補(bǔ)飼不同劑量雙歧桿菌單劑對(duì)柴達(dá)木絨山羊血清生化、免疫和抗氧化指標(biāo)的影響

劉 夢(mèng)，吳占月，白占成，吳 森*

（1.青海大學(xué)畜牧獸醫(yī)科學(xué)院，青海 西寧 810016；2.青海省高原家畜遺傳資源保護(hù)與創(chuàng)新利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，青海 西寧 810016）

隨著“飼料禁抗”的實(shí)施，急切需要研究、開(kāi)發(fā)和推廣抗生素替代品[1]。雙歧桿菌是一種厭氧型革蘭氏陽(yáng)性桿菌，同時(shí)也是典型的食品益生菌，具有調(diào)節(jié)腸道菌群、促進(jìn)消化、預(yù)防腹瀉、減少便秘、抗過(guò)敏、抗腫瘤、改善營(yíng)養(yǎng)狀況和增強(qiáng)宿主免疫機(jī)能等[2]特殊的生理功能。有研究表明，當(dāng)食品中雙歧桿菌含量達(dá)到106CFU/mL以上時(shí)，才能發(fā)揮其應(yīng)有的生理功效[3]。曹健[4]、Xiaozhou Tian[5]等人的研究結(jié)果表明，長(zhǎng)期、大量使用雙歧桿菌對(duì)血液生化指標(biāo)無(wú)明顯影響，且會(huì)造成藥物殘留，打破宿主菌群平衡。中國(guó)絨山羊主要分布在華北、西北、東北及青藏高原等地區(qū)[6]。目前，青海省山羊年存欄量約220萬(wàn)只，羊絨年產(chǎn)量約300 t[7]。柴達(dá)木絨山羊是以青海柴達(dá)木山羊（母本）與遼寧絨山羊（父本）雜交而成的一種新型絨山羊。有研究表明，雙歧桿菌與哺乳仔豬的大腸桿菌、沙門氏菌在營(yíng)養(yǎng)和空間方面不能長(zhǎng)期共存，并可通過(guò)細(xì)菌素和抗生素等代謝產(chǎn)物抑制致病菌的生長(zhǎng)[8]。本試驗(yàn)進(jìn)一步探討了不同水平雙歧桿菌對(duì)柴達(dá)木絨山羊生長(zhǎng)性能以及血清生化、免疫和抗氧化指標(biāo)的影響，為雙歧桿菌在柴達(dá)木絨山羊在養(yǎng)殖中的應(yīng)用奠定基礎(chǔ)，為提高柴達(dá)木絨山羊健康水平提供技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

該試驗(yàn)于2020年2月在青海伊清農(nóng)牧科技有限責(zé)任公司進(jìn)行，雙歧桿菌單劑及基底輔料購(gòu)自內(nèi)蒙古和美科盛生物技術(shù)有限公司。隨機(jī)選取24只6月齡體重相近的健康柴達(dá)木絨山羊作為試驗(yàn)動(dòng)物，分成3組（即對(duì)照組，試驗(yàn)I組，試驗(yàn)II組），每組2個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)4只。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)日糧，試驗(yàn)Ⅰ組，試驗(yàn)Ⅱ組在基礎(chǔ)日糧中分別添加 5×106CFU/g，5×107CFU/g的雙歧桿菌單劑，同時(shí)，根據(jù)每只羊每天采食100 g精料估算，保證每只羊每日攝入雙歧桿菌量為5×108CFU，5×109CFU 左右。 試驗(yàn)期為60 d。 試驗(yàn)期間各試驗(yàn)羊只分別飼喂在3個(gè)通風(fēng)良好的圈中，日常飼養(yǎng)管理方法完全一致。基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。

表1 飼糧組成和營(yíng)養(yǎng)水平（干物質(zhì)基礎(chǔ)）

1.2 樣品采集及測(cè)定方法

試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，對(duì)每只柴達(dá)木絨山羊頸靜脈采血4.0 mL。將所有采集的血液注入離心管，分別于37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)2 h和2～8℃冰箱內(nèi)培養(yǎng)4 h。5 000 r/min離心10 min，取上清液作為血清樣本，用于后續(xù)血清生化指標(biāo)的測(cè)定。

