大棗炒炭后主要活性成分含量變化研究*

劉世軍，魯 靜

陜西中醫藥大學/陜西省中藥資源產業化協同創新中心/秦藥特色資源研究開發國家重點實驗室（培育）/陜西省創新藥物研究中心，陜西 咸陽712083

大棗為鼠李科棗屬植物棗Ziziphus jujubaMill.的干燥成熟果實。秋天果實成熟變紅時采收，攤開自然曬干。具有補中益氣，養血安神功效，常用于脾虛少食，乏力便溏，婦人臟躁等癥［1］。因產地、品種、生長環境、采摘時間不同，大棗中化學成分的含量存在差異。大棗中主要含有三萜類、皂苷類、生物堿類、黃酮類、糖類、維生素類、礦物質元素等［2］。現代藥理研究發現大棗具有抗過敏、抗氧化、抗衰老、保肝、鎮靜及抑制腫瘤等作用；另外，大棗中含有的環磷酸腺苷（cyclic adenosine monophosphate，cAMP）和環磷酸鳥苷（cyclic guanosine monophosphate，cGMP）具有抗心律失常，抑菌保肝、降低血糖和膽固醇等作用。大棗炒炭后起健脾止瀉作用，從而抑制其滋膩礙胃不易消化的缺點，又不影響其補氣補血功效。炒炭后大棗外部的一層碳化部分具有一定的吸附作用［3］。通過消化道進入人體后可吸附人體內有害物質，起排毒作用，因此炒炭后大棗產生止血，收斂作用。由于大棗炒炭后主要活性成分含量變化文獻研究較少，本課題組對大棗炒炭后主要活性成分含量變化進行研究，為闡明大棗炮制原理提供線索。

1 材料

1.1 大棗來源大棗（陜西合陽，新疆和田）。

1.2 試劑濃鹽酸（西安三浦化學試劑有限公司）；甲醇、冰醋酸、NaOH、乙酸乙酯、高氯酸、Folin試劑均購自天津市天力化學科技有限公司；九水硝酸鋁（成都市科隆化學品有限公司）；香草醛（天津市科密歐化學試劑有限公司）；無水乙醇（安徽安特食品股份有限公司）；對照品蘆丁（批號：16122801）與齊墩果酸（批號：16051205）均購自陜西樂博生化科技有限公司；沒食子酸（批號：B20851）與蓮心堿（批號：B20730）均購自上海源葉生物科技有限公司，所用化學試劑均為分析純。

1.3 儀器電子分析天平（賽多利斯儀器有限公司）；電熱鼓風干燥箱、MH-500 型調溫型電熱套、KSW 型電爐溫度控制器、箱式電阻爐、DZKW-4 型電子恒溫水浴鍋均購自北京科偉永興儀器有限公司；TGL-20B 型高速臺式離心機（上海安亭科學儀器廠）；高速萬能粉碎機（天津鑫博得儀器有限公司）；島津UV-2600 型紫外可見分光光度儀（日本島津公司）；KQ-300DE 型數控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；C21-HT2109 型多功能電磁爐（廣東美的生活電器制造有限公司）；WFH-201B 型紫外透射反射儀（上海精科實業有限公司）。

2 方法與結果

2.1 大棗炒炭將大棗凈選，去核，切厚片，置于干凈托盤內，攤開，于50℃烘箱內干燥。將干燥后的大棗厚片置炒鍋內，用武火加熱，炒至表面焦黑色，內部黃褐色，噴淋少許清水，滅盡火星，略炒，取出晾干，篩去碎屑［4］。將大棗生品及炒炭品分別用粉碎機粉碎。生品和炒炭品的水分控制在5%以下。

2.2 供試樣品制備準確稱取各樣品0.5 g，轉入50 mL離心管中。分別加80%甲醇溶液5 mL，100 W超聲提取30 min，離心半徑13.5 cm，4000 r/min離心10 min，收集上清液，殘渣用上述方法再提取1次，合并上清液后過濾，濾液定容至10 mL，備用［5］。

2.2.1 總酚標準曲線制備及含量測定精密稱量沒食子酸對照品1 mg，用蒸餾水溶解且定容至10 mL，得濃度0.1 mg/mL 的對照品溶液，準確量取上述標準溶液0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL置于10 mL 容量瓶中，用蒸餾水補充至約6 mL，搖勻后加入濃度為50%的Folin酚試劑0.5 mL，搖勻后靜置1 min，加入1.5 mL 的20%Na2CO3溶液，混勻定容至10 mL，在水浴鍋內75℃恒溫反應10 min，取出冷卻至室溫，在760 nm處測定吸光度［6］。見圖1。

圖1 總酚標準曲線

精密量取各樣品80%甲醇提取液0.1 mL 轉入10 mL容量瓶中，用蒸餾水補充至約6 mL，搖勻后加入濃度為50% 的Folin酚試劑0.5 mL，搖勻后靜置1 min，加入1.5 mL 的20% Na2CO3溶液，混勻定容至10 mL，在水浴鍋內75℃恒溫反應10 min，取出冷卻至室溫，于760 nm波長處測定其吸光度［5］。見表1。

