慢加急性乙型肝炎肝衰竭前期患者血漿DOA與腸道菌群相關(guān)性

鄭果果

河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院(河南 洛陽 471000)

目前,我國(guó)有經(jīng)1億人口患有慢性乙型肝炎,而每年有近30%的患者會(huì)出現(xiàn)自發(fā)的肝炎急性加重,進(jìn)而發(fā)展為肝硬化或肝衰竭等終末期肝病[1]。慢加急性乙型肝炎肝衰竭是在以往確診或隱匿性慢性肝病的基礎(chǔ)上,由病毒感染、過量飲酒、手術(shù)入侵、肝毒性藥物等原因?qū)е碌募毙愿喂δ苁軗p,常表現(xiàn)為肝功能失代償和凝血功能障礙[2]。具有病情不穩(wěn)定、發(fā)展快及致死率高等特征,其發(fā)病原因復(fù)雜,臨床治療難度較高[3]。近年來,多數(shù)學(xué)者發(fā)現(xiàn),在肝衰竭未出現(xiàn)前對(duì)肝炎患者進(jìn)行有效治療及預(yù)測(cè)具有重要意義,能有效降低發(fā)病率。血漿二胺氧化酶(diamine oxidase,DOA)水平是存在于小腸黏膜或纖毛上皮細(xì)胞中的催化二胺細(xì)胞內(nèi)酶,能反映腸道屏障功能、腸壁通透性和疾病的進(jìn)展[4]。肝衰竭患者存在腸道菌結(jié)構(gòu)和功能的紊亂。有學(xué)者表示,腸道菌群是維持腸道微生態(tài)系統(tǒng)穩(wěn)定性的重要組成部分,而慢性肝病患者由于腸道微生態(tài)改變,易加重肝臟損傷。因此,本研究主要對(duì)慢加急性乙型肝炎肝衰竭前期患者血漿DOA與腸道菌群進(jìn)行探討,并分析其相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2019年1月至2020年2月收入我院的慢加急性乙型肝炎肝衰竭前期患者72例作觀察組;男51例,女21例;年齡43.21～58.72歲,平均年齡(50.81±3.56)歲;病程1～13年,平均病程(6.28±2.82)年;納入標(biāo)準(zhǔn):(1)符合“2019年亞太肝病學(xué)會(huì)共識(shí)建議:慢加急性肝衰竭管理”[5]中慢加急性乙型肝炎肝衰竭前期的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn);(2)血清乙型肝炎表面抗原≥6個(gè)月;(3)總膽紅素≥85μmol/L;排除標(biāo)準(zhǔn):(1)合并其他嗜肝病毒感染;(2)存在肝臟疾病史;(3)女性患者處于妊娠或哺乳期;(4)合并血液系統(tǒng)疾病或免疫功能減退。選取同期體檢的健康人64例作對(duì)照組;男46例,女18例;年齡43.64～58.81歲,平均年齡(50.94±3.64)歲;納入標(biāo)準(zhǔn):(1)甲肝、乙肝及丙肝等肝病毒標(biāo)志物均為陰性;(2)肝功能正常;排除標(biāo)準(zhǔn):(1)合并心腎等重要臟器器質(zhì)性病變;(2)伴有惡性腫瘤;(3)存在胃腸道疾病。兩組患者上述一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理會(huì)審核并通過,患者知情并簽訂同意書。

1.2研究方法及觀察指標(biāo) 標(biāo)本采集:血漿DOA:于第二天清晨抽取觀察組及對(duì)照組空腹靜脈血5ml,送至檢驗(yàn)科離心分層,取血清,保存?zhèn)溆?。根?jù)酶聯(lián)免疫法檢測(cè)血漿DOA。方法:準(zhǔn)備試劑,樣品和標(biāo)準(zhǔn)品,加入準(zhǔn)備好的樣品和標(biāo)準(zhǔn)品,37℃反應(yīng)30min,洗板5次,加入酶標(biāo)試劑,37℃反應(yīng)30min,洗板5次,加入顯色液A、B,37℃反應(yīng)10min,加入終止液,15min內(nèi)讀取吸光度值并計(jì)算樣品濃度。

腸道菌群:囑所有研究對(duì)象留取2份新鮮糞便標(biāo)本。將新鮮糞便放入培養(yǎng)基,在37℃環(huán)境中增值24h后,可觀察細(xì)菌種類及總數(shù)。根據(jù)生物分類學(xué)分別在門和屬[6]的水平上繪制菌群組成表,了解樣本中含有何種微生物及各微生物的相對(duì)豐度[7]。生物分類學(xué)中門隸于界,屬隸于科,近緣的種歸合為屬,相對(duì)豐度指群落內(nèi)物種數(shù)目的多少。

