天然黃酮類化合物改善酒精性肝病作用及機制的研究進展

沈佳妍，徐婧淇，劉淼，王丹，陳倩，王濤，劉夢揚（天津中醫(yī)藥大學中醫(yī)藥研究院，天津 300190）

酒精性肝病（alcoholic liver disease，ALD）是長期過量飲酒引起的一種常見的肝臟疾病，通常由早期酒精性脂肪肝發(fā)展為酒精性脂肪性肝炎，進而引發(fā)肝纖維化和肝硬化，最終可能導(dǎo)致肝癌的發(fā)生。隨著經(jīng)濟的發(fā)展和生活方式的改變，全球酒精消耗量逐年遞增，與之相關(guān)ALD的發(fā)病率也在逐年攀升。僅2016年，全球就有60.7萬人死于酒精引起的肝硬化，因此，對ALD的防治已成為目前肝病研究的重點。

研究表明，肝臟脂肪變性、氧化應(yīng)激、乙醛介導(dǎo)的肝毒性以及炎癥反應(yīng)等多種因素都參與了ALD的病理過程，然而ALD的確切發(fā)病機制仍不完全清楚。臨床診斷上，常通過超聲、瞬時彈性成像、磁共振、血清生物標志物測定和肝臟活檢組織學等手段來評估肝臟炎性損傷和纖維化程度。目前戒酒和藥物聯(lián)合治療是ALD的主要干預(yù)方法。但對于酒精性肝炎和纖維化的治療，除了運用糖皮質(zhì)激素、美他多辛等藥物緩解短期癥狀外，仍然缺乏有效的、可長期使用的治療藥物。近年來，美國食品藥品監(jiān)督管理局批準的新藥逐漸減少，但其中天然藥物所占比例卻穩(wěn)步上升，超過60%的上市藥物與天然藥物有很大的相關(guān)性。因此，提取自天然藥物的各種化合物可能是未來ALD相關(guān)藥物開發(fā)的重要來源。

黃酮類化合物是指由兩個苯環(huán)（A環(huán)、B環(huán)）通過三碳鏈相互連接而成的一類成分，大多具有6C-3C-6C的基本骨架。根據(jù)B環(huán)連接位置、C環(huán)氧化程度、C環(huán)是否成環(huán)等特點將黃酮類化合物分為黃酮類、黃酮醇類、二氫黃酮類、二氫黃酮醇類、異黃酮類等。黃酮類化合物廣泛存在于自然界植物中，特別在蕓香科、唇形科、姜科、玄參科、豆科等植物中含量豐富。研究表明，黃酮類化合物藥理學活性廣泛且毒性相對較低，能夠通過調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝、抗氧化、抗炎、減少鐵沉積、調(diào)控腫瘤細胞增殖、抗凋亡、促進自噬等多種途徑減輕酒精對肝臟的損傷。因此，本文對近年來天然黃酮類化合物治療ALD的研究進展進行系統(tǒng)性總結(jié)，對基于黃酮類化合物相關(guān)創(chuàng)新藥物的研究和開發(fā)具有重要意義。

1 ALD發(fā)病機制

1.1 乙醇代謝及氧化應(yīng)激

人體攝入酒精后，酒精的主要成分乙醇會透過胃腸黏膜進入血液，而肝臟和大腦流入的血量最多，因此受到的影響最大。在肝臟中，大多數(shù)的乙醇在乙醇代謝關(guān)鍵酶——乙醇脫氫酶（ADH）的作用下被代謝為乙醛，乙醛又被乙醛脫氫酶（ALDH）代謝為乙酸。乙醇和乙醛對肝臟的毒性作用是導(dǎo)致ALD發(fā)生的重要因素。過量的乙醛能夠與微管蛋白結(jié)合，損害微管系統(tǒng)，導(dǎo)致細胞內(nèi)正常分泌的蛋白質(zhì)滯留胞內(nèi)，造成脂肪排泌障礙，引起肝細胞的腫脹。同時，乙醛還能直接與蛋白質(zhì)、脂質(zhì)以及DNA結(jié)合形成共價化合物，進而影響細胞穩(wěn)態(tài)，改變蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)，并導(dǎo)致DNA損傷或突變。此外，乙醛還可以刺激肝星狀細胞（HSC）中轉(zhuǎn)化生長因子（TGF-

β

）信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，推動ALD的發(fā)展進程。乙醛也能夠直接引發(fā)肝臟炎癥和細胞外基質(zhì)（ECM）代謝失衡，導(dǎo)致其纖維化。

