Musashi 1、VEGF-A表達與結腸癌組織中MVD表達的關系

郭 帥

結腸癌是臨床上較為常見消化系統惡性腫瘤之一，目前隨著人們飲食機構的改變，長期、大量的高蛋白攝入，導致我國結腸癌的發病率越來越高[1]。臨床上的觀察研究發現，腫瘤調控相關蛋白的改變，對結腸癌的病情進展過程起著一定的作用[2]。Musashi 1蛋白作為一種腫瘤干細胞調控因子，對維持癌細胞核DNA的分裂速度，增加癌細胞的自我增殖效能起作用，最終促進惡性腫瘤細胞的異常發生過程[3]；血管內皮細胞生長因子-A(VEGF-A)是血管內皮調控相關因子，其可以通過誘導新生腫瘤血管的形成，來幫助提高腫瘤病灶組織的血流灌注水平，促進結腸癌的病情進展[4]。有很多研究對VEGF在結腸癌患者中的表達情況進行分析發現，VEGF蛋白的表達陽性率在結腸癌患者中會明顯上升[5]，但關于的Musashi 1分析缺不足。為了揭示Musashi 1、VEGF-A的表達與結腸癌患者的病情關系，本次研究收集了我院病理科在2018年1月～2020年1月期間的88例結腸癌組織，對Musashi 1、VEGF-A的表達情況進行探討，并報告如下。

1 材料與方法

1.1 對象

選取2018年1月～2020年1月我院病理科收集的88例結腸癌組織標本及符合要求的44例癌旁組織標本。

1.2 相關標準

診斷標準：符合中華醫學會制定的關于結腸癌的診斷標準[6]。納入標準：①所有患者均在我院接受手術，經病理學檢查證實病情；②結腸癌患者無放化療、免疫學治療史；③納入標本患者的年齡、性別、病理學結果等資料完整；④癌旁組織為距離腫瘤邊緣5 cm以內的正常結腸組織；⑤本研究符合《赫爾辛基宣言》中的醫學倫理要求標準。排除標準：①其他部位腫瘤；②合并腸道結核等其他類型的結腸器質性病變；③資料缺失，無法進行統計分析。

88例結腸癌患者的基線資料情況，男性49例、女性39例；年齡38～79歲，平均(57.0±11.4)歲；依據TNM分期標準：Ⅰ期20例、Ⅱ期33例、Ⅲ期28例、Ⅳ期7例；腫瘤最大徑≥5 cm 51例、<5 cm 37例；腫瘤組織學分化：低分化30例、中分化33例、高分化25例；發生淋巴結轉移50例；腫瘤浸潤深度達到T1～T2 43例、T3～T4 45例。

1.3 方法

1.3.1 免疫組化染色 采用免疫組化進行Musashi 1、VEGF-A蛋白的檢測：采用石蠟切片，3%H2O2孵育20 min，然后采用蛋白封閉后，加入一抗(由羅氏公司生產，濃度為：1∶500)5 ml，在37℃下孵育2 h后，加入生物素熒光標記的二抗(由南京碧云天生物公司生產，濃度為：1∶2000)3 ml，在37℃下孵育20～30 min后，磷酸鹽緩沖液清洗3次，每次5 min，加入HRP辣根酶標記鏈霉卵白素(由武漢生之源生物公司生產，試劑盒批號為：20178496)，HRP-DAB底物顯色試劑盒 (PA110)顯色，自來水沖洗，復染，封片。

1.3.2 免疫組化染色結果判斷 兩種蛋白的陽性染色分為呈黃色、棕黃色及褐色表達，①依據染色的程度分為：未染色0分、淡黃色1分、棕黃色2分、褐色、黑色3分；②根據染色的細胞占比結果：≤10%1分、11%～50%2分、51%～75%3分、75%4分。結果判定：兩項得分之積<3分為陰性、≥3分為陽性。

1.3.3 MVD的計數方法 對MVD表達情況的判定主要依據CD34標記染色情況，而CD34陽性著色分為單個或成簇狀黃色及棕黃色表達，依據陽性著色數量進行等級劃分，每張切片在40倍光鏡下選擇血管最多的區域，在400倍光鏡下選取3個視野進行計數：MVD陽性計數<10個為(-)、MVD陽性計數11～25個為(+)、MVD陽性計數26～50個(++)、MVD陽性計數>50個(+++)。

1.4 統計學分析

2 結果

2.1 結腸癌組織與癌旁組織中Musashi 1、VEGF-A陽性率比較

結腸癌組織中Musashi 1蛋白、VEGF-A陽性率(70.45%、64.77%)，均高于癌旁組織的40.91%、36.36%(P<0.05),見表1。

表1 Musashi 1蛋白、VEGF-A陽性率比較(例，%)

2.2 Musashi 1蛋白、VEGF-A陽性率表達在不同病理學特征結腸癌中的差異比較

Musashi 1蛋白在不同TNM分期、不同浸潤深度、不同淋巴結轉移情況的組織中表達差異具有統計學意義(P<0.05)；VEGF-A在不同TNM分期的結腸癌組織中表達差異具有統計學意義(P<0.05) ；見表2、表3。

