60例血小板抗體初篩強陽性患兒的抗體效價分析

邱立娟 付曉艷 郭凱 王孟鍵 劉禹 馬曙軒

國內外研究證實，血小板同種抗體的產生與輸血、妊娠、器官移植及免疫系統(tǒng)疾病等有關，并且血小板抗體陽性率隨輸血和妊娠次數增多而升高[1-3]。血小板抗體的產生是血小板輸注無效的主要原因之一[4-5]，進行血小板抗體篩查與配型試驗在提高血小板輸注效果方面具有重要意義，尤其是對于反復輸血和免疫性血小板減少的患兒。關于血小板抗體篩查和配型的研究較多，但對血小板抗體產生后效價的高低國內外文獻少有報道，我們對在院60名血小板抗體強陽性（4+）患兒血小板抗體效價進行檢測分析，現將結果報道如下。

資料與方法

1 臨床資料

1.1 研究對象：我院2019年1月～2021年3月采用固相凝集法檢測血小板抗體21 230例，對血小板抗體初篩強陽性（4+）60例患兒進行抗體效價測定，其中男性36例，女性24例，年齡1月～180月，中位年齡24（12， 93）月。

1.2 分組方法

1.2.1 年齡分組：將患兒按照月齡分為1～6月、7～12月、13～18月、19～24月、25～36月、37～120月、＞120月；

1.2.2 疾病分組：按照疾病分為血液腫瘤組、免疫疾病組、其他疾病組；

1.2.3 輸血史分組：按照有無輸血史分為有輸血史組和無輸血史組。

2 儀器與試劑

2.1 儀器：板式離心機（可成儀器有限公司）和PW-812全自動酶標洗板機（匯松儀器有限公司）。

2.2 試劑：血小板抗體檢測試劑盒（固相凝集法）（Sanquin，荷蘭）、血小板抗體篩檢細胞、血小板抗體檢測用指示紅細胞均購自北京漢泰旭和生物科技有限公司。所有試劑均在效期內使用。

3 檢測方法

3.1 標本前處理：采用患兒輸血前檢測標本進行血小板抗體篩查初檢。將枸櫞酸鈉抗凝標本，1 500 g離心10 min。對初檢結果強陽性者（4+），將患兒血清采用試管法倍比稀釋，采用固相凝集法血小板抗體檢測試劑，人工判讀結果。

3.2 操作方法：（1）使用前將所有試劑恢復至室溫（18 ℃～25 ℃），將濃縮清洗液用純化水按1∶10體積比稀釋制備清洗液；（2）依據檢測量按需取出微孔板條，每孔（患者血清孔、陽性對照、陰性對照）加入1滴（50 μL）血小板抗體篩檢細胞；（3）50 rcf離心5 min，使血小板固定到微孔板表面；（4）用清洗液洗板2次，去除未結合的血小板；（5）每孔加入2滴（100 μL）MASPATLISS，并在反應孔中依次加入1滴（50 μL）倍比稀釋的患者血清、陽性質控、陰性質控，輕輕震蕩微孔板，使其充分混勻；（6）將微孔板在37 ℃孵育35 min（孵育過程密封微孔板）后用清洗液洗板3次；（7）每孔加1滴MASPAT抗IgG試劑及1滴MASPAT指示紅細胞，輕輕震蕩混勻，200 rcf離心5 min。

3.3 判讀結果：以可檢測到陽性（1+）的最高稀釋倍數的倒數為效價（下圖所示效價為64），判定方法見圖1。

圖1 血小板抗體效價測定結果

3.4 觀察指標：（1）統(tǒng)計血小板抗體強陽性（4 +）患兒血小板抗體效價分布情況。（2）患兒年齡、性別、輸血史、疾病與效價的關系。

4 統(tǒng)計學處理 采用IBM SPSS Statistics 25.0版本軟件對4組資料進行統(tǒng)計分析，計數資料以例數表示，性別和輸血史與效價的關系比較采用兩個獨立標本比較的MannWhitneyU檢驗，年齡和疾病與效價的關系比較采用多個獨立樣本比較的Kruskal-WallisH檢驗，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

結 果

1 60例患兒血小板抗體效價分布情況 共篩查21 230例患兒血小板抗體，檢出強陽性60例（0.28%）。如圖2所示，60例血小板抗體強陽性患兒血小板抗體效價結果集中在8～16。其中效價為2、4、8、16、32、64的患兒分別為5例（8.33%）、8例（13.33%）、15例（25.00%）、21例（35.00%）、9例（15.00%）、2例（3.33%）。

圖2 60例患兒血小板抗體效價分布情況

2 不同影響因素效價分布對比 如表1所示，通過對60例患兒不同性別、年齡、有無輸血史及不同疾病對患兒血小板抗體效價分布情況進行統(tǒng)計學分析，結果顯示P值均＞0.05，這表明血小板抗體效價在不同性別、年齡、有無輸血史及不同疾病上差異沒有統(tǒng)計學意義。