2 結(jié)果

2.1血漿DOA水平比較 觀察組血漿DOA水平高于對(duì)照組(P<0.05)。見表1。

表1 血漿DOA水平比較

2.2門屬水平上腸道菌群的相對(duì)豐度 在門水平上,兩組患者最大豐度菌種分別為厚璧菌、放線菌、擬桿菌及變型桿菌。觀察組較對(duì)照組相比厚壁菌相對(duì)豐度降低,擬桿菌及放線菌相對(duì)豐度增加;在屬水平上,發(fā)現(xiàn)不明腸桿菌科、韋榮球菌、鏈球菌、腸球菌及乳酸菌豐度顯著增加。見表2。

表2 門屬水平上腸道菌群的相對(duì)豐度

2.3腸道菌群豐度血漿DOA相關(guān)性分析 本研究將門、屬水平腸道差異菌群與血漿DOA水平進(jìn)行相關(guān)分析,得到血漿DOA水平與鏈球菌(r=0.642,P<0.001)、韋榮球菌(r=0.412,P<0.001)相對(duì)豐度呈正相關(guān)。見圖1、圖2。

3 討論

慢性急性肝衰竭是慢性肝病基礎(chǔ)上出現(xiàn)的急性肝功能失代償[8]。肝衰竭是疾病進(jìn)展較為嚴(yán)重的情況,肝衰竭前期是指慢性乙肝患者中,高膽紅素血癥和凝血功能障礙未達(dá)到肝衰竭診斷標(biāo)準(zhǔn)[9]。慢性疾病肝衰竭前期是指慢性乙肝已進(jìn)展至肝衰竭過程中的前期階段。近年來,有研究表明腸道微生物在慢性乙肝及某些肝病中發(fā)揮重要作用,能參與疾病的發(fā)展與轉(zhuǎn)歸[10]。腸道吸收物質(zhì)的某些物質(zhì)可影響肝功能,且轉(zhuǎn)運(yùn)物質(zhì)在毛細(xì)血管中極易擴(kuò)散,直接影響腸壁通透性和腸道屏障功能。

血漿DOA可通過抑制細(xì)胞膜脂質(zhì)過氧化反應(yīng)從而對(duì)腸道粘膜的增值進(jìn)行調(diào)控,故可作為直接反應(yīng)腸道屏障功能的敏感指標(biāo)[11]。而有學(xué)者認(rèn)為,血漿DOA水平能直接反應(yīng)慢性急性乙型肝炎肝衰竭前期患者的病情嚴(yán)重程度[12]。本研究結(jié)果示,觀察組血漿DOA水平高于對(duì)照組,說明慢性急性乙型肝炎肝衰竭前期患者存在腸道粘膜屏障功能受損,腸壁通透性增加情況,提示血漿DOA水平與患者病情嚴(yán)重程度有關(guān)。腸道微生物是一個(gè)多樣化生態(tài)系統(tǒng),腸道菌群變化可直接影響機(jī)體代謝,增加患病率。而腸道粘膜屏障功能及腸壁通透性改變易導(dǎo)致腸道內(nèi)微生物及其代謝產(chǎn)物產(chǎn)生易位入血,引起肝損傷[13]。本研究結(jié)果示,在門水平上,觀察組較對(duì)照組相比厚壁菌相對(duì)豐度降低,擬桿菌及放線菌相對(duì)豐度增加;在屬水平上,不明腸桿菌科、韋榮球菌、鏈球菌、腸球菌及乳酸菌豐度顯著增加,說明慢性急性乙型肝炎肝衰竭前期患者腸道菌群構(gòu)成與物種發(fā)生改變。腸道屏障功能是腸道所具有的特定功能,能阻止腸道內(nèi)細(xì)菌及其分解產(chǎn)物經(jīng)腸壁逸至體內(nèi)[14]。有研究表示,正常情況下,腸道內(nèi)優(yōu)勢(shì)菌群能增強(qiáng)腸道屏障,但慢性急性乙型肝炎肝衰竭前期患者由于腸道菌群結(jié)構(gòu)和功能的紊亂,導(dǎo)致腸道內(nèi)菌群豐都比例倒置,以至某些菌群富集,而某些菌群缺失[15]。本研究將門、屬水平腸道差異菌群與血漿DOA水平進(jìn)行相關(guān)分析,得到血漿DOA水平與鏈球菌、韋榮球菌相對(duì)豐度呈正相關(guān)。提示慢加急性乙型肝炎肝衰竭常富集的韋榮球菌和鏈球菌可能導(dǎo)致了腸壁通透性的增加。且血漿DOA能反映腸道屏障功能的受損程度,而腸道功能的改變可影響肝病患者病情,故推測(cè)血漿DOA可能參與了疾病的進(jìn)展,可作為臨床評(píng)估該病的潛在生物標(biāo)志物,但其具體機(jī)制目前尚不明確,還需大量研究進(jìn)一步證實(shí)。

綜上所述,慢加急性乙型肝炎肝衰竭前期患者血漿DOA水平與病情嚴(yán)重程度有關(guān),且腸道菌群構(gòu)成與物種均發(fā)生改變,其中異常富集的鏈球菌、韋榮球菌與血漿DOA水平緊密相關(guān)。