PTEN基因蛋白、Ptch在口腔鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)及意義

李海燕 徐 芳 李 媛 李 娟

口腔鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)病率具有較高的逐年上升趨勢，在長期吸煙或者高溫飲食的患者中，口腔鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)病率可繼續(xù)上升[1]。分子生物學(xué)蛋白能夠在癌細(xì)胞的生物學(xué)行為調(diào)控過程中發(fā)揮作用，其對于癌細(xì)胞增殖、凋亡及分化的調(diào)控障礙，可以增加早期鱗狀上皮細(xì)胞異常病變的風(fēng)險。其中磷酸酶及張力蛋白同源基因蛋白(PTEN)能夠通過影響到磷酸激酶的活性，影響癌細(xì)胞內(nèi)效應(yīng)蛋白的磷酸化過程，最終降低癌細(xì)胞的自我持續(xù)增殖速度[2]；補(bǔ)丁蛋白(Ptch)是癌細(xì)胞轉(zhuǎn)錄調(diào)控相關(guān)蛋白，其對于遺傳物質(zhì)結(jié)構(gòu)的修飾作用，能夠增加癌細(xì)胞DNA的異常分裂風(fēng)險[3]。為了揭示PTEN、Ptch在口腔鱗狀上皮細(xì)胞癌患者中的表達(dá)情況，本次研究選取2017年1月至2020年3月我院保存的口腔鱗狀細(xì)胞癌組織標(biāo)本78例，探討了相關(guān)蛋白的表達(dá)情況。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取2017年1月至2020年3月我院保存的口腔鱗狀細(xì)胞癌組織標(biāo)本78例，其中男性42例，女性36例；年齡31～66歲，平均年齡(48.27±8.99)歲；TNM分期Ⅰ～Ⅱ期55例，Ⅲ～Ⅳ期23例；高分化38例，中低分化40例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移35例。納入標(biāo)準(zhǔn)：均經(jīng)病理學(xué)確診；臨床病理資料完整；術(shù)前無放化療等抗腫瘤治療史。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并有其他惡性腫瘤者。同時選取正常口腔組織標(biāo)本56例作為對照，兩組一般資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，見表1。

表1 兩組一般資料比較

1.2 實驗方法

將石蠟切片，脫水、清洗、加入一抗、二抗、孵育、顯色、封片。

1.3 判斷標(biāo)準(zhǔn)

根據(jù)染色強(qiáng)度：淡黃色為1分、黃棕色為2分，棕褐色為3分；根據(jù)陽性細(xì)胞比例：<5%為0分，5%～24%為1分，25%～49%為2分，50%～74%為3分，>75%為4分。染色得分與陽性細(xì)胞得分之和≥3分為陽性表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 口腔鱗狀細(xì)胞癌和正常口腔組織中PTEN、Ptch表達(dá)情況

口腔鱗狀細(xì)胞癌中PETN陽性表達(dá)率明顯低于正常口腔組織(P<0.05)，而Ptch陽性表達(dá)率明顯高于正常口腔組織(P<0.05)，見表2。

表2 口腔鱗狀細(xì)胞癌和正常口腔組織中PTEN、Ptch表達(dá)(例，%)

2.2 PTEN、Ptch表達(dá)與患者臨床病理的關(guān)系

TNM分期Ⅲ～Ⅳ期、中低分化和有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移口腔鱗狀細(xì)胞癌組織PETN陽性表達(dá)率明顯低于Ⅰ～Ⅱ期、高分化和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移口腔鱗狀細(xì)胞癌組織(P<0.05)；TNM分期Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移口腔鱗狀細(xì)胞癌組織Ptch陽性表達(dá)率明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移口腔鱗狀細(xì)胞癌組織(P<0.05)，見表3。

表3 PTEN、Ptch表達(dá)與患者臨床病理的關(guān)系(例，%)

2.3 相關(guān)性分析

口腔鱗狀細(xì)胞癌組織中PETN表達(dá)與Ptch表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(γs=-0.655，P<0.05)，見表4。

表4 相關(guān)性分析/例

3 討論

口腔鱗狀上皮細(xì)胞的異常病變，主要由于長期物理性、生物性損傷修復(fù)過程中的基因突破有關(guān)。在癌基因異常累積的過程中，部分癌細(xì)胞增殖調(diào)控及凋亡體系的紊亂，最終能夠提高口腔鱗狀上皮癌的發(fā)生風(fēng)險[4]。口腔鱗狀上皮癌的發(fā)生，能夠顯著影響到患者的生活質(zhì)量，并能夠增加口腔癌患者遠(yuǎn)期病死的幾率[5,6]。通過對于口腔鱗狀上皮癌發(fā)病過程中的基礎(chǔ)生物學(xué)機(jī)理的研究，能夠為臨床上口腔的病情評估、臨床預(yù)后隨訪提供參考。同時鑒于近年來免疫靶向治療在惡性腫瘤的整體性治療過程中發(fā)揮了重要的作用，本次研究通過對于口腔鱗狀上皮癌患者病灶組織中PETN與Ptch的表達(dá)分析，不僅能夠從另外的角度揭示口腔癌的發(fā)生機(jī)理，同時還能夠為臨床上口腔癌的免疫靶向治療提供新的作用靶點。

