武漢地區女性人乳頭瘤病毒感染及基因分型分析*

黃景濤，白 莉，李 艷

武漢大學人民醫院檢驗科，湖北武漢，430060

人乳頭瘤病毒(HPV)感染是一種常見的生殖道病毒感染，可促進多種腫瘤的發生發展。目前鑒定出超過200種HPV亞型，近一半的亞型可以感染生殖道[1]。根據誘發腫瘤能力的不同，將HPV分為低危型(HPV6、HPV11型等)和高危型(HPV16、HPV18型等)，持續性的高危型HPV感染是宮頸上皮內瘤變、宮頸癌的重要危險因素；而低危型HPV與生殖道外生性濕疣類、扁平濕疣類病變相關。不同的HPV亞型具有不同的致病能力，而HPV亞型的復合感染是導致宮頸病變加重的重要原因[2-3]。因此，HPV不同亞型感染情況對宮頸癌的早期診斷和預防具有重要意義。本研究對湖北省武漢市的7 152例女性的宮頸脫落細胞進行了21種HPV亞型檢測，并對檢測結果進行分析，旨在為武漢地區女性宮頸癌的流行病學特征研究及防治提供參考。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集2018年5月至2020年12月于武漢大學人民醫院東院就診的7 152例女性患者的宮頸脫落細胞標本，對其進行HPV基因分型檢測。納入研究的患者年齡14～89歲，平均(37.50±11.3)歲。根據年齡分布，將患者分為5組，分別為14～<20歲組94例，20～<30歲組1 853例，30～<40歲組2 531例，40～<50歲組1 455例及50～89歲組1 219例。本研究經本院醫學倫理委員會批準，所有研究對象均簽署知情同意書。

1.2儀器與試劑 HPV分型檢測試劑盒及配套的核酸提取試劑盒(江蘇碩世生物科技公司)，可檢測HPV高危型17種：HPV 16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、26、82型，HPV低危型4種：HPV 6、11、73和81型。全自動核酸提取儀(江蘇碩世生物科技公司)；LightCycler480Ⅱ實時熒光定量PCR儀(瑞士羅氏公司)。

1.3方法

1.3.1標本采集 采樣前，用棉拭子輕輕擦拭宮頸口過多的分泌物，將宮頸采樣刷伸入宮頸口鱗柱上皮交界處，順時針旋轉3～5圈采集宮頸脫落細胞，將其放入取樣管內，密閉送檢。4 ℃保存，3 d內完成檢測。

1.3.2DNA提取和PCR擴增 按照核酸提取試劑盒說明書提取DNA。按照說明書配制好PCR反應混合液(包含dNTP、Taq酶、引物、熒光探針、UNG酶等)18 μL加入到反應管中，分別加入2 μL的已提取的DNA標本，作為陰性對照和陽性對照。擴增條件為：50 ℃ 5 min，UNG酶處理； 95 ℃10 min，預變性；95 ℃ 10 s，58 ℃ 40 s，循環45次；58 ℃檢測熒光強度。

1.3.3結果判讀 根據廠家說明書判讀結果，陰性對照無典型S型擴增曲線；陽性對照呈典型S型曲線且循環閾值(Ct值)≤30.0；內參基因擴增曲線呈典型S型曲線且Ct值≤36.7。此時根據說明書中HPV亞型定性參考值表判讀結果，若擴增曲線呈典型的S型曲線且Ct值<參考值，則判斷為陽性；若無典型的S型曲線或Ct值≥參考值，則判斷為陰性。

1.4統計學處理 采用SPSS21.0軟件對數據進行處理和分析，計數資料以例數和百分率表示，組間比較采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1HPV感染的總體情況 7 152例患者中共檢出HPV感染者1 332例，陽性率為18.62%。HPV陽性患者中，僅感染低危型HPV(HPV6、HPV11、HPV73和HPV81型)的患者129例，占9.68%；感染高危型HPV的患者1 049例，占78.75%；同時感染高危型HPV和低危型HPV的患者154例，占11.56%。另外，HPV陽性患者中，主要是單一感染(919例)，占68.99%，二重感染279例，占20.95%；三重及三重以上的感染134例，占10.06%，見表1。

表1 武漢地區女性HPV感染的總體情況

2.2不同年齡段HPV感染情況分析 7 152例女性患者中，30～<40歲組HPV陽性例數最多，14～<20歲組的HPV總體陽性率和高危型陽性率最高，不同年齡組間陽性率比較，差異有統計學意義(χ2=69.76，P<0.05)，見表2。HPV總體陽性率和高危型陽性率隨年齡增加的變化趨勢相同，都呈U型的變化曲線；14～<20歲組HPV陽性率最高，隨著年齡增加，HPV陽性率逐漸降低，30～<40歲組陽性率最低，進入圍絕經期和絕經后期后HPV陽性率開始升高，見圖1。

表2 不同年齡段HPV感染情況分析[ n(%)]

