預(yù)后具有一定聯(lián)系，其陽(yáng)性率越高，復(fù)發(fā)率越高，且誘導(dǎo)緩解率越低。LDH主要由腫瘤、白血病細(xì)胞分泌。白血病細(xì)胞負(fù)荷高，相應(yīng)的細(xì)胞凋亡增多。故LDH從死亡及瀕臨死亡的腫瘤細(xì)胞內(nèi)釋放增多，導(dǎo)致血清LDH表達(dá)增高[9]。本研究結(jié)果顯示，ALL組LDH陽(yáng)性表達(dá)率高于對(duì)照組，其原因可能為白血病細(xì)胞負(fù)荷過(guò)高。

近年來(lái)，在ALL中開(kāi)展了對(duì)P-gp、CD31及LDH的研究，但結(jié)果存在一定爭(zhēng)議。SHAABAN等[10]發(fā)現(xiàn)，P-gp陽(yáng)性表達(dá)者預(yù)后與P-gp陰性表達(dá)者比較無(wú)差異。JURCZYSZYN等[11]報(bào)道顯示，CD31表達(dá)增高可能是ALL患者預(yù)后復(fù)發(fā)的危險(xiǎn)因素之一，并提示預(yù)后不良。AGAIAN等[12]發(fā)現(xiàn)P-gp、LDH異常表達(dá)是導(dǎo)致ALL患者預(yù)后差的重要因素。本研究中，P-gp、CD31及LDH均是導(dǎo)致ALL患者預(yù)后復(fù)發(fā)的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，且ROC曲線分析示，聯(lián)合檢測(cè)上述因子可有效預(yù)測(cè)ALL患者預(yù)后復(fù)發(fā)情況，可作為評(píng)估預(yù)后的有效輔助指標(biāo)。

綜上所述，P-gp、CD31及LDH異常表達(dá)是ALL發(fā)生、發(fā)展的重要機(jī)制之一，可作為判斷ALL患者預(yù)后復(fù)發(fā)的參考指標(biāo)。