1.3 血清生化指標(biāo)測(cè)定

該試驗(yàn)檢測(cè)的血清指標(biāo)包括血清生化指標(biāo)、免疫指標(biāo)和抗氧化指標(biāo)（共計(jì)24個(gè)）。

1.3.1 血清生化指標(biāo)。包括谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、堿性磷酸酶（ALP）、總蛋白（TP）、白蛋白（Albumin）、總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、雌二醇（E2）、生長(zhǎng)激素（GH）、胰島素（INS）、尿素（Urea）。

1.3.2 免疫指標(biāo)。包括球蛋白（GLB）、免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白 G（IgG）、免疫球蛋白 M（IgM）、白細(xì)胞介素 1β（IL-1β）、白細(xì)胞介素 2（IL-2）、白細(xì)胞介素 4（IL-4）、白細(xì)胞介素 6（IL-6）。

1.3.3 抗氧化指標(biāo)。包括超氧化物歧化酶（SOD）、過(guò)氧化氫酶（CAT）、乳酸脫氫酶（LDH）、谷胱甘肽過(guò)氧化酶（GSH-Px）和丙二醛（MDA）。

對(duì)所有指標(biāo)采用“酶標(biāo)生物”（江蘇）出產(chǎn)的綿羊血液ELISA酶標(biāo)反應(yīng)試劑盒進(jìn)行檢測(cè)。根據(jù)試劑盒使用說(shuō)明，采用Tecan Safire2多功能酶標(biāo)儀（瑞士）檢測(cè)柴達(dá)木絨山羊血清相關(guān)生化指標(biāo)。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)用Excel進(jìn)行初步整理，使用IBM SPSS 24.0進(jìn)行One-way ANOVA方差分析，并對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行多重比較（Duncan法），結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，P＜0.05為差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 雙歧桿菌對(duì)柴達(dá)木絨山羊生長(zhǎng)性能的影響

柴達(dá)木絨山羊生長(zhǎng)發(fā)育指標(biāo)測(cè)定值見(jiàn)表2。由表2可知，補(bǔ)充不同劑量雙歧桿菌后，試驗(yàn)I組的末重、平均日增重均顯著高于對(duì)照組和試驗(yàn)II組（P＜0.05）。

表2 雙歧桿菌對(duì)柴達(dá)木絨山羊生長(zhǎng)性能的影響

2.2 血清生化指標(biāo)的測(cè)定

2.2.1 雙歧桿菌對(duì)柴達(dá)木絨山羊血清生化指標(biāo)的影響。由表3可知，試驗(yàn)I組，試驗(yàn)II組與對(duì)照組相比，Albumin、TC 和 TG 含量顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），試驗(yàn)I組的AST含量顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），而TP、E2含量差異不顯著（P＞0.05）。試驗(yàn)II組與試驗(yàn)I組相比，ALP、INS 含量顯著高于試驗(yàn) I組 （P＜0.05），ALT、Albumin、TC、TG、E2、GH 和 Urea 含量均未達(dá)到顯著差異（P＞0.05），而試驗(yàn) I組 AST、TP 含量顯著高于試驗(yàn)II組（P＜0.05），說(shuō)明在基礎(chǔ)日糧中添加 5×106CFU/g和5×107CFU/g的雙歧桿菌均能提高柴達(dá)木絨山羊的血清生化指標(biāo)，且添加劑量為5×106CFU/g的作用效果要優(yōu)于5×107CFU/g的。

表3 雙歧桿菌對(duì)柴達(dá)木絨山羊血清生化指標(biāo)的影響

2.3 血清免疫指標(biāo)的測(cè)定

雙歧桿菌對(duì)柴達(dá)木絨山羊免疫指標(biāo)的影響。由表4可知，試驗(yàn)I組，試驗(yàn)II組與對(duì)照組相比，IgM含量均顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），試驗(yàn) I組 IgA、IgG 含量與對(duì)照組相比差異不顯著（P＞0.05）。試驗(yàn)II組與試驗(yàn)I組相比，IgG、IgM 含量顯著高于試驗(yàn) I組 （P＜0.05），GLB、IgA、IL-2 含量均未達(dá)到顯著差異（P＞0.05），試驗(yàn)I組IL-1beta、IL-4和IL-6含量顯著高于試驗(yàn) II組（P＜0.05），說(shuō)明在基礎(chǔ)日糧中添加 5×106CFU/g 和 5×107CFU/g的雙歧桿菌均能改善柴達(dá)木絨山羊的血清免疫能力，且添加劑量為5×106CFU/g的作用效果要優(yōu)于 5×107CFU/g的。

