時間分辨免疫熒光法與化學發光法檢測乙型肝炎血清標志物結果的一致性分析

戶 丹，張憲華

河南省安陽市第五人民醫院檢驗科，河南安陽 455000

乙型肝炎是由乙型肝炎病毒(HBV)引起的以肝臟病變為主的傳染病，HBV感染是全球性的公共衛生問題，具有較強的傳染性，可通過血液傳播和母嬰傳播，HBV感染可導致肝臟病變，嚴重者可危及生命[1]。乙型肝炎血清標志物是臨床用于診斷乙型肝炎的主要依據，可反映乙型肝炎的感染情況，是乙型肝炎防治工作的基礎[2]。臨床上最早使用的檢測方法為酶聯免疫吸附試驗，該方法操作簡單、經濟適用，但仍存在明顯缺陷，如對于操作者的要求較高，極易因污染和操作手法等因素對結果造成影響[3]。化學發光法、時間分辨免疫熒光法是近年來臨床較新的檢測方法，有研究表明，時間分辨免疫熒光法和化學發光法均適用于乙型肝炎血清標志物的檢測[4]。因此，本研究采用時間分辨免疫分析法和化學發光法來檢測乙型肝炎血清標志物，分析兩種方法檢測結果的一致性，現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2018年6月至2020年6月本院收治的乙型肝炎患者88例，其中男40例、女48例，年齡18～52歲、平均(38.45±4.33)歲。納入標準：符合乙型肝炎的診斷標準[5]。排除標準：(1)合并其他疾病；(2)出現不同程度的惡心、腹水、肝大等并發癥；(3)特殊人群(孕婦或哺乳期女性)。所有患者均簽署知情同意書，本研究經本院醫學倫理委員會審查通過。

1.2方法 抽取患者靜脈血5 mL，分離血清，測量乙型肝炎血清標志物，包括乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎表面抗體(抗-HBs)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)、乙型肝炎e抗體(抗-HBe)和乙型肝炎核心抗體(抗-HBc)。時間分辨免疫熒光法檢測：運用時間分辨熒光分析儀(蘇州新波生物技術有限公司，蘇械注準20153401880)進行乙型肝炎血清標志物的檢測，首先復溫試劑盒，并稀釋標志物，加入血液標本后倒入標志物工作液，振蕩孵育后洗滌反應板，加入增強液后使用檢測儀進行檢測。化學發光法檢測：運用美國雅培公司生產的Architect i2000化學發光分析儀(包含有配套試劑盒)，按照儀器使用說明書檢測患者乙型肝炎血清標志物。

1.3陽性、陰性判斷標準 時間分辨免疫熒光法：當HBsAg>0.2 ng/mL、抗-HBs>10 mU/mL、HBeAg>0.5 PEIU/mL、抗-HBe>0.2 PEIU/mL、抗-HBc>0.9 PEIU/mL時分別判定為陽性，反之則為陰性。化學發光法：當HBsAg>6.0 index/mL、HBeAg>15.0 index/mL、抗-HBe>100.0 index/mL、抗-HBc>100.0 index/mL、抗-HBs>30.0 index/mL時分別判為陽性，反之為陰性。

1.4統計學處理 采用SPSS22.0軟件進行統計學分析，計數資料采用例數或百分率表示，組間比較采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。采用Kappa一致性檢驗分析兩種方法檢測結果的一致性。Kappa值：>0.75表示有較好的一致性，>0.80～1.0表示一致性極強，>0.60～0.80表示高度一致性，>0.40～0.60表示中度一致性，>0.20～0.40表示弱一致性，>0～0.20表示微弱一致性，≤0表示一致性極差。

2 結 果

2.1兩種方法檢測乙型肝炎血清標志物的陽性率對比 時間分辨免疫熒光法檢測HBsAg、HBeAg的陽性率高于化學發光法，差異有統計學意義(P<0.05)；兩種方法檢測抗-HBs、抗-HBe、抗-HBc的陽性率對比，差異無統計學意義(P>0.05)，見表1。

表1 兩種方法檢測乙型肝炎血清標志物陽性率對比[n(%)]

2.2兩種方法檢測乙型肝炎血清標志物的結果對比 兩種方法檢測乙型肝炎血清標志物的結果表現出極強或高度一致性，見表2。

表2 兩種方法檢測乙型肝炎血清標志物的結果對比

3 討 論

乙型肝炎是目前全世界內廣泛流行的傳染性的肝臟疾病，相關研究表明，我國乙型肝炎感染患者占肝炎患者總數的30%，若未得到及時治療，后期可進展為肝硬化或肝癌，嚴重危害患者生命健康[6]。因此，對于乙型肝炎的早期臨床檢測十分重要。目前針對乙型肝炎的診斷主要依靠特異性血清病原學檢查，即對患者血清中HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe和抗-HBc等指標進行篩查，由于我國乙型肝炎的患者較多，乙型肝炎的診斷和篩查任務較為繁重，因此如何選擇出一種靈敏性高且經濟適用的檢測方法是臨床診斷乙型肝炎的關鍵。

化學發光法在臨床上的主要優點為操作較為方便，結果穩定，但成本較高，不適用于大批量的標本檢測[7]。時間分辨免疫熒光法具有靈敏度較高、特異性較強、試驗結果保存時間較長等優點，是近年來臨床較新的非同位素免疫分析技術[8]。

本研究結果顯示，時間分辨免疫熒光法檢測HBsAg、HBeAg的陽性率高于化學發光法，抗-HBs、抗-HBe、抗-HBc的陽性率與化學發光法相近，說明時間分辨免疫熒光法檢測對于HBsAg、HBeAg較為敏感。另外，在本研究中，時間分辨免疫熒光法和化學發光法檢測乙型肝炎血清標志物一致性較高。究其原因在于時間分辨免疫熒光法是以鑭系稀土元素及其贅合物作為標志物，代替熒光物質、同位素、酶和化學發光物質，通過時間延遲技術，去除了非特異性熒光干擾，明顯提高了檢測靈敏度，又采用獨特的熒光解離增強技術，可增強有效熒光的效率，從而使靈敏度增高。

綜上所述，時間分辨免疫熒光法和化學發光法均可有效檢測乙型肝炎血清標志物，檢測結果具有較高的一致性，但時間分辨免疫熒光法檢測HBsAg、HBeAg更敏感。