腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的三陰性乳腺癌組織中C-erbB-2 NuSAP1表達(dá)及意義分析

劉向華, 呂勇剛, 孟慶杰, 韓曉剛, 張浩萌, 印玉龍

(西北大學(xué)附屬醫(yī)院/西安市第三醫(yī)院甲乳外科, 陜西 西安 710000)

近年來,惡性腫瘤已成為全球重要的公共健康問題,據(jù)我國2017年癌癥統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示,乳腺癌已成為女性最為常見惡性腫瘤,約占所有惡性腫瘤的13%,嚴(yán)重威脅到女性生命安全[1]。其中三陰性乳腺癌作為一類獨(dú)立亞型,獲得了廣泛的關(guān)注,其作為雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)與對(duì)應(yīng)的人表皮生長(zhǎng)因子受體(HER-2)均歸屬于陰性范疇的一類特殊癌癥,具有惡性程度高、病理分級(jí)晚常見遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和預(yù)后差等特點(diǎn),侵襲性強(qiáng),通常伴隨淋巴轉(zhuǎn)移等問題[2]。因三陰性乳腺癌內(nèi)分泌和抗靶向等療法療效有限,治療手段較為單一,仍以手術(shù)治療為主,放化療為輔,這對(duì)改善患者生存預(yù)后有一定效果,但腫瘤的轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)仍對(duì)患者造成了嚴(yán)重的困擾,針對(duì)三陰性乳腺癌缺乏有效的靶向治療這一難題,我們需不斷探索新靶點(diǎn)以指導(dǎo)臨床[3]。乳腺癌中表皮生長(zhǎng)因子受體2(C-erbB-2)的表達(dá)產(chǎn)物可調(diào)節(jié)參與乳腺組織的生長(zhǎng)發(fā)育,C-erbB-2的高表達(dá)提示腫瘤惡性程度高、預(yù)后差[4]；核仁紡錘體相關(guān)蛋白1(NuSAP1)是新發(fā)現(xiàn)的一種脊椎動(dòng)物蛋白,在細(xì)胞有絲分裂和增殖中有重要作用,NuSAP1基因的高表達(dá)與腫瘤發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后不良關(guān)系密切[5]。為揭示C-erbB-2和NuSAP1的表達(dá)于三陰性乳腺癌的關(guān)系,為淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移高位評(píng)估提高參考,本研究特作出以下分析。

1 資料與方法

1.1一般資料：回顧性選取2016年7月至2020年10月于本院治療的150例乳腺癌患者的臨床資料。納入標(biāo)準(zhǔn)：①均接受乳腺外科手術(shù)治療,且經(jīng)病理學(xué)檢查確診為乳腺癌,并伴有乳房腫塊、疼痛、皮膚改變等表現(xiàn)；②術(shù)前未接受過放化療；③術(shù)前未發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移；④臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①乳房手術(shù)史；②乳腺癌轉(zhuǎn)移者；③合并嚴(yán)重基礎(chǔ)性疾病和其他惡性腫瘤者。依據(jù)免疫組化情況將其分為觀察組(n=49)和對(duì)照組(n=101),其中觀察組為三陰性乳腺癌患者,對(duì)照組為非三陰性乳腺癌患者。三陰性的判定標(biāo)準(zhǔn)為：ER、PR免疫組化染色陽性細(xì)胞在10%以下；HER-2免疫組化染色陰性或1+、2+者以顯色原位雜交進(jìn)一步判定HER-2狀態(tài),ER、PR、HER-2均為陰性即可判定。兩組基本資料比較,無明顯差異(P>0.05),見表1。

表1 兩組一般資料比較

1.2方法：收集取患者腫瘤和癌旁組織中的C-erbB-2和NuSAP1表達(dá)水平,大致方法如下：將患者患者腫瘤和癌旁組織置于中性甲醛溶液中固定30h后,使用自來水沖洗組織表面固定液,并進(jìn)行脫水處理,當(dāng)組織塊透明時(shí)進(jìn)行浸蠟處理。石蠟包埋完成后切片厚度大約3μm,進(jìn)行HE染色復(fù)查病理類型后行免疫組化染色。每張切片隨機(jī)選取10個(gè)視野,依據(jù)細(xì)胞染色程度和陽性細(xì)胞占比判斷C-erbB-2和NuSAP1的表達(dá)情況。

