化學發光法與乙肝病毒DNA 熒光定量在乙肝檢測中的應用價值

袁桂英 羅潤弟

（東莞市人民醫院檢驗科，廣東 東莞 523059）

乙型肝炎是全球第十大死亡原因，和肺結核、艾滋病一樣發病率較高，是世界上最常見的傳染病[1]。臨床研究結果顯示，全世界大約有3.5～4 億人感染了乙型肝炎病毒，是艾滋病毒感染者人數的8 倍多。目前，臨床檢測HBV 的方法主要有化學發光酶免疫分析法（CLEIA）、熒光定量聚合酶鏈反應（FQ-PCR）、酶聯免疫吸附法（ELISA）。ELISA 技術較為成熟，具有成本低、操作簡單等優勢，使用頻繁[2]。乙型肝炎病毒血清學標志物有5 種，包括：乙型肝炎e 抗原（HBeAg）、乙型肝炎表面抗原（HBsAg）、乙型肝炎核心抗體（HBcAb）、乙型肝炎e 抗體（HBeAb）、乙型肝炎表面抗體（HBsAb）。FQ-PCR 由于具有較高的特異性、靈敏度、準確性[3]；CLEIA 具有線性范圍寬、有效期長、靈敏度高、自動化程度高以及特異性強等優點，在HBV 感染檢測中效果顯著[4]。為進一步研究上述措施的可行性，本文以322 例乙肝樣本為例，分析上述方法在HBV 感染檢測中的相關性，為疾病檢測工作提供參考，實現疾病的有效抑制。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2021 年10 月至2021 年11 月我院乙肝樣本322 例數據信息，其中：男238 例，女84例；年齡21 歲～87 歲，平均（30.49±0.15）歲。

1.2 方法 使用高通量實時熒光定量PCR 儀檢測血清HBV-DNA 水平（型號：LightingCycler480；羅氏公司），試劑盒購自中山大學達安基因股份有限公司；使用全自動免疫分析儀（雅培公司，型號：i2000SR）及其原裝配套試劑檢測血清乙肝五項。每日執行室內質量控制，相關操作需嚴格按照說明書內容嚴格實施，每個監測批次都包含HBV 陽性定量參考品、陰性質控品的重復檢測。

1.3 觀察指標 分析HBV－DNA 陽性與乙肝五項陽性情況；HBeAg 陽性、HBeAg 陽性HBV－DNA 分布（低載量：1.00E＋0.2-1.00E＋04；中載量：1.00E＋0.4-1.00E＋07；高載量：1.00E＋07-＞1.1E＋08）情況。

1.4 統計學方法 使用SPSS26.0 軟件處理，分析統計學處理結果，若結果顯示P＜0.05，表示對比有意義，反之（P＞0.05）為無意義。計數資料檢驗方式為χ2，表示形式為（n%）；計量資料檢驗方式、表示形式分別為t、（。

2 結果

2.1 HBV－DNA 陽性與乙肝五項陽性：322 例樣本中，大三陽標本109 例，小三陽標本163 例，上述所占比例最多，分別為33.8%、50.6%。見表1

表1 HBV－DNA 陽性與乙肝五項陽性

2.2 HBeAg 陽性、HBeAg 陽性HBV－DNA 分布情況：HBeAb 陽性、HBeAg 陽性HBV－DNA 載量分布對比顯示，前者高于后者，差異分析結果有意義（P＜0.05）。見表2

表2 HBeAg 陽性、HBeAg 陽性HBV－DNA 分布情況

3 討論

乙型肝炎也稱為慢性乙型肝炎，是指乙肝病毒檢測為陽性，疾病的持續時間超過半年，或發病日期還不清楚。常見病因為感染乙型肝炎病毒（HBV）、家族性傳播、嬰幼兒期感染病毒、缺乏預防意識、漏診、免疫功能低下、既往有其他肝病史感染病毒者。乙型肝炎患者主要表現為腹脹、肝痛、疲乏、怕食、惡心、身體乏力、失眠、多夢、黃疸、肝區疼痛、肝脾大、肝外表現、肝纖維化等癥狀[5-6]。有的患者會出現肝臟腫大，中等硬度，伴有輕度壓痛。病情嚴重的患者會有蜘蛛痣、慢性肝病、肝掌、脾腫大或肝功能異常，分為輕、中、重度。慢性乙型肝炎攜帶者為乙型肝炎病毒陽性，但無慢性肝炎癥狀。每年隨訪3 次以上患者血清ALT、AST 無異常，肝組織正常者正常。

