轉(zhuǎn)錄因子EB在病毒性心肌炎B細(xì)胞中的表達(dá)及機(jī)制研究*

盧飛玉，韋 斌，孔 清，黃 凱，伍偉鋒

（廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院心內(nèi)科，南寧 530021）

病毒性心肌炎（viral myocarditis，VMC）是由嗜心肌病毒感染引起的心肌炎癥性疾病，其中以柯薩奇病毒B3（coxsackie virus B3，CVB3）感染最為常見，可導(dǎo)致擴(kuò)張型心肌病和充血性心力衰竭[1]。本課題組前期研究表明，B細(xì)胞在VMC的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮了重要的作用[2-4]。B細(xì)胞的生長(zhǎng)發(fā)育成熟以及穩(wěn)態(tài)維持中均存在自噬依賴性[5]。近期文獻(xiàn)報(bào)道轉(zhuǎn)錄因子EB（TFEB）是一個(gè)自噬相關(guān)的因子[6]，在多種心血管疾病中均有表達(dá)，參與了自噬相關(guān)的信號(hào)通路傳導(dǎo)[7-8]。但TFEB 在VMC 的B 細(xì)胞中表達(dá)和其作用機(jī)制如何，目前較少見相關(guān)報(bào)道。因此，本研究通過(guò)建立VMC 小鼠模型，檢測(cè)VMC 小鼠B 細(xì)胞中TFEB的表達(dá)和自噬標(biāo)志蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ相對(duì)表達(dá)量；并觀察脾臟B細(xì)胞（VMC-B細(xì)胞）在自噬誘導(dǎo)劑的作用下TFEB 的表達(dá)變化及其與自噬的關(guān)系，以探討TFEB 在VMC-B 細(xì)胞中的表達(dá)及其機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料

SPF 級(jí)4 周齡雄性BALB/c 小鼠購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司。本實(shí)驗(yàn)所涉及的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均通過(guò)廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理學(xué)會(huì)審批。CVB3 Nancy株由廣西醫(yī)科大學(xué)附屬微生物學(xué)教學(xué)研究室提供。小鼠CD19 MicroBeads購(gòu)自德國(guó)Miltenyi Biotec公司，胎牛血清和RPMI 1640培養(yǎng)基購(gòu)自美國(guó)Gibco 公司，海藻糖購(gòu)自美國(guó)Sigma-Aldrich公司，所有一抗均購(gòu)自英國(guó)Abcam公司。

1.2 方法

1.2.1 VMC 小鼠模型建立與分組 將BALB/c 小鼠隨機(jī)分為VMC 組和對(duì)照組，每組8 只。VMC 組按既往文獻(xiàn)[3]方法擴(kuò)增病毒，8 只BALB/c 小鼠腹腔注射含102TCID50 CVB3病毒液的0.1 mL磷酸鹽緩沖鹽水（PBS），其中含有大約105個(gè)空斑形成單位（PFU）。對(duì)照組同一天接受相同劑量的PBS。注射病毒的當(dāng)天被認(rèn)為是第0 天。……