1.3觀察指標(biāo)

1.3.1C-erbB-2結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：將細(xì)胞膜、細(xì)胞核、細(xì)胞漿中淺黃、棕黃的小顆粒判定為陽性細(xì)胞,C-erbB-2為胞膜陽性。依據(jù)半定量計(jì)分方法將染色程度分級(jí)：無著色計(jì)為0分,淡黃色計(jì)為1分,棕黃色計(jì)為2分,棕褐色計(jì)為3分；著色陽性細(xì)胞百分比：百分比≤5%計(jì)為0分,6%～25%計(jì)為1分,26%～50%計(jì)為2分,≥51%計(jì)為3分。以染色程度和著色陽性細(xì)胞百分比乘積作為陽性系數(shù)：0、1分為陰性(-),2、3分為弱陽性(+),4～6分為中陽性(++),7～9分為強(qiáng)陽性(+++),分值≥4分則為高表達(dá)。

1.3.2NuSAP1結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：染色強(qiáng)度分級(jí)：0分：無著色,1分：淡黃色,2分：棕黃色,3分：棕褐色；著色陽性細(xì)胞百分比：1分：百分比≤10%,2分：11%～50%,3分：51%～80%,4分：≥81%。兩項(xiàng)乘積為陽性系數(shù)：0分為陰性(-),1～4分為弱陽性(+),5～8分為中陽性(++),9～12分為強(qiáng)陽性(+++),分值≥5分則為高表達(dá)。

2 結(jié) 果

2.1兩組患者C-erbB-2陽性表達(dá)情況比較：觀察組C-erbB-2陽性高表達(dá)率為87.76%,明顯高于對(duì)照組63.37%(P<0.05),秩和檢驗(yàn)結(jié)果顯示,兩組間C-erbB-2陽性表達(dá)強(qiáng)度比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見表2。

表2 兩組患者C-erbB-2陽性表達(dá)率比較n(%)

2.2兩組患者NuSAP1陽性表達(dá)情況比較：觀察組NuSAP1陽性表達(dá)率為79.59%,明顯高于對(duì)照組61.39%(P<0.05),秩和檢驗(yàn)結(jié)果顯示,兩組間NuSAP1陽性表達(dá)強(qiáng)度比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見表3。

表3 兩組患者NuSAP1陽性表達(dá)率比較n(%)

2.3研究組患者C-erbB-2和NuSAP1表達(dá)與腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況：49例三陰性乳腺癌患者中,未出現(xiàn)腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者22例,出現(xiàn)腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者27例。C-erbB-2和NuSAP1高表達(dá)組腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率明顯高于低表達(dá)組(P<0.05),見表4。

表4 研究組患者C-erbB-2和NuSAP1表達(dá)水平與腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況n(%)

3 討 論

乳腺癌作為當(dāng)前對(duì)女性健康危害最為嚴(yán)重的腫瘤之一,盡管目前診療技術(shù)有所進(jìn)步,但仍是造成女性癌癥死亡的主要原因。科學(xué)的認(rèn)知乳腺癌在分子、組織和治療反應(yīng)等反面的區(qū)別,有助于實(shí)現(xiàn)針對(duì)性治療[6]。國外有研究[7]發(fā)現(xiàn),三陰性乳腺癌具有侵襲性強(qiáng)、生存率低、易發(fā)生復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移等特點(diǎn)。目前針對(duì)乳腺癌的治療以手術(shù)和放化療為主,這在一定程度上可有效改善患者預(yù)后,延長(zhǎng)患者生存期限,但腫瘤轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)等仍為亟需解決的難題[8]。近年來,腫瘤細(xì)胞的異質(zhì)性得到了廣泛關(guān)注,經(jīng)學(xué)者研究分析發(fā)現(xiàn)原發(fā)與復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移灶構(gòu)成特殊的異質(zhì)性,不同部位的腫瘤細(xì)胞也具有不用的細(xì)胞生物學(xué)行為,這種異質(zhì)性對(duì)術(shù)后輔助綜合治療有重要臨床作用[9]。