另一個參與乙醇代謝的關(guān)鍵酶是細胞色素氧化酶P450（CYP2E1），主要存在于肝細胞的滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中，在肝細胞的線粒體內(nèi)也有表達。乙醇在CYP2E1的氧化作用下，產(chǎn)生過量的超氧離子、過氧化氫、羥基自由基等活性氧（ROS），當這些代謝產(chǎn)物不斷積累超過超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化氫酶（CAT）、谷胱甘肽過氧化物酶（GPX）等抗氧化酶的分解代謝能力時，會導(dǎo)致肝臟的氧化損傷。同時，ROS對線粒體膜磷脂中的多不飽和脂肪酸產(chǎn)生毒性，導(dǎo)致線粒體功能障礙，誘發(fā)TNF受體超家族成員6（Fas）介導(dǎo)的細胞凋亡。此外，ROS還通過誘導(dǎo)線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔的開啟來促進BCL2相關(guān)X蛋白（Bax）從細胞質(zhì)向線粒體內(nèi)的轉(zhuǎn)位，導(dǎo)致線粒體通透性增加并釋放細胞色素C，引發(fā)肝細胞凋亡。受體相互作用蛋白激酶3（RIP3）介導(dǎo)的壞死也在ALD中發(fā)揮重要作用。Roychowdhury等研究發(fā)現(xiàn)，小鼠喂食酒精后可以明顯上調(diào)肝臟RIP3的表達水平，而RIP3缺失則能顯著減輕酒精喂食引發(fā)的肝細胞壞死。核因子E2相關(guān)因子2（NRF2）是肝臟中抗氧化應(yīng)激表達過程的重要轉(zhuǎn)錄因子，同時也是維持細胞內(nèi)氧化還原穩(wěn)態(tài)的中樞調(diào)節(jié)者，在減輕乙醛毒性反應(yīng)和氧化應(yīng)激過程中發(fā)揮重要的作用。Sun等研究發(fā)現(xiàn)，與野生型小鼠相比，NRF2敲除小鼠在酗酒后的病死率及肝臟損傷明顯增加，ALDH活性顯著降低。此外，酒精的過度攝入會抑制NRF2蛋白的表達及活化，從而影響其下游血紅素加氧酶1（HO-1）、NAD（P）H：醌氧化還原酶1（NQO1）等抗氧化蛋白的組成型和誘導(dǎo)型表達水平，加重肝臟的氧化損傷。

1.2 脂質(zhì)代謝

盡管酒精及其代謝物乙醛不會直接促進脂肪酸合成，但乙醛代謝物乙酸酯能夠轉(zhuǎn)化為乙酰輔酶A，而乙酰輔酶A可作為脂質(zhì)合成的前體物質(zhì)直接參與脂肪酸合成。因此，酒精過度攝入初期引起的常見肝臟反應(yīng)多表現(xiàn)為過量的脂肪堆積。且長時間酒精過量攝入對三酰甘油的產(chǎn)生、脂肪酸攝取和氧化、三酰甘油輸出、肝細胞脂質(zhì)儲存等方面都會產(chǎn)生持續(xù)影響，進而影響細胞脂質(zhì)穩(wěn)態(tài)，導(dǎo)致細胞代謝異常，引發(fā)肝細胞氧化應(yīng)激和炎癥，加速肝臟損傷的發(fā)展進程。

過量攝入酒精后，多種機制都能夠影響肝臟的脂肪生成，從而引發(fā)肝臟過度脂質(zhì)蓄積。急性和慢性酗酒均可導(dǎo)致小鼠肝臟固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白1c（SREBP-1c）蛋白表達上調(diào)，進而影響乙酰輔酶A羧化酶（ACC）、脂肪酸合成酶（Fasn）和硬脂酰輔酶A去飽和酶1（SCD1）等脂肪酸合成相關(guān)基因的表達，導(dǎo)致脂肪酸的合成增加。此外，機體過度攝入酒精會抑制沉默信息調(diào)節(jié)因子2相關(guān)酶1（Sirt1）和腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）的表達，使AMPK對ACCSer79位點的磷酸化降低，導(dǎo)致ACC活性增強，脂肪酸合成增加。同時酒精還能通過直接抑制AMPK活性，降低其對SREBP-1c的磷酸化水平而促進SREBP-1c激活，進而誘導(dǎo)肝細胞胞漿中脂素1（Lipin-1）蛋白表達上調(diào)，并增強Lipin-1的磷脂酸磷酸酶（PAP）活性，促進肝臟中三酰甘油合成，導(dǎo)致脂肪酸的酯化比例升高，進一步加重肝臟的脂質(zhì)蓄積。除了促進脂質(zhì)的合成外，過量的酒精還會影響脂肪酸的動員和清除。酒精的攝入提高了還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD）和氧化型NAD的比例（NADH/NAD），抑制了脂肪酸

β

氧化，加劇肝臟脂肪變性。另一方面，酒精的過度攝入還會引發(fā)過氧化物酶體增殖物激活受體

α

（PPAR

α

）失活，導(dǎo)致線粒體功能障礙，導(dǎo)致能量動員不足。最近研究發(fā)現(xiàn)，慢性酒精攝入還會顯著抑制肝細胞的脂噬作用，從而減少胞內(nèi)脂噬介導(dǎo)的脂質(zhì)清除。

1.3 炎癥反應(yīng)

研究發(fā)現(xiàn)，機體中促炎因子過度釋放所致的免疫反應(yīng)失衡與ALD的發(fā)生和發(fā)展也存在密切的關(guān)系。酗酒會造成以巨噬細胞和中性粒細胞浸潤為特征的肝臟炎癥。慢性酒精暴露會引起腸道通透性增大，使循環(huán)系統(tǒng)中腸道來源的脂多糖（LPS）增多。有研究發(fā)現(xiàn)肝損傷的嚴重程度與血清LPS水平存在正相關(guān)。高水平的LPS由門靜脈循環(huán)進入肝臟，通過LPS結(jié)合蛋白（LBP）與肝臟Kupffer細胞表面的CD14結(jié)合，激活Toll樣受體4（TLR4）信號通路，繼而激活核轉(zhuǎn)錄因子

κ

B（NF-

κ

B），誘導(dǎo)Kupffer細胞分泌腫瘤壞死因子（TNF-

α

）、白細胞介素6（IL-6）、白細胞介素8（IL-8）、白細胞介素17（IL-17）等炎癥因子，導(dǎo)致ALD的發(fā)生。動物肝炎模型和人類肝炎患者的肝臟活檢樣品中，TNF-

