長鏈非編碼RNA M 通過作為miRNA-1的中心誘導血管平滑肌細胞增殖和遷移①

艾文偉 張 明 胡 杰 章志玲 鄔 甦（江西省人民醫院，南昌 330006）

血管平滑肌細胞（vascular smooth muscle cell，VSMC）是血管膜的唯一細胞成分，處于血管中層，能夠調節血管張力以及維持血管功能［1-2］。隨著人們生活習慣的改變，動脈粥樣硬化等內膜增厚性疾病的發病率呈現逐漸上升的趨勢，其主要病理因素是VSMC 的異常增殖及遷移，因而研究VSMC 異常增殖及遷移有關的分子機制是治療心血管等疾病的重要途徑［3-5］。LncRNA 除了能夠作為基因組中的一種調控分子，還可以作為競爭性內源RNA與miRNA結合進行調控表達［6-7］，而微小RNA是一類較小的內源性非編碼單鏈RNA，能夠調控各種病理有關的基因表達，包括細胞增殖、遷移或分化等過程［8-9］。但是目前對LncRNA 競爭性結合miRNA 調控細胞內有關因子的研究還不多，因而對這一機制進行研究，探討其對VSMC細胞增殖及遷移的影響。

1 材料與方法

1.1 材料 VSMC（上海賽百慷生物技術股份有限公司）；胎牛血清、DMEM 培養液、0.25%胰蛋白酶（成都西亞化工股份有限公司）；MTT 檢測試劑盒（上海酶聯生物）；Transwell 小室（北京萌壯科技有限公司）；pmirGLO 載體（北京華越洋生物）；Lipo?fectamineTM2000（北京科展生物科技有限公司）；逆轉錄試劑盒、RT-PCR 試劑盒、RT-PCR 引物（北京厚生博泰科技有限公司）；PDGF-BB（上海經科化學科技有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 細胞培養 將VSMC 在含有10%胎牛血清的DMEM 培養液中進行培養，在37℃、5%CO2條件下培養，放置于恒溫培養箱中，2 d 換1 次培養液，3～5 d 時使用0.25%的胰酶進行消化傳代，當細胞培養至3～5代并且處于對數生長期時收集以進行后續實驗。

1.2.2 細胞轉染 將培養的VSMC 細胞分為：空白對照……