表2 Musashi 1蛋白在不同病理學特征結腸癌中的表達比較(例，%)

表3 VEGF-A在不同病理學特征結腸癌中的表達比較(例，%)

2.3 結腸癌組織中Musashi 1蛋白、VEGF-A表達與MVD形成的關系

Musashi 1蛋白陽性、VEGF-A陽性表達的結腸癌組織中MVD計數均高于其陰性表達組織(P<0.05)，見表4。

表4 結腸癌組織中Musashi 1蛋白、VEGF-A表達與MVD形成的關系

3 討論

腸道腺體上皮細胞的異常增殖過程中，由于癌基因的突變及腫瘤基因錯配修復能力的下降，癌細胞的發生風險可明顯上升[7]。臨床上的觀察發現，結腸癌患者的5年生存率或者中位生存時間等預后指標均明顯惡化，結腸癌患者遠期病情進展的風險可顯著上升[8,9]。對腫瘤新生血管的調控，可在腫瘤的早期發生或者病情進展過程起到一定的作用。較高的腫瘤血管密度或者腫瘤血管新生速度，能夠提高腫瘤細胞的血流及血氧灌注水平，增加了癌細胞的增殖速度。通過對于腫瘤微血管密度生成調控的相關機制研究，能夠為臨床上結腸癌的免疫靶向治療或者臨床預后評估提供參考。本次研究通過對于結腸癌患者病灶組織中Musashi 1蛋白、VEGF-A蛋白的分析，能夠在部分揭示結腸癌臨床病情進展的同時，為臨床上針對血管受體的免疫靶向治療提供參考。

Musashi 1蛋白是腫瘤干細胞調控因子，其能夠通過誘導結腸腺體上皮細胞的上皮間質轉換，最終促進腫瘤細胞對于腸道肌層的浸潤。基礎方面的機制研究還認為，Musashi 1蛋白還能夠提高結腸纖體上皮細胞的粘附能力，加劇癌細胞的異常增殖[10,11]；VEGF-A是一種血管內皮調控生成因子，不僅具有提高腫瘤血管內皮細胞的修復能力，還可以增加血管內皮細胞的遷移能力，最終增加腫瘤病灶組織的血流灌注[12-14]。多數研究者探討了VEGF不同受體亞型在結腸癌患者病情進展過程中的作用，認為VEGF蛋白的高表達能夠促進結腸癌患者臨床病理特征的進展[15-17]，但對于Musashi 1蛋白的分析研究不足。

本次研究發現在結腸癌患者病灶組織中，Musashi 1蛋白、VEGF-A蛋白的表達陽性率可明顯上升，高于結腸癌旁組織，統計學差異顯著，推測Musashi 1蛋白、VEGF-A蛋白的高表達能夠在結腸癌的病情進展過程中發揮作用。之所以存在較高的Musashi 1蛋白、VEGF-A蛋白表達，主要由于結腸腺體細胞的異常浸潤，能夠顯著激活腫瘤細胞的病理生理途徑，提高了癌細胞內信號通路的激活程度，最終促進了Musashi 1蛋白、VEGF-A蛋白的合成釋放。有其他研究者也認為，在結腸癌患者病灶組織中，Musashi 1蛋白的表達陽性率可超過45%以上，在具有肝臟轉移的患者中，Musashi 1蛋白的表達陽性率可隨著轉移病灶的擴散而顯著上升[18-20]。在不同的臨床病理特征的患者中，能夠發現在臨床分期較晚、浸潤深度較深或者發生了淋巴結轉移的患者中，Musashi 1蛋白的表達陽性率較高，這表明Musashi 1蛋白的高表達能夠顯著促進結腸癌患者臨床病理特征的進展。這主要由于Musashi 1蛋白能夠維持癌細胞干性特征，促進腫瘤細胞偽足的形成，最終促進了癌細胞對于淋巴結及周圍正常組織的浸潤；在不同的臨床分期患者中，VEGF-A蛋白的表達陽性率也明顯上升，表明VEGF-A蛋白同樣能夠顯著影響到腫瘤細胞的臨床病情的進展。這主要由于VEGF-A能夠影響到癌細胞血管分支吻合程度，提高了血管分支的形成速度，加劇了腫瘤細胞的浸潤和擴散。MVD是評估腫瘤血管形成風險的指標，過度的MVD上升能夠加劇腫瘤患者復發和轉移的風險，本次研究中在 Musashi 1、VEGF-A蛋白陽性表達的患者中，MVD計數可明顯上升，提示了Musashi 1、VEGF-A能夠顯著影響到腫瘤血管的形成過程。

綜上所述，結腸癌組織中Musashi 1蛋白陽性、VEGF-A表達增強明顯增加，同時Musashi 1、VEGF-A的表達與腫瘤發展、微血管形成有一定的關系。