α

和IL-6的表達水平顯著增加。因此對于部分ALD患者，TNF-

α

和IL-6的表達水平可以間接反映ALD的嚴重程度。炎癥因子的大量釋放一方面通過炎癥反應(yīng)加劇肝細胞的損傷和壞死，另一方面通過再次影響腸道通透性進而加劇肝臟的炎性損傷。研究表明酒精喂食引發(fā)的炎性介質(zhì)的釋放會激活細胞凋亡的外部途徑，誘導(dǎo)肝細胞凋亡。其中Fas/Fas配體以及TNF受體1（TNF-R1）/TNF-

α

系統(tǒng)發(fā)揮了主要作用。在ALD患者肝臟細胞中均能夠檢測到顯著上調(diào)的Fas受體和TNF-R1。Iimuro等研究發(fā)現(xiàn)，TNF-

α

抗體治療能夠減輕肝臟炎癥和壞死，明顯改善ALD大鼠的肝損傷。Yin等研究發(fā)現(xiàn)，與野生型小鼠比，TNF-R1敲除能夠明顯改善過度攝入酒精造成的肝損傷，進一步證實了TNF-

α

通過TNF-R1途徑在早期酒精性肝損傷的發(fā)生中發(fā)揮重要作用。最近研究發(fā)現(xiàn)，含NLR家族PYRIN域蛋白3（NLRP3）炎癥小體在ALD中也發(fā)揮著重要作用。Cui等研究結(jié)果表明，在乙醇處理后的小鼠巨噬細胞中，NLRP3、白細胞介素1

β

（IL-1

β

）和切割活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶1（Caspase-1）表達水平明顯上調(diào)，導(dǎo)致肝臟中性粒細胞浸潤和炎癥反應(yīng)的發(fā)生。Wree等研究表明，NLRP3 過度激活會導(dǎo)致小鼠發(fā)生嚴重的肝臟炎癥，誘導(dǎo)肝細胞焦亡的發(fā)生。此外，酒精還能通過叉形頭轉(zhuǎn)錄因子O1（FoxO1）降低ALD小鼠肝細胞中miR-148a的表達，促進硫氧還蛋白互作蛋白（TXNIP）過表達和NLRP3炎性小體激活，從而誘導(dǎo)肝細胞焦亡。與此同時，NLRP3炎性小體的激活還能夠誘導(dǎo)HSC活化和膠原沉積的增加，誘導(dǎo)ALD相關(guān)肝纖維化的發(fā)生。此外，Kupffer細胞產(chǎn)生的大量炎癥因子和生長因子也能夠促進 HSC的激活，進而促進肝臟纖維化的發(fā)生。有證據(jù)表明，酒精攝入引發(fā)的免疫失衡還會破壞自然殺傷（NK）細胞的抗纖維化功能，進一步加速ALD的發(fā)展進程。

2 ALD的治療手段

在既往的40年中，ALD的治療手段仍然以戒酒、營養(yǎng)支持和糖皮質(zhì)激素干預(yù)為主。當前，在營養(yǎng)支持和戒酒的基礎(chǔ)上，通過藥物治療減輕ALD的損傷程度，改善已存在的繼發(fā)性營養(yǎng)不良，對癥治療酒精性肝硬化及其并發(fā)癥是治療ALD的主要原則。由于ALD的發(fā)病機制復(fù)雜，目前仍然缺乏有效的針對性治療藥物。有研究表明，美他多辛能加速乙醇從血液中清除，一定程度上改善了酒精中毒癥狀。糖皮質(zhì)激素則主要用于重癥ALD，且只對患者的短期生存率有一定的改善作用。已酮可可堿、

N

-乙酰半胱氨酸（NAC）和粒細胞集落刺激因子（G-CSF）在實驗中顯示出對ALD的改善作用，但其可靠性仍需要大量實驗證明。但當ALD患者肝功能受到嚴重損傷引發(fā)肝衰竭時，只能通過肝移植進行治療，因此，亟需篩選并尋找有效的抗ALD新型藥物。

3 黃酮類化合物對ALD的治療作用及機制

3.1 黃酮類

3.1.1 黃芩苷 黃芩苷是從雙子葉唇形科植物黃芩（

Scutellaria baicalensis

Georgi）的干燥根中提取分離出來的一種黃酮類化合物，是黃芩的主要活性成分。黃芩具有抗腫瘤、抗炎、抗菌等多種藥理作用，能有效保護心血管、肝、腎相關(guān)臟器，被廣泛應(yīng)用于中藥復(fù)方中。近年來，黃芩苷對肝臟的保護作用越來越受到人們的關(guān)注。有研究表明，黃芩苷對病毒性肝炎、脂肪肝、膽汁淤積性肝損傷和肝癌等都有很好的防治作用。研究發(fā)現(xiàn)，黃芩苷可以通過調(diào)控肝臟鈣/鈣調(diào)蛋白依賴性蛋白激酶Ⅱ（CaMKK

