離子色譜法測定鹽酸米托蒽醌注射液中抗氧劑焦亞硫酸鈉的含量

陳寧，張遠杏，黃權華

（深圳華潤九新藥業有限公司，廣東 深圳 518049）

鹽酸米托蒽醌在臨床上又稱米西寧，屬于蒽醌類化療藥物，其化學結構與阿霉素相似，同屬細胞周期非特異性的廣譜抗癌藥，抗腫瘤活性優于或等同于阿霉素類藥物，而心臟毒性則較阿霉素輕，臨床上主要用于治療惡性淋巴瘤、晚期乳腺癌等疾病［1?2］。抗氧劑是注射液中一種普遍使用的附加劑，可延緩藥物氧化，增加藥物的穩定性和有效性［3］。注射劑中常用的抗氧劑有亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉和焦亞硫酸鈉等，一般濃度為0.1%~0.2%。本研究中鹽酸米托蒽醌注射液中添加的抗氧劑為焦亞硫酸鈉，處方濃度為10μg/mL。抗氧劑作為功能性輔料，有必要對其在效期內的含量變化進行檢測。

對于焦亞硫酸鈉的測定，常用的檢測方法主要包括電位滴定法、紫外分光光度法、液相色譜法和離子色譜法等［4?11］。其中，電位滴定法測定注射液時，所需樣品量較大、靈敏度較低，不適用于制劑中痕量焦亞硫酸鈉的測定；使用紫外分光光度法和液相色譜法時，由于鹽酸米托蒽醌注射液為深藍色蒽醌類注射液，顏色較深，且鹽酸米托蒽醌干擾焦亞硫酸鈉的測定導致準確度不夠；而離子色譜法具有專屬、靈敏、準確性高的優點，應用前景良好。本文利用離子色譜法對含有強紫外吸收成分的蒽醌類注射液中的焦亞硫酸鈉含量進行了測定，解決了鹽酸米托蒽醌干擾焦亞硫酸鈉測定這一問題，為蒽醌類注射液中抗氧劑焦亞硫酸鈉含量的測定提供了一種高效、可靠的方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Dionex AQ?1200型離子色譜儀（美國Thermo Fisher Scientific公司）；XS205 Dual Range型電子分析天平（瑞士Mettler?Toledo公司）。

1.2 試藥

鹽酸米托蒽醌注射液（批號：011190801、011190802、011190803、011190804、011190805、011190806、011190901、20180101、20180102、20180103，深圳華潤九新藥業有限公司）；諾肖林（批號：P00033S，Pharma GmbH Co.KG）；焦亞硫酸 鈉（Aladdin，批 號：J1816049，質 量 分 數：99.99%）；甲醛（分析純，廣州化學試劑廠）；超純水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：DionexⅠonPac AS11?HC（4.0mm×250mm）；檢測器：電導檢測器；流速：1.0 mL/min；柱溫：30℃；進樣量：25μL；淋洗液：KOH溶液（淋洗液自動發生器），按表1進行梯度洗脫。

表1 梯度洗脫程序Table 1 The gradient elution program

2.2 溶液的配制

2.2.1 稀釋劑（穩定劑）0.2%（體積分數，下同）甲醛水溶液。

2.2.2 對照品儲備液 取焦亞硫酸鈉10.17 mg，精密稱定，置100 mL棕色量瓶中，用稀釋劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品儲備液。

2.2.3 對照品溶液 精密量取對照品儲備液1 mL，置10 mL棕色量瓶中，用稀釋劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。

2.2.4 供試品溶液 精密量取鹽酸米托蒽醌注射液1 mL，置10 mL棕色量瓶中，用稀釋劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，用0.22μm濾膜過濾，續濾液作為供試品溶液。

2.3 方法學驗證

2.3.1 系統適用性試驗 取“2.2”項下對照品儲備液，稀釋成質量濃度為10μg/mL的標準溶液作為系統適用性溶液。取上述溶液25μL注入離子色譜儀，記錄色譜圖見圖1。可見，在該色譜條件下，焦亞硫酸鈉色譜峰與相鄰輔料色譜峰分離度為2.64，理論塔板數為11 605，符合要求。

圖1 系統適用性試驗的色譜圖Figure 1 Chromatogram of system suitability solution

2.3.2 專屬性試驗 空白溶劑溶液：取0.2%甲醛溶液作為溶劑空白溶液。混合輔料空白溶液：按處方比例分別稱取除焦亞硫酸鈉外的各輔料，共置1 L量瓶中，超純水溶解，定容至刻度，搖勻，精密移取1 mL至10 mL棕色量瓶中，加入0.2%甲醛溶液稀釋至刻度，搖勻，用0.22μm濾膜過濾，續濾液作為混合輔料空白溶液。對照品溶液：同“2.2”項下對照品溶液。加標供試品溶液：分別精密量取對照品儲備液1 mL、鹽酸米托蒽醌注射液1 mL，置同一10 mL棕色量瓶中，用稀釋劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，用0.22μm濾膜過濾，續濾液作為加標供試品溶液。

取上述溶液分別進樣分析，記錄色譜圖見圖2。可見，空白溶劑溶液、空白輔料溶液在焦亞硫酸鈉出峰處無干擾，符合要求，專屬性良好。

圖2 專屬性試驗色譜圖Figure 2 Chromatogram of specificity

2.3.3 標準曲線與線性范圍 取“2.2”項下的對照品儲備液，逐級稀釋，制成質量濃度分別為0.101 7、1.017 0、3.051 0、5.085 0、8.136 0、10.170 0、12.204 0、15.255 0、20.340 0μg/mL的溶液作為系列對照品溶液。按“2.1”項色譜條件進樣測定，同時記錄色譜圖。以樣品濃度（X,μg/mL）為橫坐標、峰面積（Y）為縱坐標進行線性回歸，結果顯示焦亞硫酸鈉在0.101 7~20.340 0μg/mL范圍內線性關系良好，標準曲線為Y=0.077 5X-0.046（r=0.998）。