圖1 各年齡段 HPV 總體陽性率和高危型陽性率趨勢圖

2.3不同HPV亞型檢出情況分析 HPV總體陽性率排名前五的亞型分別是HPV52、HPV16、HPV58、HPV53、HPV81型。不同年齡組的HPV亞型分布有細微差別，如14～<20歲組最常見的HPV感染是HPV16、HPV6和HPV11型，而其余年齡組最常見的HPV感染均為HPV52、HPV16、HPV58型，見表3。

表3 不同年齡段HPV各亞型陽性率分布[ n(%)]

3 討 論

宮頸癌是威脅女性健康最常見的腫瘤之一，每年約有50萬以上婦女罹患宮頸癌，30萬以上婦女因宮頸癌死亡，嚴重影響全球女性生命健康[1,4]。HPV是一種無包膜的雙鏈環狀DNA病毒，直徑在45～55 nm。HPV特別是高危型HPV持續感染是誘發宮頸癌的高危因素。在長期感染過程中，HPV整合至宿主DNA后，導致原癌基因E6、E7的高表達，抑癌基因p53和Rb失活，引發組織病變，從而致使宮頸癌的發生[5]。因此，針對HPV的早期篩查和治療能夠有效地降低宮頸癌的發生率。有研究推薦將HPV篩查作為首選的宮頸癌篩查手段，初始篩查年齡為25歲，建議定期篩查HPV以降低罹患宮頸癌的風險[6]。

宮頸癌的發生率呈現地區差異性，在低收入國家和地區的宮頸癌的發生率和死亡率是高收入國家的2～3倍[7]。HPV陽性率也呈現相同的趨勢，低收入國家和地區的HPV陽性率遠高于高收入國家，非洲地區具有較高的HPV陽性率和宮頸癌的發生率和死亡率[8]。由于我國地域和民族差異性及經濟發展差異性，HPV陽性率和分布存在差異，有研究表明我國的HPV陽性率從10.00%到30.00%不等，如上海浦東地區的HPV陽性率為23.43%[9]，北京海淀區的HPV陽性率為22.60%[10]，廈門地區的HPV陽性率為16.47%[11]。江西地區的HPV陽性率為23.68%[12]等。本研究發現武漢地區HPV的陽性率為18.62%，略低于北京、上海和江西地區的HPV陽性率，高于廈門地區的陽性率。AGODI等[13]研究發現，女性在25歲前會出現第1個HPV感染高峰，隨后下降；在圍絕經期或絕經期出現第2個感染高峰。在本研究中，HPV的第1個感染高峰出現在14～<20歲組，隨后陽性率下降，在50～89歲組出現第2個感染高峰。年輕女性HPV陽性率最高，原因可能與性生活頻繁有關，但是HPV感染多為一過性感染，會被機體自身免疫力清除，致使HPV陽性率隨著年齡增長逐漸降低；50～89歲組存在第2個HPV感染高峰可能是由于激素水平改變和免疫力下降。

在不同地區和不同人種間，HPV亞型感染分布存在差異，歐洲和北美地區最常見的HPV感染是HPV16、HPV18、HPV31和HPV53型，亞洲地區最常見的HPV感染主要是HPV16、HPV52和HPV58型[8]。對于國內HPV亞型陽性率，不同的研究間亦存在差異。蘇州地區最常見的是HPV52、HPV81、HPV16型[14]，廈門地區最常見的是HPV52、HPV16、HPV58、HPV53和HPV39型[11]，北京地區最常見的是HPV52、HPV16、HPV58、HPV53和HPV56型[10]。本研究中，筆者發現武漢地區最常見的HPV亞型分別是HPV52、HPV16、HPV58型，與國內報道的HPV常見亞型相符，但在不同組中有些許差異，14～<20歲組由于性生活活躍，HPV6、HPV11型等HPV亞型陽性率較其他年齡組高。

宮頸癌的三級預防可以有效地降低宮頸癌的發生率，其中一級預防為HPV疫苗接種，是最有效的保護手段。最新的一項167萬參與的群體水平研究發現，10～30歲女性接種四價HPV疫苗，能夠使女性浸潤性宮頸癌的發病率下降63%，證實HPV疫苗接種可以降低宮頸癌的發生率[15]。目前我國已有二價(HPV16、HPV18型)、四價(HPV6、HPV11、HPV16、HPV18型)和九價(HPV6、HPV11、HPV16、HPV18、HPV31、HPV33、HPV45、HPV52、HPV58型)疫苗上市，針對不同年齡段女性，早期接種疫苗可以有效降低宮頸癌的發病率。

綜上所述，本研究發現武漢地區HPV陽性率不低，主要以單一感染為主，不同年齡組HPV陽性率存在差異，14～<20歲組和50～89歲組陽性率較高；總體陽性率較高的5種亞型從高到低依次為HPV 52、HPV16、HPV58、HPV53和HPV81 型。提高女性HPV篩查意識，定期進行HPV檢測，大力引入和推廣HPV疫苗，可以有效地降低HPV陽性率，預防宮頸癌的發生。