表1 大棗樣品中總酚含量比較

表1 中各樣品大棗總酚含量表明大棗在炒炭后總酚的含量有所增加，新疆大棗生品及炒炭后總酚的含量均高于陜西大棗生品。

2.2.2 總黃酮（蘆丁）標準曲線制備及含量測定取蘆丁對照品2 mg，80%甲醇溶解且定容至10 mL的容量瓶中，得0.2 mg/mL的蘆丁標準溶液，分別量取蘆丁標準溶液0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL置10 mL容量瓶中，再用80%甲醇溶液補充至5.0 mL，加入5% NaNO2溶液0.3 mL，搖勻靜置6 min 后再加0.3 mL10% Al（NO3）3溶液，搖勻，靜置6 min 后加入4 mL 1 mol/L 的NaOH溶液，混勻后再使用80%甲醇溶液定容至10 mL，再次搖勻，10 min后在510 nm波長處測定吸光度［6］。見圖2。

圖2 蘆丁標準曲線

精密量取80%甲醇提取液2.0 mL（炒炭樣品為1.0 mL），再用80%甲醇溶液補充至5.0 mL，加入5% NaNO2的溶液0.3 mL，搖勻，靜置6 min 后再加0.3 mL10%硝酸鋁溶液，搖勻，靜置6 min 后加入4 mL 1 mol/L的NaOH溶液，混勻后再使用80%甲醇溶液定容至10 mL，再次搖勻，10 min 后在510 nm波長處測定吸光度。見表2。

表2 大棗樣品中總黃酮（蘆丁）的含量比較

從表2 中各樣品大棗總黃酮含量可以看出大棗炒炭后總黃酮的含量增加，新疆大棗生品總黃酮含量低于陜西大棗生品，新疆大棗炒炭后總黃酮含量高于陜西大棗炒炭后。

2.2.3 總三萜（齊墩果酸）標準曲線制備及含量測定精確稱取齊墩果酸對照品1.0 mg，置于10 mL容量瓶中，80%甲醇溶解并定容。最后得到濃度為0.1 mg/mL的齊墩果酸對照品溶液，分別依次精密取對照品溶液0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL置于10 mL容量瓶中，水浴揮干80%甲醇溶劑，分別加入0.4 mL5%的香草醛冰醋酸溶液及高氯酸試劑1.6 mL，混勻后放于90℃水浴反應15 min，取出冷卻至室溫，乙酸乙酯定容，搖勻，560 nm處測吸光度［5］。見圖3。

圖3 齊墩果酸標準曲線

精密量取各樣品80%甲醇提取液0.1 mL 并稀釋5 倍置于10 mL 容量瓶中，水浴揮去溶劑后，再分別加入0.4 mL5%的香草醛冰醋酸溶液，高氯酸試劑1.6 mL，混勻后置于90℃水浴反應15 min，取出冷卻至室溫，乙酸乙酯定容，搖勻，在560 nm 波長處測定吸光度［6］。見表3。

表3 大棗樣品中總三萜（齊墩果酸）的含量比較

表3中各大棗樣品總三萜含量表明大棗炒炭后總三萜的含量增加，新疆大棗生品中的總三萜含量略小于陜西大棗生品。

2.2.4 總生物堿（蓮心堿）標準曲線制備及含量測定 精密稱量2 mg 蓮心堿對照品置于10 mL 容量瓶中，無水乙醇溶解并定容10 mL，得0.2 mg/mL蓮心堿對照品溶液。分別量取0、1.2、1.5、1.8、2.1、2.4 mL對照品溶液置于10 mL容量瓶中，無水乙醇定容，282 nm處測定吸光度［7］。見圖4。

圖4 蓮心堿標準曲線

配制1%鹽酸250 mL，1%氫氧化鈉300 mL 備用；分別稱取各樣品0.5 g 于離心管中，每個離心管中分別加入10 mL1%鹽酸，調節pH=2，浸泡2 h，使生物堿形成生物堿鹽溶于酸水中。堿化：每個離心管中分別加入1%氫氧化鈉，調節pH為9～10，游離生物堿；有機溶劑萃取：分別加入無水乙醇15 mL，封蓋，超聲處理40 min，取出離心管，過濾樣品溶液，將過濾的溶液用無水乙醇定容到50 mL 容量瓶中備用［7］。

將上述制備的提取液適當稀釋后于282 nm波長處測定吸光度。見表4。

表4 大棗樣品中總生物堿（蓮心堿）的含量比較

從表4可以看出大棗炒炭后總生物堿含量增加，新疆大棗生品中總生物堿含量小于陜西大棗生品。

3 結論

新疆大棗生品的總酚大于陜西大棗生品，但是總黃酮、總三萜、總生物堿等小于陜西大棗生品。這可能與大棗產地、光照、降水量多少有關。大棗炒炭后可以起到治療內痔出血［3］及健脾止瀉作用，從而抑制其滋膩礙胃不易消化的缺點，同時又不影響其補氣補血功效。大棗炒炭炮制后主要活性成分含量的變化研究可為大棗炒炭炮制品在臨床的應用提供依據。