2.3.4 定量限與檢測限 精密量取“2.3.3”項下的系列對照品溶液，逐級定量稀釋，進樣并記錄色譜圖，定量限（LOQ）以信噪比為10∶1的濃度進行計算，檢測限（LOD）以信噪比為3∶1的濃度計算。結果得焦亞硫酸鈉的定量限為0.10μg/mL，檢測限為0.05μg/mL。

2.3.5 重復性試驗 按“2.2”項方法配制供試品溶液6份，精密量取供試品溶液1.00 mL，置10 mL棕色容量瓶中，分別精密加入焦亞硫酸鈉標準溶液（100.1μg/mL）1.00 mL共6份，再按照供試品溶液制備方法制備，即得100%限度加標供試品溶液。供試品溶液和100%限度加標供試品溶液分別按“2.1”項下色譜條件進樣測定，按外標法以峰面積計算焦亞硫酸鈉的含量。結果表明，6份供試品溶液未檢出焦亞硫酸鈉，6份100%限度加標供試品溶液焦亞硫酸鈉的平均質量濃度為9.04μg/mL，RSD為2.1%（n=6），表明方法重復性良好。

2.3.6 穩定性試驗 按“2.2”項下配制對照品儲備液，再稀釋成質量濃度為10μg/mL的對照品溶液，按“2.2.5”項下配制100%限度供試品溶液，于室溫放置0、4、8、12、24、36 h后進樣分析，記錄峰面積，分別計算對照品溶液、100%限度供試品溶液放置不同時間后主峰峰面積與0時峰面積的RSD值，結果見表2。

表2 溶液穩定性試驗結果Table 2 Results of solution stability tests

結果表明，對照品溶液、100%限度供試品溶液在室溫下放置8 h，主峰峰面積與0時峰面積的RSD值＜2%，放置12 h后RSD值＞2%，表明焦亞硫酸鈉對照品溶液及100%限度加標供試品溶液在室溫下存放8 h時穩定性良好。

2.3.7加樣回收率試驗 精密量取鹽酸米托蒽醌注射液1.00 mL，置10 mL棕色量瓶中，共9份，分別精密加入焦亞硫酸鈉對照品溶液（100.1μg/mL）0.80、1.00、1.20 mL各3份，按“2.2.4”項方法制備供試品溶液，即得80%、100%、120%3個濃度的回收率樣品溶液，注入離子色譜儀，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算焦亞硫酸鈉的含量，計算回收率和相對標準偏差，結果見表3。

表3 焦亞硫酸鈉加樣回收率試驗結果Table 3 Results of recovery tests of sodium pyrosulfite(n=9)

可見，9份焦亞硫酸鈉的回收率范圍為90.12%~92.69%，滿足90%~108%要求，RSD為1.1%，小于6.0%，符合要求，表明方法準確度良好。

2.3.8 樣品檢測 取10批自制鹽酸米托蒽醌注射液（011190801、011190802、011190803、011190804、011190805、011190806、011190901、20180101、20180102、20180103）各2份，及1批參比制劑諾肖林（P00033S），按“2.2”項方法配制供試品溶液，按“2.1”項色譜條件進樣測定，其中9批自制樣品及參比制劑中均未檢測出焦亞硫酸鈉，1批自制樣品中焦亞硫酸鈉質量濃度為6.45 ng/mL，RD為0.0%（n=2），表明成品中焦亞硫酸鈉僅殘留微量或無殘留，自制樣品與參比制劑一致。

3 討論

本研究通過KOH淋洗液梯度洗脫的方式建立了測定鹽酸米托蒽醌注射液中痕量抗氧劑焦亞硫酸鈉含量的離子色譜方法，該方法具有較高的專屬性、準確性和重現性。本文方法中焦亞硫酸鈉的檢測限為0.05μg/mL，定量限為0.10μg/mL，分別為按處方組成折算供試品溶液理論含量10μg/mL的0.5%、1%，方法靈敏度滿足測定要求。因供試品中未檢出焦亞硫酸鈉，僅用供試品不能確定考察方法的重復性和穩定性，故方法學考察時平行對比加入處方量焦亞硫酸鈉的100%限度加標供試品溶液的測定結果；另外，采用100%限度供試品溶液考察流速（1.0±0.1）mL/min條件對試驗結果的影響，測得該流速條件下樣品中焦亞硫酸鈉含量的RSD為2.0%，表明流速的微小變動對測定結果影響較小，方法耐用性良好。

鹽酸米托蒽醌較易被氧化，焦亞硫酸鈉作為抗氧劑，在生產過程中保護鹽酸米托蒽醌不被氧化，成品檢測結果顯示焦亞硫酸鈉僅殘留微量或無殘留。經鹽酸米托蒽醌注射液穩定性試驗考察，焦亞硫酸鈉的處方量達到使用目的，且無論是焦亞硫酸鈉殘留量或成品穩定性趨勢均與參比制劑一致。焦亞硫酸鈉溶于水，久置空氣中，則氧化成硫酸鈉，參考文獻[12]采用0.2%甲醛溶液作為溶劑，能起到抗氧化作用，提高供試品溶液穩定性，保證測定準確。

本研究所建方法可準確測定鹽酸米托蒽醌注射液中抗氧劑焦亞硫酸鈉的含量，適用于該品種中焦亞硫酸鈉殘留量的控制。