PETN作為抑癌基因相關(guān)家族成員，其對于癌細(xì)胞遺傳物質(zhì)的錯配修復(fù)作用，能夠顯著降低癌細(xì)胞基因錯配的風(fēng)險。分子領(lǐng)域的分析研究還認(rèn)為，PETN還能夠影響到癌細(xì)胞內(nèi)信號通路的上調(diào)程度，干預(yù)到MAPK或者PI3K信號通路的激活過程，最終影響到癌細(xì)胞DNA的擴(kuò)增速度[7]；Ptch是補(bǔ)丁蛋白家族成員，其對于癌細(xì)胞轉(zhuǎn)錄調(diào)控上游結(jié)合蛋白的補(bǔ)丁作用，能夠提高癌細(xì)胞紡錘體或者細(xì)胞器的轉(zhuǎn)錄翻譯速度。Ptch作為細(xì)胞內(nèi)第二信使的修飾蛋白，其對于信號通路MAPK等的激活，能夠進(jìn)一步影響到惡性腫瘤的發(fā)生過程。有少量的研究揭示了PETN蛋白在口腔癌患者病灶組織中的表達(dá)情況，認(rèn)為在口腔癌患者中，PETN蛋白的表達(dá)濃度或者表達(dá)陽性率水平明顯下降[8-9]，但對于Ptch的分析研究較少。

通過對于PETN與Ptch蛋白的表達(dá)陽性率的分析可見，在口腔鱗狀細(xì)胞癌患者中，病灶組織中PETN蛋白的表達(dá)陽性率明顯下降，而Ptch蛋白的表達(dá)陽性率水平明顯上升，較良性口腔組織均具有統(tǒng)計學(xué)差異，表明PETN與Ptch蛋白在口腔癌患者中具有差異性表達(dá)的趨勢，這可能是因為 PTEN蛋白能調(diào)控細(xì)胞周期，PTEN 蛋白具有脂質(zhì)磷酸酶和蛋白磷酸酶的雙重活性，可使第二信使PIP3去磷酸化，進(jìn)而阻斷相應(yīng)的信號傳導(dǎo)系統(tǒng)；而Ptch蛋白是通過自分泌和旁分泌來調(diào)節(jié)新生血管形成，使腫瘤細(xì)胞發(fā)生上皮細(xì)胞-間質(zhì)轉(zhuǎn)化，刺激腫瘤細(xì)胞生長及誘導(dǎo)腫瘤轉(zhuǎn)移。PETN與Ptch蛋白的異常表達(dá)現(xiàn)象，主要由于口腔鱗狀細(xì)胞癌生物學(xué)特征的惡化，能夠影響到多種病理生理機(jī)制，影響到癌基因的錯配修復(fù)能力，最終影響到PETN與Ptch蛋白的合成和釋放。免疫組化染色可見，Ptch蛋白的染色具有不同的強(qiáng)度，在鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞異型性較為明顯，或者癌細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則的區(qū)域，Ptch蛋白的染色強(qiáng)度較深，推測Ptch可能在口腔鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞生物學(xué)特征的調(diào)控方面發(fā)揮了作用[10]。有其他研究者也認(rèn)為，在口腔癌患者中，PETN蛋白的表達(dá)濃度可隨著口腔癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移風(fēng)險的上升而下降，在合并局部頸部淋巴結(jié)或者局部腫塊較大的組織中，PETN蛋白的表達(dá)陽性率較低[11-15]。在不同的臨床病理特征的口腔癌患者中，可以發(fā)現(xiàn)在臨床終末期、發(fā)生了淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移或者癌細(xì)胞分化程度較低的患者，其病灶組織中PETN蛋白的表達(dá)陽性率較低，表明PETN能夠影響到口腔鱗狀細(xì)胞癌的整體性病情進(jìn)展，這主要由于PETN的下降能夠影響到癌基因的激活，提高了癌細(xì)胞的浸潤和轉(zhuǎn)移風(fēng)險，最終促進(jìn)了口腔癌臨床病理特征的進(jìn)展；在有淋巴結(jié)組織轉(zhuǎn)移的患者中，Ptch蛋白的表達(dá)陽性率較高，表明Ptch也能夠顯著影響到口腔癌的病情進(jìn)展，其中具體的機(jī)制不清，但考慮由于其能夠影響到鱗狀細(xì)胞上游轉(zhuǎn)錄啟動子TAAT盒子的激活程度，提高了癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄過程，增加了癌細(xì)胞對于淋巴結(jié)內(nèi)皮組織的粘附能力[16-19]。

綜上所述，在口腔鱗狀細(xì)胞癌患者中，PETN蛋白的表達(dá)陽性率明顯下降，而Ptch蛋白的表達(dá)陽性率明顯上升，同時PETN與Ptch的表達(dá)能夠影響到口腔癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等病理特征的進(jìn)展。本文的局限在于未深入探討PETN與Ptch的表達(dá)與口腔癌復(fù)發(fā)或者治療預(yù)后的關(guān)系。