表4 雙歧桿菌對(duì)柴達(dá)木絨山羊免疫指標(biāo)的影響

2.4 血清抗氧化指標(biāo)的測(cè)定

2.4.1 雙歧桿菌對(duì)柴達(dá)木絨山羊抗氧化指標(biāo)的影響。由表5可知，試驗(yàn)I組，試驗(yàn)II組與對(duì)照組相比，SOD、LDH、GSH-Px含量均顯著低于對(duì)照組（P＜0.05），CAT、MDA 含量差異不顯著（P＞0.05）。 試驗(yàn) II組與試驗(yàn) I組相比，GSH-Px含量顯著高于試驗(yàn) I組 （P＜0.05），而 SOD、CAT、MDA 含量均未達(dá)到顯著差異（P＞0.05），試驗(yàn)II組MDA含量高于試驗(yàn)I組和對(duì)照組，說(shuō)明在基礎(chǔ)日糧中添加5×106CFU/g和5×107CFU/g的雙歧桿菌對(duì)柴達(dá)木絨山羊的血清抗氧化指標(biāo)影響不大，且添加劑量為5×107CFU/g的作用效果整體上優(yōu)于5×106CFU/g的。

表5 雙歧桿菌對(duì)柴達(dá)木絨山羊抗氧化指標(biāo)的影響

3 討論

3.1 雙歧桿菌對(duì)柴達(dá)木絨山羊生產(chǎn)性能的影響

該試驗(yàn)在高寒牧區(qū)進(jìn)行，在圈舍飼養(yǎng)條件下過(guò)量添加益生菌使得很多動(dòng)物不僅不能維持體重，甚至?xí)舯旎蛩劳觥Ｓ醒芯勘砻鳎诨A(chǔ)日糧中添加少量雙歧桿菌可提高家畜的生長(zhǎng)性能。在本試驗(yàn)中，補(bǔ)充少量雙歧桿菌使柴達(dá)木絨山羊的體重和平均日增重提高，這與戴東文等[9]的研究結(jié)果一致。

3.2 雙歧桿菌對(duì)柴達(dá)木絨山羊血清生化指標(biāo)的影響

益生菌含有蛋白質(zhì)、氨基酸和多種消化酶，可以有效提高飼料中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的利用率，動(dòng)物的生長(zhǎng)性能也得到了相應(yīng)的提高，現(xiàn)已被廣泛發(fā)掘和應(yīng)用[10]。有研究表明，雙歧桿菌能夠促進(jìn)動(dòng)物消化道的吸收率，可調(diào)節(jié)動(dòng)物腸道微生態(tài)菌群的平衡，提高動(dòng)物的抗病能力，并能提高豬的生長(zhǎng)性能[11]。TP、ALB活性反映了動(dòng)物體內(nèi)肝臟蛋白質(zhì)代謝水平和蛋白質(zhì)的合成能力[12-14]。在本試驗(yàn)中，試驗(yàn)I組TP含量顯著高于試驗(yàn)II組，試驗(yàn)II組的ALB含量高于試驗(yàn)I組，但是ALB含量差異不顯著，說(shuō)明在基礎(chǔ)日糧中添加5×106CFU/g和5×107CFU/g的雙歧桿菌均能提高柴達(dá)木絨山羊血清的TP、ALB含量，可促進(jìn)柴達(dá)木絨山羊蛋白質(zhì)消化吸收利用率，改善肝腎功能。血清中ALP、AST活性是機(jī)體肝功能的重要指標(biāo)[15]，AST可調(diào)節(jié)機(jī)體內(nèi)蛋白質(zhì)的代謝水平，當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)代謝水平提高或肝功能受損時(shí)，血清中AST的活性就會(huì)升高[16]。在本試驗(yàn)中，試驗(yàn)I組的AST含量顯著高于對(duì)照組，試驗(yàn)II組的ALP含量顯著高于試驗(yàn)I組，說(shuō)明補(bǔ)充雙歧桿菌可增強(qiáng)柴達(dá)木絨山羊心臟功能和肌肉組織代謝功能，這與賀長(zhǎng)青等[17]報(bào)道的結(jié)果一致。

