腹型過敏性紫癜發生消化道出血患兒HP感染及免疫反應分析

張 強， 田文朋

(1.山東省立第三醫院消化內科，山東省濟南市250031；2.青島市市立醫院兒科，山東省青島市266000)

過敏性紫癜(henoch-schonlein purpura，HSP)是一類兒童常見的彌漫性血管炎性變態反應性疾病，患兒的主要表現為皮膚紫癜、腹痛、關節痛和腎臟損害等[1]。隨著過敏性紫癜疾病發展可造成消化道出血，且病情容易反復發作，甚至出現胃腸穿孔、壞死，導致出血性休克，給患兒及家屬帶來重大痛苦和負擔。研究顯示，幽門螺桿菌(Helicobacter pylori，HP)感染率在兒童中較高，而腹型過敏性紫癜(AHSP)所導致的腸胃損傷與幽門螺桿菌感染癥狀相似[2]。腸道黏膜病變使腸道內菌群生長的環境被破壞，導致菌群失調，腸道免疫發生紊亂。目前，關于AHSP的發病機制尚不明確，多數研究認為AHSP與免疫異常有關[3-4]。因此，本文對AHSP發生消化道出血患兒幽門螺桿菌感染情況及免疫功能進行研究，以期為AHSP并發消化道出血的預防、治療和改善預后提供參考。

1 資料和方法

1.1 一般資料

選取本院2017年3月—2020年3月收治的AHSP患兒80例，按是否消化道出血分為出血組(n=33)和非出血組(n=47)；出血組男18例，女15例，年齡2～14歲，平均(8.0±1.7)歲；非出血組男26例，女21例，年齡2～13歲，平均(8.1±1.5)歲；另選擇同期40例健康小兒作為健康組，男22例，女18例。3組小兒性別、年齡比較差異無顯著性(P>0.05)，具有可比性。本研究經醫學倫理委員會批準通過，患兒家屬知情同意。

納入標準：①符合AHSP的診斷標準[5]；②患兒年齡2～14歲；③均為初診病例。排除標準：①合并其他系統基礎疾病；②存在AHSP腎病綜合征；③近期服用抗生素、微生態制劑；④依從性差，無法配合完成研究。

1.2 HP檢測及分型

所有小兒均行血清抗HP抗體檢測，HP抗體分型試劑盒購自深圳伯勞特生物制品有限公司。均取10 μL血清，加入抗體室溫孵育30 min，充分洗滌后加入底物靜置5 min顯色。抗體分型檢測結果判斷：HP細胞毒素CagA(116 kDa區帶)、空泡毒素VacA(91 kDa與95 kDa區帶)、尿素酶UreA(30 kDa區帶)和尿素酶UreB(66 kDa區帶)，有CagA區帶或VacA區帶的定義為Ⅰ型，無CagA區帶或VacA區帶的定義為Ⅱ型，Ⅰ型、Ⅱ型符合其一即為陽性；無CagA區帶、VacA區帶及UreA、UreB區帶的定義為陰性[6]。

1.3 腸道菌群檢測

入院后留取糞便樣本，用無菌棉簽剝開糞便表層，避免有雜物、尿液混入，棉簽挑取約1 g糞便置入無菌凍存管中-70 ℃保存待測。

取70 mg冷凍樣本糞便采用QIAamp DNA Stool試劑盒(QIAGEN公司)提取樣本總DNA，并行16S rDNA高通量測序，由北京安諾優達基因科技有限公司完成。檢測結果以2 μL DNA中細菌量×357.14作為每克糞便樣本中細菌含量[5]。

1.4 炎癥細胞因子水平測定

入院后抽取3 mL空腹靜脈血，3 000 r/min離心10 min分離血清。采用酶聯免疫吸附法檢測血清白細胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、IL-8、IL-17、IL-23、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平，試劑盒購自上海生工生物工程有限公司。

1.5 免疫功能測定

入院后抽取3 mL空腹靜脈血，3 000 r/min離心10 min分離血清，采用ARRAY 360蛋白分析儀(美國貝克曼公司)及散色比濁法測定IgA、IgG、IgM水平。取小兒1 mL全血采用FCM流式細胞儀(美國貝克曼公司)測定T淋巴細胞各亞群CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平。

1.6 統計學分析

2 結 果

2.1 各組HP感染情況及分型的比較

AHSP患兒HP陽性率高于健康組，出血組HP陽性率高于非出血組，且AHSP患兒Ⅰ型HP檢出率高于Ⅱ型HP(P<0.05；表1)。

表1 各組HP感染情況及分型的比較 單位：例(%)