β

）/AMPK/ACC通路，降低肝臟脂肪酸合成，減輕肝臟脂質(zhì)蓄積。Dai等運用定量化學蛋白質(zhì)組學分析發(fā)現(xiàn)肉毒堿棕櫚酰基轉(zhuǎn)移酶1A（CPT-1A）為黃芩苷調(diào)控脂質(zhì)代謝的新靶點，CPT-1A可以直接與黃芩苷結(jié)合并被黃芩苷變構(gòu)活化，從而減輕肝臟的脂肪變性。Wang等證實，黃芩苷可以有效減輕乙醇誘導(dǎo)的肝損傷，提高ALD大鼠的抗氧化能力。機制上，黃芩苷主要通過激活NRF2，促進其下游抗氧化酶NQO1和HO-1的表達，從而增強ALD大鼠肝臟抗氧化能力，在慢性酒精性肝損傷小鼠模型中，也觀察到同樣的肝保護作用。He等給予小鼠黃芩苷[200 mg/（kg·d）]不僅能夠增強NRF2核轉(zhuǎn)移還能夠下調(diào)CYP2E1以及ROS產(chǎn)生相關(guān)酶類NADPH氧化酶2（NOX2）、NADPH氧化酶亞基（P67PHOX）、黃嘌呤氧化酶（XOD）和一氧化氮合成酶（iNOS）的表達，減輕過量ROS對肝臟的損害。鐵過載也會增加體內(nèi)ROS生成，與酒精發(fā)揮協(xié)同效應(yīng)，因此胞內(nèi)鐵水平也參與ALD的發(fā)展進程。Xu等用檸檬酸鐵和酒精聯(lián)合刺激HepG2細胞，發(fā)現(xiàn)細胞的凋亡和蛋白氧化的程度明顯加重，而黃芩苷預(yù)處理則能夠顯著抑制酒精與鐵結(jié)合引起的氧化應(yīng)激及細胞凋亡。有研究表明，音猬因子（SHH）信號與細胞炎癥和氧化應(yīng)激密切相關(guān)，盡管酒精的過度攝入會應(yīng)激性激活SHH通路，但是黃芩苷處理能夠顯著增加SHH及其下游受體蛋白Patched1（Ptc-1）、Smoothened（Smo）和核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子膠質(zhì)瘤相關(guān)癌基因1（GLI-1）蛋白的表達，進一步促進SHH通路的動員激活，減輕酒精所致L02細胞損傷和死亡。Kim等研究發(fā)現(xiàn)，黃芩苷可以有效改善酒精性脂肪肝大鼠的血清谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）水平異常升高，減少炎性細胞浸潤，降低肝臟炎癥反應(yīng)，其作用機制可能是黃芩苷通過抑制TLR4和髓樣分化因子88（MYD88）的表達，并減少NF-

κ

B的核轉(zhuǎn)移來發(fā)揮抗炎作用。3.1.2 漢黃芩素 漢黃芩素是從黃芩中提取的一種黃酮化合物，具有抗病毒、抗氧化、抗腫瘤、神經(jīng)保護等藥理活性。大量的體外和體內(nèi)實驗證明，漢黃芩素具有良好的肝臟保護作用。近期研究發(fā)現(xiàn)，漢黃芩素能夠通過促進體內(nèi)、外肝細胞中PPAR

α

和脂聯(lián)素受體2（AdipoR2）的表達，減輕脂肪積累造成的肝細胞毒性。在ALD小鼠模型中，Li等發(fā)現(xiàn)漢黃芩素可以通過激活PPAR

γ

，顯著抑制NF-

κ

B的磷酸化和核轉(zhuǎn)移活性，減輕酒精引發(fā)的肝臟炎癥。此外，Du等研究證明漢黃芩素能夠增強Caspase-9、Caspase-3的活化，提高Bax/B淋巴細胞瘤2（Bcl-2）的比值，從而抑制HSC的活化，減輕肝臟纖維化。Khan等發(fā)現(xiàn)漢黃芩素還能夠通過激活ROS/ERK/NRF2信號通路發(fā)揮較強的抗炎抗氧化作用。研究發(fā)現(xiàn)，漢黃芩素通過激活A(yù)KT/GSK-3

β

信號通路可以有效減少乙醇誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激引起的肝細胞死亡，在ALD中發(fā)揮治療作用。Hong等研究證明，漢黃芩素通過靶向糖原合成酶激酶3

β

（GSK-3

β

），能夠有效誘導(dǎo)肝癌細胞周期阻滯，抑制腫瘤增殖，調(diào)控細胞代謝。因此，漢黃芩素可能對酒精性肝硬化、肝癌均有潛在的治療作用。3.1.3 木蝴蝶素 木蝴蝶素也是提取自黃芩的一種黃酮類成分，對于肝臟損傷也能夠發(fā)揮獨特的保護作用。研究表明，給予ALD小鼠木蝴蝶素[40 mg/（kg·d）]處理可以明顯減輕慢性酒精喂食導(dǎo)致的小鼠肝臟脂肪蓄積、肝細胞腫脹以及炎性細胞浸潤等病理改變。進一步研究發(fā)現(xiàn)，木蝴蝶素能夠激活PGC-1

α

/Mfn2信號通路，減少酒精誘導(dǎo)引起的線粒體ROS積累，減輕肝臟氧化損傷。同時，木蝴蝶素通過抑制NLRP3炎癥小體通路中Caspase-1的活化，減輕肝細胞焦亡。除此之外，木蝴蝶素還能通過下調(diào)

SREBP-1c

、

Fasn

、

Scd1

等脂質(zhì)生成相關(guān)基因的表達，上調(diào)

Ppara

、

Cpt-1a

等脂肪酸氧化相關(guān)基因的表達，減輕酒精誘導(dǎo)的L02細胞脂質(zhì)蓄積。Jin等研究發(fā)現(xiàn)，木蝴蝶素還可以通過調(diào)控Yes相關(guān)蛋白（YAP）通路，減少L02細胞P16、P21和Hmga1等衰老標志物的表達，減輕酒精造成的肝臟細胞衰老。而Zhang等發(fā)現(xiàn)木蝴蝶素也可以通過抑制YAP/HIF-1