3.3 雙歧桿菌對(duì)柴達(dá)木絨山羊免疫指標(biāo)的影響

在血清中免疫指標(biāo)是一種具有抗體活性的球蛋白，在動(dòng)物機(jī)體中主要起免疫調(diào)節(jié)的作用，主要包括IgA、IgM和IgG[18-19]。IgM為初次免疫應(yīng)答的主要抗體[20]，在本試驗(yàn)中，試驗(yàn)I組，試驗(yàn)II組的IgM含量均高于對(duì)照組，且試驗(yàn)II組IgG含量顯著高于對(duì)照組，這與王彩蓮[21]的研究結(jié)果相似。IL-2能夠刺激T淋巴細(xì)胞增殖，IL-6能夠誘導(dǎo)B細(xì)胞分化和免疫球蛋白的分泌，IL-4可以抑制促炎因子的產(chǎn)生。IL-4和IL-6均是動(dòng)物機(jī)體炎癥細(xì)胞因子的主要檢測(cè)指標(biāo)[22]。在本試驗(yàn)中，試驗(yàn)I組IL-4、IL-6含量顯著高于試驗(yàn)II組，說(shuō)明在基礎(chǔ)日糧中添加5×106CFU/g的雙歧桿菌比5×107CFU/g的效果要好，這與徐萍等[23]、楊春濤等[24]的研究結(jié)果相似。

3.4 雙歧桿菌對(duì)柴達(dá)木絨山羊抗氧化指標(biāo)的影響

在血清抗氧化指標(biāo)中，動(dòng)物體內(nèi)自由基的產(chǎn)生與消除始終處于微觀動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)。當(dāng)動(dòng)物機(jī)體受到外界病原體的刺激時(shí)，會(huì)發(fā)生氧化反應(yīng)，產(chǎn)生大量的自由基。而動(dòng)物機(jī)體內(nèi)的SOD、CAT、GSH-Px等抗氧化酶則通過(guò)酶系統(tǒng)被還原，以清除自由基，維持動(dòng)物體內(nèi)氧化還原微動(dòng)力學(xué)平衡[25]。在本試驗(yàn)中，試驗(yàn)I組，試驗(yàn)II組SOD、LDH、GSH-Px含量均低于對(duì)照組，試驗(yàn)I組CAT、LDH含量與對(duì)照組相比差異不顯著，試驗(yàn)II組SOD、CAT、GSH-Px含量高于試驗(yàn)I組，但只有GSH-Px含量呈現(xiàn)出顯著差異，說(shuō)明在基礎(chǔ)日糧中添加5×107CFU/g雙歧桿菌對(duì)柴達(dá)木絨山羊抗氧化功能的改善整體上優(yōu)于5×106CFU/g添加劑量，其原因可能是雙歧桿菌在柴達(dá)木絨山羊瘤胃中能迅速繁殖，起到調(diào)節(jié)微生態(tài)平衡的作用，從而提高柴達(dá)木絨山羊的免疫和抗氧化功能，改善柴達(dá)木絨山羊的健康狀況。脂質(zhì)氧化的最終產(chǎn)物是MDA，其含量直接反映了動(dòng)物體內(nèi)脂質(zhì)氧化和細(xì)胞損傷的程度[26]。在本試驗(yàn)中，試驗(yàn)II組MDA含量高于試驗(yàn)I組，說(shuō)明在柴達(dá)木絨山羊基礎(chǔ)日糧中添加5×106CFU/g雙歧桿菌能夠減輕對(duì)動(dòng)物細(xì)胞的損傷，而且添加不同水平的雙歧桿菌均能夠提升柴達(dá)木絨山羊的免疫功能和抗氧化能力。綜合考慮養(yǎng)殖成本，建議在日常飼養(yǎng)中雙歧桿菌的臨床添加劑量為5×106CFU/g。

4 結(jié)論

從本試驗(yàn)可以得出，在柴達(dá)木絨山羊的基礎(chǔ)日糧中添加5×106CFU/g雙歧桿菌，能夠提高柴達(dá)木絨山羊的生長(zhǎng)性能、免疫和抗氧化能力，因此在日后養(yǎng)殖中建議選擇5×106CFU/g作為最適添加劑量。