目前，乙型肝炎的檢測方法主要有ELISA、FQPCR、CLEIA 等，5 種乙型肝炎定量檢測方法主要包括HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb 和HBcAb[7-8]。臨床研究結果顯示，CLEIA 具有線性范圍寬、靈敏度高、自動化程度高、特異性好、標記物效度長等特點；FQPCR 檢測具有準確性、敏感性、特異性。上述檢測措施已廣泛應用于臨床乙肝檢測。熒光定量PCR 不僅是分子生物學的一種實驗方法，也是實驗室中常用的方法[9]。PCR 是對事物進行擴增，主要檢測RNA、DNA、RNA。熒光定量PCR 很容易監測和定量，可以顯示體內HPV 感染的數量。放大后，觀察是陽性還是陰性，再看內容和拷貝數。病毒篩選就是篩選病毒的DNA。用聚合酶鏈反應（PCR）可以擴增DNA。根據底物的基本量，在擴增過程中可同時計算出含量，對病毒感染率高低進行定量觀察。化學發光法非常實用和方便，是一種靈敏的檢測病毒抗原和抗體的方法。由于其靈敏度高、檢測時間短、分析方法簡單快速、診斷范圍廣等優勢，在臨床上的應用較為廣泛[10]。它可以取代放射免疫分析和酶聯免疫吸附試驗來檢測體內的抗體和抗原。其原理是在一定條件下，樣品中抗體和抗原的濃度與化學式的發光強度呈線性定量關系。該儀器通過檢測系統的發光強度，直接測定抗原和抗體的含量。乙型肝炎化學發光法就是利用這一原理檢測乙型肝炎五項，是一種定量檢測方法。臨床研究結果顯示：建立一種線性范圍廣、靈敏度高、重現性好的HBV PCR 檢測方法，可用于臨床血清標本中HBVDNA 的定量檢測。為進一步研究該方法提高HBV 各基因型的敏感性，穩定低濃度樣品的準確性提供了可靠的依據。

乙型肝炎病毒檢測HBsAg 是檢測HBV 感染的重要指標。可反映患者早期HBV 感染情況，其含量與HBV 的傳染性、復制水平無明顯相關性。但能反映HBV 感染狀態。相關研究顯示，如果濃度高，意味著急性感染，在疾病的恢復期e 抗原濃度降低。血清乙肝病毒復制具有高度傳染性，如果HBeAb 出現，表明乙肝病毒復制減少了，其傳染性較弱，HBV 感染及其消退均是一個動態過程。在疾病的各個階段，采用FQ-PCR 檢測HBV DNA、CLEIA 檢測乙肝五項肝炎，在判斷乙型肝炎病毒感染方面具有良好的相關性。這可能是因為不同患者的免疫系統對HBV 的反應存在不同的差異，但五項乙肝定量檢測結果與患者HBV DNA 載量無明顯相關性。

HBsAg 能反映HBV 早期感染，是HBV 感染血清學檢測的重要指標之一，但其內容與HBV 復制水平和傳染性無關。研究結果顯示，322 例樣本中，大三陽標本109 例，小三陽標本163 例，上述所占比例最多，分別為33.9%、50.6%。DNA 載量較低，可能是HBV 早期感染。一般認為，感染HBsAg 的機體會產生核心抗體。其原因分析結果顯示：HBV 基因變異的抗體、宿主存在免疫缺陷，不能產生對HBcAg 產生抗體、HBcAb 的假陰性檢測。有資料顯示，基因變異也是部分HBsAg 假陰性的原因。研究還發現，HBeAb 陽性低于HBeAg 陽性HBV－DNA 載量分布，分析結果有意義（P＜0.05）。HBcAb 濃度高提示乙肝急性感染，HBcAb 濃度降低，HBV DNA 負載級別相對較低，可能是乙肝疫苗注射后的正常反應。

HBV 感染和預后是一個動態過程。在判斷乙肝病毒感染持續時間方面，FQ-PCR 檢測到的HBV DNA 載量水平與CLEIA 檢測到的乙肝五項均有良好的相關性。這可能與機體免疫系統及對HBV 的反應程度不同有關。乙肝五項定量結果均未發現與HBV DNA 載量直接相關。CLEIA 檢測乙型肝炎的五種敏感性遠高于傳統ELISA 方法，可有效降低乙型肝炎；FQ-PCR 技術已被應用于乙型肝炎的早期診斷和療效判斷，但不排除藥物對HBV-DNA 檢測和病毒復制的干擾。HBV 的DNA 載量和乙肝五項更全面地反映HBV 的病程和預后，結合FQ-PCR 和CLEIA 對HBV 進行動態監測具有積極意義。

綜上，CIEIA 檢測在乙型肝炎患者乙肝五項病毒感染水平、熒光定量PCR 檢測HBV DNA 之間具有良好的相關性，兩種方法的聯合應用能更好地反映患者的病情及預后，對針對性治療措施的完善具有積極意義。