α

信號，減少肝竇狀內(nèi)皮細胞（LSEC）的血管生成，減輕小鼠肝纖維化。酒精代謝異常會造成機體發(fā)生氧化應(yīng)激，而氧化應(yīng)激與肝臟的纖維化密切相關(guān)。在肝纖維化小鼠模型中，木蝴蝶素能夠通過調(diào)控PI3K/AKT/mTOR通路誘導(dǎo)自噬的激活，從而抑制活化的HSC分泌促炎細胞因子，減輕肝臟炎癥及纖維化。此外，Wei等研究發(fā)現(xiàn)，木蝴蝶素可以通過激活PKM1/HNF4

α

，減少肝癌細胞的增殖，提示其在治療ALD相關(guān)肝癌中也具有一定的作用。3.1.4 牡荊素 牡荊素是一種廣泛存在于植物中的黃酮類化合物，具有抗炎、抗氧化、抗腫瘤等藥理活性。研究證明，牡荊素可以明顯改善酒精性肝損傷小鼠血清AST、ALT、總膽固醇（TC）、三酰甘油（TG）、總膽紅素（TBIL）的異常升高及肝臟病理形態(tài)改變，使ALD小鼠轉(zhuǎn)氨酶、血脂、尿酸等指標趨向正常發(fā)展。在體外實驗中，牡荊素能恢復(fù)L02肝細胞的細胞活力，抑制酒精引起的AST升高。Yuan等研究發(fā)現(xiàn)，與正常細胞相比，酒精刺激后的L02細胞P53總蛋白和乙酰化P53表達均明顯上調(diào)，同時

Sirt1

和

Bcl-2

的基因表達明顯受到抑制，而牡荊素能夠顯著逆轉(zhuǎn)酒精導(dǎo)致的肝臟損傷，表明牡荊素可能通過Sirt1/P53介導(dǎo)的線粒體凋亡途徑對乙醇誘導(dǎo)的L02細胞損傷發(fā)揮保護作用。此外，牡荊素處理還能夠顯著降低ALD小鼠肝臟MDA含量和TNF-

α

的蛋白表達水平，并增加SOD的活性，抑制ALD小鼠肝臟氧化應(yīng)激和炎癥，減輕肝損傷。3.1.5 芹菜素 芹菜素，又稱芹黃素、洋芹素，是廣泛存在于溫熱帶蔬菜中的一種黃酮類化合物，尤以芹菜中含量為高。芹菜素具有心腦血管保護、抗腫瘤、抗病毒等多種生物活性。在56%酒精灌胃誘導(dǎo)的ALD小鼠中，Wang等研究發(fā)現(xiàn)芹菜素能夠通過增加肝臟谷胱甘肽（GSH）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）和谷胱甘肽還原酶（GR）的活力，降低MDA含量和CYP2E1的蛋白表達，增強機體抗氧化能力，減輕酒精暴飲導(dǎo)致的肝臟氧化損傷。同時芹菜素能夠抑制TNF-

α

的表達，減輕肝臟炎癥。此外，芹菜素可以調(diào)控脂質(zhì)代謝相關(guān)蛋白PPAR

α

、SREBP-1c、Fasn表達，減少小鼠肝臟脂質(zhì)過度蓄積，調(diào)控肝臟脂質(zhì)代謝。Li等研究發(fā)現(xiàn)，芹菜素還能通過P38-P21信號通路抑制肝癌細胞的生長。綜上所述，芹菜素可減輕ALD的肝臟炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激和脂質(zhì)積聚，有效減緩ALD的發(fā)展進程。

3.2 黃酮醇類槲皮素

槲皮素是一種天然的黃酮醇類化合物，其具有抗氧化、抗病毒、抗炎等多種生物活性。槲皮素可以降低乙醇所致的脂滴包被蛋白2（PLIN2）的過度表達，刺激自噬溶酶體增多，恢復(fù)線粒體形態(tài)，從而增強脂質(zhì)自噬，減輕小鼠酒精性脂肪肝。P2X7受體（P2X7R）可以被細胞外ATP激活，在脂質(zhì)代謝、炎癥分子釋放、氧化應(yīng)激等方面發(fā)揮重要作用。Zhao等研究證明，通過阻斷P2X7R，抑制NLRP3炎性小體的生成，能夠有效抑制酒精攝取導(dǎo)致的脂質(zhì)過度積累、炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激。另一項研究發(fā)現(xiàn)，炎性細胞因子的產(chǎn)生可導(dǎo)致氧化應(yīng)激，并進一步加重炎癥反應(yīng)和肝臟纖維化。而槲皮素則可以通過P2X7R介導(dǎo)PI3K/Keap-1/NRF2信號通路減輕酒精誘導(dǎo)的肝臟脂肪變性，抑制炎癥因子的過度產(chǎn)生釋放。此外，槲皮素還可以通過提高機體抗氧化酶的活性，抑制MDA及ROS的生成，上調(diào)NRF2及HO-1蛋白的表達水平，對酒精誘導(dǎo)的肝細胞氧化應(yīng)激發(fā)揮保護作用。長期飲酒導(dǎo)致機體儲存鐵增多，發(fā)生鐵過載，從而產(chǎn)生大量過氧化物質(zhì)，損傷肝細胞，作為一種天然的螯合劑，槲皮素能夠螯合機體中的鐵，減少鐵過載導(dǎo)致的氧化損傷。此外，槲皮素還能夠通過BMP6/SMAD4信號通路增加鐵的轉(zhuǎn)運，減少溶酶體中鐵的含量，進一步改善酒精性肝損傷。

3.3 二氫黃酮類——柑橘類黃酮

柑橘類黃酮包括柚皮素、橙皮素、陳皮素和橘皮素等500多種化合物，主要存在于柑橘屬植物果實的外皮中。根據(jù)黃酮結(jié)構(gòu)命名大致可分為黃酮苷類和多甲氧基黃酮等。它們在抗炎、抗氧化、調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝和改善胰島素敏感性方面都具有很好的作用。

