病毒性心肌炎患兒血清PTX-3及IL-35水平及其與心功能、心肌損傷的相關性分析

孔金鳳

北部戰區總醫院和平院區兒科，遼寧沈陽 110003

病毒性心肌炎(VMC)是由柯薩奇病毒、埃可病毒或流感病毒等通過腸道或呼吸道感染后，引起心肌炎性反應的兒科心血管系統疾病[1]。病毒感染心肌細胞后，導致心肌局限性或彌漫性的急性或慢性炎癥病變，造成心肌直接損傷和繼發免疫反應對心肌組織的持續性損傷，雖然大部分患者可經治療后痊愈，并且無遠期后遺癥，但約有5%的患者發展為擴張型心肌病，引發心力衰竭甚至死亡[2]。準確診斷及對VMC患兒疾病轉歸進行準確判斷對改善患兒預后尤為關鍵。正五聚體蛋白-3(PTX-3)是一種急性時相反應蛋白，已被證實與肺炎、病毒性心肌炎及心功能降低密切相關[3-5]。白細胞介素(IL)-35是由Treg細胞分泌的IL-12p35亞基與EB13亞基通過共價鍵組合形成，已被發現在VMC患者外周血中呈低表達[6]。目前，雖有部分研究表明PTX-3、IL-35與VMC相關，但并未進行深入研究，PTX-3、IL-35的異常表達與VMC患兒其他輔助檢查和實驗室檢查的相關性報道更少。因此，本研究旨在探討IL-35及PTX-3在VMC患兒血清中的表達水平，并且分析其與心功能、心肌損傷程度的相關性，為臨床診療提供參考價值。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取本院和平院區兒科確診的VMC患兒80例作為研究對象，設為VMC組，其中男53例，女27例；年齡5～14歲，平均(10.13±2.50)歲。同時選取本院進行體檢的健康兒童50例作為對照組，其中男32例，女18例；年齡5～14歲，平均(10.04±2.47)歲，兩組性別、年齡比較，差異無統計學意義。VMC參照《兒童心肌炎診斷建議(2018年版)》[7]進行診斷，診斷標準包括：(1)心功能不全或心腔擴大；(2)血清心肌肌鈣蛋白I(cTnI)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平升高；(3)心電圖2個或2個以上主要導聯出現R波改變、房室傳導阻滯、非房室結及房室折返引起的異位性心動過速及QRS低電壓；(4)發病前有呼吸道和消化道感染史；(5)胸悶、胸痛、心悸、乏力等心血管癥狀。納入標準：(1)符合VMC臨床診斷；(2)年齡在5～16歲；(3)均為首次確診。排除標準：(1)合并先天性心臟病者；(2)合并1型糖尿病者；(3)臨床資料及檢驗指標不全者；(4)合并血液系統疾病者。本研究經本院醫學倫理委員會審批，編號LZ20180024。

1.2方法

1.2.1血清PTX-3及IL-35水平檢測 于受試者入院時抽取靜脈血4 mL置入促凝管中，室溫下靜置30 min待自行分離出血清后，一部分送往本院檢驗科進行進一步試驗，另一部分用移液器抽取血清，凍存于-80 ℃冰箱，每半年對所收集標本統一檢測1次。采用酶聯免疫吸附試驗檢測受試者血清中PTX-3及IL-35水平，嚴格參照說明書進行操作，試劑盒購自英國Abcam公司，貨號分別為ab219533、ab222555。

1.2.2心肌酶譜檢測 采血及血清分離法同步驟1.2.1，采用放射免疫法檢測心肌酶譜相關指標水平，包括心肌cTnI、肌酸激酶(CK)、CK-MB、α-羥丁酸脫氫酶(α-HBDH)、天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)及乳酸脫氫酶(LDH)。

1.2.3心功能檢測 應用CX50型飛利浦超聲儀，采用飛利浦S8-3兒童心臟探頭對VMC患兒進行心功能檢測，包括患兒心輸出量(CO)、每搏輸出量(SV)、射血分數(EF)，每個指標最少檢測5個心動周期，取平均值為最終檢測值。

2 結 果

2.1兩組血清PTX-3、IL-35水平比較 與對照組比較，VMC組PTX-3水平升高，IL-35水平降低，差異有統計學意義(t=16.043、-21.748，P<0.05)。見圖1。

注：A為兩組血清PTX-3水平比較；B為兩組血清IL-35水平比較。

2.2VMC組患兒心肌酶譜相關指標水平分析 VMC組患兒心肌酶譜中cTnI、CK、CK-MB、α-HBDH、AST及LDH水平分別為(0.46±0.12)U/L、(258.84±65.09)U/L、(28.53±6.45)U/L、(319.32±46.85)U/L、(54.19±12.37)U/L、(319.32±46.85)U/L。見圖2。

2.3VMC組患兒心功能情況 VMC組患兒CO、SV及EF分別為(4.27±0.46)L/min、(55.14±6.62)V/mL、(45.94±4.34)%。見圖3。

注：A為VMC組中cTnI水平；B為VMC組CK水平；C為VMC組CK-MB水平；D為VMC組中α-HBDH水平；E為VMC組中AST水平；F為VMC組中LDH水平。

注：A為VMC組中CO水平；B為VMC組SV水平；C為VMC組EF水平。

2.4VMC組患兒血清PTX-3、IL-35水平與心肌酶譜的相關性分析 VMC組患兒血清PTX-3水平與心肌酶譜cTnI、CK、CK-MB、α-HBDH、AST、LDH均呈正相關(P<0.05)，而血清IL-35水平與心肌酶譜cTnI、CK、CK-MB、α-HBDH、AST、LDH均呈負相關(P<0.05)。見圖4、5，表1。