2.2 各組腸道菌群的比較

出血組和非出血組乳酸桿菌、雙歧桿菌水平低于健康組，大腸桿菌水平高于健康組(P<0.05)，出血組較非出血組更為顯著(P<0.05；表2)。

表2 各組腸道菌群定量檢測結果的比較

2.3 各組血清炎癥細胞因子水平的比較

出血組和非出血組血清炎癥細胞因子水平均高于健康組(P<0.05)，且出血組較非出血組更高(P<0.05；表3)。

表3 各組血清炎癥細胞因子水平的比較 單位：ng/L

2.4 各組免疫功能的比較

出血組IgA、IgG、IgM水平低于非出血組和健康組(P<0.05)，非出血組IgA水平低于健康組(P<0.05)，而IgG和IgM與健康組比較差異無顯著性(P>0.05)。出血組和非出血組T淋巴細胞亞群CD3+、CD4+、CD4+/CD8+低于健康組，而CD8+高于健康組(P<0.05)；出血組較非出血組更為顯著(P<0.05；表4)。

表4 各組免疫功能的比較

3 討 論

過敏性紫癜是一種多系統參與的血管炎性疾病，對于皮膚、腎臟、關節和胃腸道都有影響，但具有一定的自限性。研究顯示，HSP在3～10歲兒童中最為常見，以AHSP為主，主要表現為臀部區域和下肢皮疹[7]。AHSP胃腸道反應主要表現為腹痛和消化道出血，若腹痛出現在皮膚紫癜之后容易診斷，但反之容易發生誤診。病理學研究顯示，AHSP主要為全身性小血管急性炎癥反應，可累及微小動脈和靜脈，導致炎癥出血或滲出，從而導致胃腸道黏膜潰瘍出血的發生[8]。AHSP的發病影響因素眾多，如藥物、感染、惡性腫瘤等均與HSP發生發展有關[9]。

研究表明，感染是AHSP發病的主要誘因[10]。另有多項研究證實，HP感染可以引發消化道黏膜損傷及變態反應[11-12]。本研究結果顯示，AHSP消化道出血患兒HP陽性率高于AHSP未發生消化道出血患兒及正常兒童，且Ⅰ型HP檢出率高于Ⅱ型HP，提示AHSP消化道出血可能與Ⅰ型HP感染存在密切關系。HP感染導致AHSP的發生可能與HP引發的炎癥和免疫反應有關。HP感染導致血液自由基水平升高，加重血管內皮損傷，導致血管內皮持續性炎癥經久不愈、反復發作。兒童體質較弱，免疫力較低，腸道微生態平衡容易遭到破壞而出現嚴重的腸道微生態紊亂。本研究中，AHSP消化道出血患兒乳酸桿菌、雙歧桿菌數量明顯降低，大腸桿菌數量明顯升高，提示AHSP消化道出血患兒存在腸道菌群生態紊亂，這可能與HP感染及AHSP消化道出血導致的腸胃黏膜屏障損傷有關。本研究中，AHSP患兒血清IL-6、IL-8、IL-17、IL-23、TNF-α比健康組明顯升高。HP感染會增加毒素因子分泌，促使炎癥介質不斷釋放，加重損傷胃腸黏膜屏障，導致持續性炎癥反應。

AHSP感染多發生于病毒細菌感染后，其本質為一種免疫性疾病，體液免疫和細胞免疫在機體免疫中發揮重要調節作用。研究顯示，AHSP為IgA抗體所介導，表現為IgA水平增高[13]，本研究結果與之相似。本研究中，IgG、IgM水平在AHSP無消化道出血患兒和健康兒童中無明顯差異，但在AHSP消化道出血患兒中明顯升高。本研究出血組和非出血組T淋巴細胞亞群CD3+、CD4+、CD4+/CD8+低于健康組,CD8+高于健康組，出血組較非出血組更為顯著。T細胞在B細胞生長、分化和分泌免疫球蛋白過程中具有重要作用，活化的CD4細胞過度表達CD40L可與B細胞、內皮細胞上的CD40結合，刺激B細胞活化增殖和抗體形成，參與體液免疫過程[14]。研究認為，HSP患兒T淋巴細胞，CD3+、CD4+、CD4+/CD8+降低與自身淋巴細胞反應有關[15]，但其具體機制尚未明了。因此，AHSP患兒監測免疫功能變化有助于病情的判斷和治療。

綜上所述，AHSP消化道出血的發病與HP感染、免疫功能紊亂促使腸道菌群失調、炎癥發展有關，進行HP及免疫指標檢測有助于AHSP伴消化道出血的預防和治療。