提前給予小鼠含有川陳皮素和橘皮素的柑橘提取物能夠有效預(yù)防酒精過度攝入導(dǎo)致的肝臟脂質(zhì)代謝障礙和氧化應(yīng)激，其作用機制主要是通過激活A(yù)MPK調(diào)控脂質(zhì)代謝，并通過增加NRF2的表達，提高機體抗氧化能力，實現(xiàn)肝保護作用。此外，柚皮素還能減少細胞凋亡和DNA損傷，通過調(diào)控

Cyp2y3

、

Cyp3a56

、

Hmgcra

、

Hmgcrb

、

Fasn

、

Fabp10

、

Fads2

和

Echs1

等脂質(zhì)代謝相關(guān)基因，能夠明顯改善酒精導(dǎo)致的肝臟脂肪蓄積及肝臟脂肪變性。多項研究證明，柚皮素可以提高ALD大鼠酒精代謝酶的活性，提高機體抗氧化能力，減輕酒精所致的脂質(zhì)蓄積及肝損傷。此外，柚皮素還能顯著降低ALD大鼠血清的AST、ALT水平，降低TNF-

α

、IL-6、NF

κ

B、環(huán)氧合酶2（COX-2）、巨噬細胞炎性蛋白2（MIP-2）、CD14等炎癥標志物的表達水平，減輕酒精喂食所致的大鼠肝臟炎癥性損傷。此外，Meng等研究證明，由橙皮素結(jié)構(gòu)修飾而成的橙皮素衍生物4-甲基香豆素-[5，6-g]-橙皮素（4-MCH）可以顯著減少酒精刺激所致的小鼠原代巨噬細胞及RAW264.7細胞中IL-6和TNF-

α

的釋放，抑制NF-

κ

B的激活，上調(diào)PPAR

γ

的蛋白表達，從而減輕酒精所致肝臟炎癥反應(yīng)。

3.4 二氫黃酮醇類

3.4.1 二氫楊梅素 二氫楊梅素又名雙氫楊梅素、蛇葡萄素，為二氫黃酮醇類化合物，存在于葡萄科、楊梅科、杜鵑科、藤黃科、大戟科及柳科等植物中，其中在葡萄科的藤茶中含量最高。除具有黃酮類化合物的一般生物學功能外，二氫楊梅素還具有解除醇中毒、預(yù)防酒精肝、脂肪肝、抑制肝細胞惡化、降低肝癌的發(fā)病率等藥理活性。研究發(fā)現(xiàn)，二氫楊梅素能夠有效緩解乙醇中毒癥狀，減輕乙醇對肝臟的損傷，目前二氫楊梅素已經(jīng)在美國作為防止酒精宿醉的營養(yǎng)補充劑使用。Shen等研究發(fā)現(xiàn)二氫楊梅素可以改善大鼠酒精暴露后產(chǎn)生的戒斷跡象，包括乙醇耐受性、焦慮增加和癲癇易感性，為酒精使用障礙相關(guān)藥物的研發(fā)提供了啟發(fā)。Liu等給予人肝微粒體二氫楊梅素處理，體外檢測八種人肝臟CYP亞 型（即1A2、3A4、2A6、2E1、2D6、2C9、2C19和2C8）變化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)二氫楊梅素能有效抑制CYP3A4和CYP2E1的活性，顯示其對ALD治療的潛在作用。事實上，二氫楊梅素對乙醇誘導(dǎo)的小鼠的肝臟脂肪變性、三酰甘油積累和肝臟炎癥損傷均有治療作用。對酒精喂養(yǎng)的ALD小鼠進行腹腔注射二氫楊梅素（5、10 mg·kg），能夠顯著提高乙醇代謝相關(guān)酶的表達，并降低小鼠血清中炎性細胞因子和趨化因子的水平。同時，二氫楊梅素能夠通過激活A(yù)MPK通路，增強CPT-1A和ACC的表達，加速ALD小鼠的脂質(zhì)代謝。體外實驗中，二氫楊梅素也能夠改善酒精誘導(dǎo)的HepG2細胞中炎癥因子和趨化因子的表達異常，減輕細胞炎癥。Qiu等研究發(fā)現(xiàn)，在酒精誘導(dǎo)的肝損傷小鼠中，二氫楊梅素能夠顯著降低慢性酒精暴露引起的AST、ALT、血清堿性磷酸酶（ALP）水平異常升高，部分恢復(fù)肝臟細胞病理形態(tài)，并顯著下調(diào)炎癥細胞因子IL-1

β

和IL-6的表達水平，減輕肝臟炎癥。在作用機制上，二氫楊梅素可恢復(fù)肝臟中CYP2E1、Kelch樣環(huán)氧氯丙烷相關(guān)蛋白1（Keap-1）、NRF2和HO-1的表達，改善NF-

κ

B和NRF2的核定位異常，減輕酒精誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激所致的肝臟損傷。此外，二氫楊梅素也可以通過減少TGF-

