IAV絕對(duì)定量PCR構(gòu)建及其在體外感染巨噬細(xì)胞中的實(shí)驗(yàn)研究*

闕 婷，藍(lán) 利,2，張瀟劍，袁江浪，孔星星，樊曉暉，張?jiān)龇澹?深,2△，羅小玲△

（廣西醫(yī)科大學(xué) 1.基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院；2.廣西高校基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，南寧 530021）

甲型流感病毒（IAV）屬正黏病毒科，是一種能在呼吸道黏膜上皮細(xì)胞中增殖，并引起呼吸道感染的單股負(fù)鏈RNA病毒[1]。由于病毒基因組具有較高的變異率，導(dǎo)致遺傳抗原漂移和基因重組，使病毒復(fù)制能力和宿主致病性及范圍均發(fā)生改變，從而實(shí)現(xiàn)跨種屬感染和傳播[2-3]。有報(bào)道稱，在人類和動(dòng)物模型中，流感病毒感染宿主導(dǎo)致不良臨床結(jié)局通常與促炎細(xì)胞因子和趨化因子升高有關(guān)，輕者僅表現(xiàn)亞臨床的上呼吸道感染，重者可為致命的下呼吸道感染，并進(jìn)展為呼吸道窘迫綜合征（ARDS）等多器官衰竭，甚至死亡[4]。

巨噬細(xì)胞是感染免疫機(jī)制研究中重要的細(xì)胞類型[5]。體外人源誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞主要包括2 個(gè)來源，即外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）和人髓系急性白血病單核細(xì)胞（THP-1）。選用人PBMC原代巨噬細(xì)胞作為體外模型構(gòu)建，更能接近人生理狀態(tài)，但是其數(shù)量難以滿足實(shí)驗(yàn)需求。目前，病原學(xué)檢測是IAV 的篩查、確認(rèn)的重要檢測手段。由于病原分離培養(yǎng)的條件和技術(shù)水平高、周期長，病毒量的收獲易受環(huán)境和樣本質(zhì)量的影響，不利于在常規(guī)實(shí)驗(yàn)室開展[6]。因此，本研究擬建立實(shí)時(shí)熒光PCR（RT-qPCR）絕對(duì)定量法準(zhǔn)確、快速檢測IAV 拷貝數(shù)，以THP-1 體外誘導(dǎo)分化為巨噬細(xì)胞（Mφ），初步研究IAV 感染Mφ 后的細(xì)胞活性和病毒復(fù)制水平，為后續(xù)研究IAV與宿主固有免疫的相互作用機(jī)制奠定基礎(chǔ)。……