抑制TAK1可加重甲苯二異氰酸酯誘導(dǎo)的哮喘小鼠氣道炎癥

哮喘具有多種臨床表型和內(nèi)因型，大部分哮喘患者在吸入性糖皮質(zhì)激素等治療后可以有效控制，但仍有5%～20%的哮喘患者即使用高劑量吸入性糖皮質(zhì)激素治療仍控制不佳，這些重度哮喘或激素抵抗型哮喘的發(fā)生機(jī)制尚未完全闡明。其中，絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號(hào)通路的過(guò)度激活可能在激素抵抗過(guò)程發(fā)揮著重要作用。

本課題組長(zhǎng)期關(guān)注甲苯二異氰酸酯（TDI）哮喘模型氣道炎癥發(fā)生機(jī)制，有研究發(fā)現(xiàn)，TDI誘導(dǎo)的是一種激素抵抗型哮喘模型，我們前期研究發(fā)現(xiàn)MAPK信號(hào)通路在TDI哮喘模型明顯活化，且阻斷MAPK信號(hào)通路能有效減輕TDI哮喘小鼠的氣道炎癥、氣道屏障破壞及氣道高反應(yīng)性，提示MAPK通路可能與激素抵抗有關(guān)。轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β激活激酶1（TAK1）是激活下游包括NF-κB和MAPK信號(hào)通路活化的關(guān)鍵酶，在調(diào)節(jié)各種細(xì)胞類型的炎癥、免疫和細(xì)胞死亡發(fā)揮關(guān)鍵作用，為治療炎癥性疾病的潛在靶點(diǎn)。有小樣本研究證實(shí)阻斷TAK1可以恢復(fù)激素抵抗哮喘患者來(lái)源的巨噬細(xì)胞對(duì)激素的敏感性。有文獻(xiàn)報(bào)道TAK1可能通過(guò)影響Th17通路在中性粒細(xì)胞哮喘免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用。然而，TAK1是否在TDI誘導(dǎo)的激素抵抗型哮喘模型扮演重要角色及如何發(fā)揮作用尚不清楚。因此，本研究旨在探討TAK1對(duì)TDI哮喘小鼠氣道炎癥的影響。

1 材料和方法

1.1 試劑

丙酮、橄欖油、TDI（sigma）；TAK1 抑制劑5Z-7-Oxozeaenol（sigma），RIPK1抑制劑Necrostatin-1（MCE），CCK8（同仁），p-TAK1、TAK1、p-ERK、P38、p-P38、JNK、p-JNK、RIPK1、p-RIPK1 等一抗（CST），ERK 一抗（proteintech），Caspase8 一抗（proteintech），GADPH 一抗（proteintech），IRDye熒光二抗（licor），ELISA試劑盒（賽默飛），蘇木素染液，伊紅染液，凱基全蛋白提取試劑盒等。

1.2 TDI哮喘模型建立及動(dòng)物干預(yù)

SPF級(jí)雄性BALB/c小鼠64只（南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心），6～8周，本實(shí)驗(yàn)經(jīng)南方醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。……