β

的表達，抑制肝臟纖維化，并影響肝癌細胞增殖及遷移，誘導(dǎo)小鼠肝癌細胞凋亡，從而起到多重肝保護作用。3.4.2 水飛薊素 水飛薊素是提取于水飛薊植物的干燥果實及種子的一種天然的黃酮木脂素類化合物，其主要成分為水飛薊賓、異水飛薊賓、水飛薊寧和水飛薊亭。水飛薊素是一種自由基清除劑，能夠調(diào)節(jié)與氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)和纖維化發(fā)生相關(guān)的酶，起到肝保護作用。Das等研究發(fā)現(xiàn)，水飛薊素可以通過增強機體抗氧化酶含量，減輕酒精導(dǎo)致的機體氧化應(yīng)激壓力。Song等研究表明，水飛薊素能夠以劑量依賴的方式下調(diào)血清中ALT的含量，減輕肝細胞壞死和脂質(zhì)沉積，從而減輕急性酒精攝入引起的肝損傷，進一步的研究發(fā)現(xiàn)，水飛薊素主要是通過減少肝臟TNF-

α

的產(chǎn)生來發(fā)揮作用。此外，水飛薊素對慢性酒精性脂肪肝也有改善作用，能夠明顯減輕酒精飼料喂食引起的肝臟脂質(zhì)過度積聚和炎癥，這些作用主要是通過下調(diào)NF-

κ

B、細胞間黏附分子1（ICAM-1）、IL-6等蛋白的表達實現(xiàn)的，其抗炎、抗氧化作用顯著，耐受性好，不良事件發(fā)生率低，目前已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于酒精相關(guān)性肝病的治療中。大量臨床研究結(jié)果顯示，水飛薊素可以明顯降低酒精肝患者的轉(zhuǎn)氨酶水平，并增強肝臟抗氧化酶活性，減輕酒精性肝損傷。此外，在ALD合并肝硬化患者中，長期攝入水飛薊素還能有效降低患者的病死率。

3.5 異黃酮類——葛根素

葛根素是從豆科植物葛及野葛的根中分離出的異黃酮類衍生物。Liu等研究發(fā)現(xiàn)，葛根素能夠通過調(diào)控AMPK

α

/ACC信號通路，減輕酒精誘導(dǎo)的肝臟脂肪變性。此外，葛根素還能夠明顯改善乙醇所致的肝臟三酰甘油和膽固醇異常上升，調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝相關(guān)基因（

Cyp2y3

、

Cyp3a65

、

Adh8a

、

Adh8b

、

Hmgcrb

和

Fasn

）、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和DNA損傷相關(guān)基因（

Chop

、

Edem1

和

Atf6

）的表達，并降低炎癥因子（IL-1

β

、TNF-

α

）表達水平，從而減輕肝臟脂質(zhì)蓄積及炎癥。Tian等研究發(fā)現(xiàn)，葛根素還可以調(diào)節(jié)COX-2和花生四烯酸-5-脂氧合酶（ALOX5）途徑，減輕乙醇所致的大鼠慢性酒精性肝損傷。此外，葛根素也能夠通過抑制聚ADP核糖聚合酶1（PARP1）的表達來減輕小鼠肝纖維化程度。

4 前景與展望

隨著ALD發(fā)病率的逐年升高，由其引發(fā)的肝硬化和肝癌發(fā)生也明顯增多。目前戒酒仍然是臨床上ALD防治的主要手段，但即便是完全酒精戒斷，仍有約73%的患者會最終發(fā)展為慢性肝炎及肝纖維化。因此開發(fā)新的ALD針對性藥物顯得越來越重要。越來越多的研究表明，黃酮類化合物具有突出的肝保護作用，可能為ALD相關(guān)治療藥物的研發(fā)提供新的思路和借鑒。其中二氫楊梅素能夠明顯減輕酒精中毒癥狀和使用依賴，有望開發(fā)為酒精使用障礙相關(guān)藥物；芹菜素、槲皮素、葛根素等均有明顯的減少脂質(zhì)合成、增強促進脂質(zhì)代謝的作用，能夠減輕酒精引起的肝臟脂質(zhì)蓄積；水飛薊素、漢黃芩素、柑橘類黃酮等抗炎抗氧化作用顯著，有望成為防治酒精性肝炎的待開發(fā)藥物成分；而漢黃芩素、黃芩素、木蝴蝶素等對肝臟纖維化有明顯改善作用，能夠有效減緩ALD的纖維化發(fā)展進程。目前，黃酮類化合物防治ALD的臨床研究還處于起步階段，相關(guān)化合物影響ALD的具體機制、其臨床應(yīng)用的安全性和長期有效性還有待進一步研究。但鑒于其在防治ALD各個病程階段的顯著作用，對近年來天然黃酮類化合物抗ALD的基礎(chǔ)研究進行系統(tǒng)性總結(jié)具有非常重要的意義。在此本文歸納綜述了天然藥物中的黃酮類化合物對ALD的改善作用及相關(guān)機制的研究進展（見表1及圖1），揭示黃酮類化合物在ALD治療方面有開發(fā)潛力，為天然藥物更高效地應(yīng)用于臨床提供新的思路，也為基于黃酮類化合物治療ALD的新藥研發(fā)和應(yīng)用提供科學依據(jù)和參考。

圖1 黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)Fig 1 Structure of flavonoids

表1 天然藥物中的黃酮類化合物對ALD的作用機制及分子靶點
Tab 1 Molecular targets of flavonoids from natural medicines on ALD and related mechanism