生理狀態(tài)下,乳腺組織中癌基因C-erbB-2作為表皮生長(zhǎng)因子受體家族成員之一,通常不表達(dá)或僅微量表達(dá),正常情況下不與特異性配體結(jié)合處于非激活狀態(tài),其表達(dá)產(chǎn)物主要參與乳腺組織的正常生長(zhǎng)發(fā)育,當(dāng)受到外界致癌因素刺激與特異性配體結(jié)合后致使自身異常活化,使C-erbB-2結(jié)構(gòu)或表達(dá)失控,部分細(xì)胞不受控制的獨(dú)立生長(zhǎng)。當(dāng)C-erbB-2出現(xiàn)過度表達(dá)時(shí),表明機(jī)體存在遺傳性損傷,同時(shí)C-erbB-2也可調(diào)控腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖和分化,促進(jìn)腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移,是一類重要的腫瘤標(biāo)志物[10]。研究[11]顯示,約1/3的乳腺癌組織表達(dá)C-erbB-2會(huì)加速細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化,誘導(dǎo)腫瘤發(fā)生。目前,C-erbB-2已被證實(shí)在乳腺之外的器官如肝、腎、肺等腫瘤中均有過表達(dá),且表達(dá)水平與惡性程度呈明顯正相關(guān)關(guān)系。本研究中,三陰性乳腺癌患者C-erbB-2陽性高表達(dá)率(87.76%)明顯高于非三陰性乳腺癌患者(63.37%%),且兩組之間比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。C-erbB-2蛋白主要位于腫瘤細(xì)胞胞膜中,呈棕黃色顆粒,著色越深,呈陽性高表達(dá),表明C-erbB-2的表達(dá)與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展存在一定聯(lián)系。NuSAP1是一種分子量為55kDa的蛋白質(zhì),此前在一些腫瘤中可以發(fā)現(xiàn),NuSAP1對(duì)腫瘤的發(fā)生發(fā)展具有促進(jìn)作用。大量研究表明NuSAP1可以預(yù)測(cè)乳腺癌的不良預(yù)后,并且與乳腺癌的ER、PR狀態(tài)有關(guān)[12]。本研究中,三陰性乳腺癌患者NuSAP1陽性高表達(dá)率為79.59%,明顯高于非三陰性乳腺癌患者61.39%(P<0.05),NuSAP1在乳腺癌中表達(dá)增高,表示預(yù)后不良問題,這與張順禮[13]分析研究結(jié)果是一致的,Liu[14]等實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),NuSAP1的高表達(dá)預(yù)示著結(jié)腸癌預(yù)后不良,表明NuSAP1對(duì)預(yù)后有重要的指導(dǎo)作用。但目前NuSAP1在乳腺癌中的生物學(xué)功能尚未完全明確,可能與調(diào)節(jié)Went/β-catenin和EMT信號(hào)通路有關(guān)。本研究中淋巴轉(zhuǎn)移組患者C-erbB-2和NuSAP1陽性高表達(dá)率均明顯高于無淋巴轉(zhuǎn)移組(P<0.05),表明C-erbB-2和NuSAP1的表達(dá)情況與腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況存在密切聯(lián)系,Xu[15]等曾經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)敲除NuSAP1基因可通過調(diào)節(jié)BTG2/P13K/Akt信號(hào)抑制非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。

綜上所述,三陰性乳腺癌患者中C-erbB-2和NuSAP1陽性表達(dá)率較高,且與腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān),可作為預(yù)后預(yù)測(cè)指標(biāo)。