表1 VMC組患兒血清PTX-3、IL-35和cTnI、CK、CK-MB、α-HBDH、AST、LDH的相關性分析(r)

注：A為PTX-3水平與cTnI的關系；B為PTX-3水平與CK的關系；C為PTX-3水平與CK-MB的關系；D為PTX-3水平與α-HBDH的關系；E為PTX-3水平與AST的關系；F為PTX-3水平與LDH的關系。

2.5VMC組患兒血清PTX-3、IL-35水平與心功能指標的相關性分析 VMC組患兒血清PTX-3水平與CO、SV、EF均呈負相關(P<0.05)；而血清IL-35水平與CO、SV、EF均呈正相關(P<0.05)。見圖6、表2。

注：A為IL-35水平與cTnI的關系；B為IL-35水平與CK的關系；C為IL-35水平與CK-MB的關系；D為IL-35水平與α-HBDH的關系；E為IL-35水平與AST的關系；F為IL-35水平與LDH的關系。

注：A為PTX-3水平與CO的關系；B為PTX-3水平與SV的關系；C為PTX-3水平與EF的關系；D為IL-35水平與CO的關系；E為IL-35水平與SV的關系；F為IL-35水平與EF的關系。

表2 VMC組血清PTX-3、IL-35水平與CO、SV、EF 的相關性分析

3 討 論

VMC患兒病毒感染后，可導致心肌細胞彌漫性損傷，臨床多表現為胸悶、乏力、心律失常等癥狀，心肌細胞損傷程度的不同，臨床癥狀的嚴重程度亦不相同。VMC在臨床中往往不能及時被診斷，一方面由于該病是由呼吸道感染及腸道感染繼發而來，易被其他疾病癥狀掩蓋，另一方面目前臨床應用中沒有特異性極強的血清標志物，而心內膜心肌活檢具有侵入性，難以被患兒家屬接受[8]。既往評價VMC患兒心功能多采用超聲檢測，評估心肌損傷嚴重程度多參考心肌酶譜，需較長的診療時間。本研究通過對血清中炎癥相關因子PTX-3及IL-35水平進行檢測，分析其與VMC患兒心肌損傷及心功能的相關性，既能對VMC患兒心功能進行評估，又能對心肌損傷程度進行評估，對VMC診療具有積極意義。

PTX-3大多由白細胞分泌，與C-反應蛋白同為急性期炎癥蛋白超家族成員之一，是最新型的炎性反應因子，已有大量研究證實其高表達對心肌損傷及心肌細胞凋亡具有高特異性，有望成為新的心肌損傷標志物[9-10]。IL-35已被證實其可通過抑制IL-17的分泌而發揮抗炎作用[11-12]。劉艷賓等[13]研究證實，IL-35在VMC患者血清中呈低表達，并且隨著疾病的改善其水平升高，可能參與了VMC疾病的進展過程。心肌酶譜是臨床應用中常用于評價心肌細胞損傷情況的血清學指標，對心肌炎、心肌梗死、心力衰竭及其他原因引起的心肌損傷均有較高的診斷價值[14-16]。超聲檢測心功能更是整體評價VMC患兒病情嚴重程度的常用檢測手段，可對患兒就診時心功能或心力衰竭程度做出客觀評估[17]。

本研究通過對80例VMC患兒血清中PTX-3及IL-35水平進行檢測，結果表明PTX-3在VMC患兒血清中呈高表達，IL-35呈低表達，說明VMC患兒抗炎因子表達降低，促炎因子表達升高。本研究在對VMC患兒心肌酶譜及心功能進行檢測后發現，患兒cTnI、CK、CK-MB、α-HBDH、AST、LDH水平均較高，而CO、SV、EF均低于正常水平，說明VMC患兒心肌受到損傷時，同時影響患兒心功能，符合VMC患兒臨床表現和血清學檢查。本研究Pearson相關分析結果表明，VMC患兒血清中PTX-3水平與cTnI、CK、CK-MB、α-HBDH、AST、LDH均呈正相關，與CO、SV、EF均呈負相關，說明外周血中PTX-3水平越高，患兒心肌損傷程度越重。并且PTX-3水平與心肌酶譜及心功能指標的相關系數r值均在0.60～0.91，說明PTX-3與上述指標呈中、高度相關，具有較好的參考價值。IL-35水平與心肌酶譜指標呈負相關，與心功能上述指標呈正相關，而IL-35本身為抗炎因子，分析其原因認為，IL-35的低表達本身可能是加重VMC患兒心肌損傷的因素之一，另外也可能是由于病毒對心肌細胞的損傷，強烈的炎性反應促使抗炎因子IL-35水平表達降低。在本研究中，IL-35水平與心肌酶譜及心功能相關的參考值r值均在0.367～0.619，其對疾病的參考價值低于PTX-3，這可能是由于VMC發病機制復雜，當處于急性期時，促炎因子大量釋放[18-19]，而患兒自身免疫功能較低[20]，干擾因素較多，降低了IL-35對VCM心肌損傷程度及心功能相關性的參考價值。

綜上所述，VMC患兒血清中PTX-3水平升高，IL-35水平降低，且均與心肌損傷程度及心功能指標具有一定相關性，PTX-3、IL-37水平檢測對診斷VMC具有一定的臨床參考價值。