種類 名稱 ALD模型 給藥劑量 藥理活性 分子靶點和通路 文獻黃酮 黃芩苷 Wistar大鼠 50 mg/（kg·d）灌胃14 d 抗氧化 NRF2/HO-1/NQO1 [24]小鼠 200 mg/（kg·d）腹腔注射11 d 抗氧化 NRF2，CYP2E1 [25]Wistar大鼠L02細胞120 mg/（kg·d）灌胃4周25/50 μmol·L－1處理24 h抗氧化，抗炎 SHH，Smo，Ptc-1，GLI-1 [27]SD大鼠 200 mg·kg－1腹腔注射2次 抗炎 TLR4 [28]HepG2細胞 25/50 μmol·L－1處理24 h 抗氧化，抗凋亡 iNOS [26]漢黃芩素 C57BL/6J小鼠NCTC 1469細胞20 mg/（kg·d）灌胃2周25 μmol·L－1處理12 h減少脂肪毒性 PPARα，AdipoR2 [29]C57BL/6小鼠RAW264.7細胞25/50/100 mg/（kg·d）灌胃16 d 20 μg·mL－1處理24 h抗炎 PPARγ，NF-κB [30]C57BL/6小鼠HSC-T6細胞，LX2細胞10/20/40 mg/（kg·d）腹腔注射5 d 1.25 μg·mL－1處理36 h抗纖維化 Caspase-3，Caspase-9，Bax/Bcl-2[31]HepG2細胞，MHCC97L細胞10/20 μmol·L－1處理24 h 調(diào)控細胞增殖 GSK-3β [34]木蝴蝶素 ICR小鼠L02細胞40 mg/（kg·d）灌胃4周20 μmol·L－1處理24/48 h抗炎、抗細胞焦亡PGC-1α/Mfn2 NLRP3，Caspase-1[35]L02細胞 20 μmol·L－1處理24 h 減少脂質(zhì)合成，增強脂質(zhì)代謝SREBP-1c，F(xiàn)asn，SCD1，PPARα，CPT-1A，HIF-1a[36]ICR小鼠 40 mg/（kg·d）灌胃4周 抗纖維化 YAP/HIF-1α [38]C57BL/6小鼠原代肝星狀細胞20/30/40 mg/（kg·d）腹腔注射4周40 μmol·L－1處理24 h抗炎，激活自噬，抗纖維化PI3K/AKT/mTOR [39][40]HepG2細胞 6/8/10/15/20/25 μmol·L－1處理72/96 h調(diào)控細胞增殖 PKM1/HNF4α [41]牡荊素 昆明小鼠L02 細胞20/40/80 mg/（kg·d）灌胃4周5/10/20 μmol·L－1處理24 h抗凋亡、抗氧化 Sirt1/P53 [42]芹菜素 昆明小鼠 150/240/300 mg/（kg·d）灌胃30 d 增強脂質(zhì)代謝，抗氧化PPARα，SREBP-1c，F(xiàn)ASN [43]HepG2細胞 10/20 μmol·L－1，處理24 h 調(diào)控細胞增殖 P38-P21 [44]黃酮醇 槲皮素 C57BL/6J 小鼠 100 mg/（kg·d）12周灌胃 增強脂質(zhì)自噬 LC3，P62，PLIN2，AMPK [45]

續(xù)表1

種類 名稱 ALD模型 給藥劑量 藥理活性 分子靶點和通路 文獻斑馬魚 25/50/100 μmol·L－1處理48 h 減輕脂肪變性 P2X7R，PI3K/Keap-1/NRF2[46]SD大鼠原代肝細胞25/50/100/150/200 μmol·L－1 處理2 h 抗氧化 NRF2/HO-1 [47][48]C57BL/6小鼠 100 mg/（kg·d）灌胃15周 減少鐵沉積 BMP6/SMAD4 [49-51]二氫黃酮 陳皮素 C57BL/6小鼠 50/100/200 mg/（kg·12 h）灌胃3次 抗氧化，增強脂質(zhì)代謝AMPK，NRF2 [53]橘皮素柚皮素 斑馬魚 2.5/5/10 mg·L－1處理48 h 增強脂質(zhì)代謝，減輕內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，抗凋亡Cyp2y3，Cyp3a65，Hmgcra，Hmgcrb，F(xiàn)abp10，F(xiàn)ads2，Echs1，F(xiàn)asn，Chop，Edem1[54]Wistar大鼠 50 mg/（kg·d）灌胃14 d 抗炎 TNF-α，IL-6，NF-κB，COX-2，MIP-2，CD14[55]二氫黃酮醇 水飛薊素 C57BL/6 小鼠 200 mg/（kg·12 h）灌胃3次 抗炎 TNF-α [68]BALB/c小鼠 200 mg/（kg·d）灌胃12周 抗氧化，抗炎 IL-10，TNF-α，IFN-γ，VEGF-A，TGF-β，IL-14[67]SD大鼠 100/150/200 mg/（kg·d）灌胃6周 抗氧化，抗炎 NF-κB，ICAM-1，IL-6 [69]二氫楊梅素C57BL/6J小鼠HepG2 細胞，VL-17細胞5/10 mg/（kg·d）腹腔注射6周（每周5次）2.5/5 μmol·L－1處理24 h增強脂質(zhì)代謝，減輕乙醇毒性AMPK，ACC，CPT-1A [62]C57BL/6小鼠 75/100 mg/（kg·d）加入飲食給藥6周 增強自噬，抗氧化P62，Keap-1，HO-1，CYP2E1[63]小鼠Hepal-6 細胞10/50/100 μmol·L－1處理48 h 調(diào)控細胞增殖和遷移TGF-β [64]異黃酮 葛根素 斑馬魚 12.5/25/50 μmol·L－1處理48 h 增強脂質(zhì)代謝，減輕內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，抗炎Cyp2y3，Cyp3a65，Adh8a，Adh8b，Hmgcrb，F(xiàn)asn，Chop，Edem1，ATF6，IL-1β，TNF-α[70]SD大鼠 1 g/（kg·d）灌胃2周 抗氧化，增強脂質(zhì)代謝ALOX-5，COX-2 [71]