表1 不同影響因素對患兒血小板抗體效價分布比較

3 5例抗體陽性患兒血小板輸注效果 檢測后進行血小板輸注的僅有5例，其效價結果、配型情況及輸注效果詳見表2，5例患兒中僅進行配型的1例（病例4）輸注有效；其余4例輸注前未進行配型，輸注無效。

表2 5例抗體陽性患兒血小板輸注效果

討 論

血小板表面抗原種類較多且比較復雜，不僅包括紅細胞、白細胞相關抗原，還有血小板特異抗原。反復輸血及多次妊娠者容易產生血小板抗體，引起免疫性血小板輸注無效[6]。血小板輸注次數越多，血小板抗體陽性檢出率越高。按照抗原抗體再次免疫應答機理，血小板抗篩陽性者隨著輸血次數增加，血小板抗體效價越高，輸注效果越差。沈溪英等[7]的研究結果支持這一理論，該研究表明：血小板抗體效價＜2的患者，100%輸注有效；當血小板抗體效價在8～32時，有77.7%患者出現了血小板破壞，雖輸注血小板，但循環(huán)中血小板數升高不明顯；而當血小板抗體效價達64時，則有88.8%的患者出現血小板輸注無效。由此可見血小板抗體強度直接影響輸入血小板的壽命，抗體效價越高，血小板增加數越少，兩者呈負相關。此外，有研究表明[8]血小板抗體強度越高，相應的配型相合率就越低，對于抗體強度4+的患者，因患者體內存在大量的血小板抗體，若首次配型不相合，通過再次配型找到相合的血小板概率很低。因此，血小板抗體效價檢測可能對預測配型結果有一定幫助。

本研究結果顯示，血小板抗體效價2～4的患者13例，8～16的患者36例，32的患者9例，＞64的患者2例，血小板抗體效價主要集中在8～16。這些結果與沈溪英等[7]的28例血小板抗體效價分布情況不一致，該結果顯示效價主要集中在8～64，且＞64者占比達50%。分析不一致的主要原因可能有以下幾點：（1）沈溪英等[7]的研究對象為成人，且是多次輸注濃縮血小板的患者，本研究以兒童為研究對象，有輸血史者僅15例，且輸血次數多未超過3次。（2）檢測方法不同，她采用雙抗體夾心固相酶免疫法，本研究采用固相凝集法，由于檢驗方法有一定的局限性，受特異性抗原、紅細胞指示液濃度等影響較大[9]，操作者倍比稀釋手法以及固相凝集法檢測血小板抗體效價的操作方法，都會對結果有影響。（3）另外，1997年時輸注的都是手工分濃縮血小板，里面白細胞含量比機采板高，更容易產生血小板抗體[10]。多項研究證實[11-13]，引起血小板輸注無效的免疫因素以同種抗體為主，其中大部分（約80%～90%）是由白細胞抗原引起，僅約10 %～20 %由血小板特異性抗原引起。

楊乾坤等[8]通過分析多次輸血患者的血小板抗體陽性率和抗體強度之間關系，發(fā)現血小板抗體的產生與輸血次數呈正相關，且輸血次數越多抗體強度越高。但是，本研究結果顯示，血小板抗篩陽性患兒的抗體效價分布與有無輸血史之間并無差異（P＞0.05），可能與本研究有輸血史的患者很少，且不一定是輸注血小板，輸注次數多數也不超過3次有關。反復輸注紅細胞/血小板是血液病、實體腫瘤和免疫性血小板減少患兒支持治療的重要手段，因懸浮紅細胞和機采血小板中均含有一定數量的白細胞，隨輸血次數增加， 血小板抗體陽性率也就增大[14-15]。陸樂等[16]研究顯示，血小板抗體陽性率在不同的臨床科室分布有顯著差異，風濕免疫科、血液內科和中醫(yī)科血小板抗體陽性率明顯高于其他臨床科室，這與臨床科室患者疾病有關。但本研究結果未發(fā)現血小板抗篩陽性患兒的抗體效價分布在不同疾病組之間存在差異（P＞0.05）。所以盡管疾病、輸血史會導致血小板陽性率增加，但對于血小板效價的影響卻不明顯。此外，本研究結果顯示效價分布在不同性別和年齡間無差異（P＞0.05），但袁慧銘[3]研究顯示，血小板抗體陽性率女性高于男性，這可能與女性的妊娠有關，而本研究對象為兒童，無妊娠史。

為明確不同效價抗體陽性患者血小板輸注效果，我們對檢測后輸注血小板的5例病例分析。結果顯示，5例患兒中僅進行配型的病例4輸注有效，其余病例，盡管血小板抗體效價高，但受限于當天血小板資源緊缺或患兒病情緊急，輸注之前未進行配型，結果顯示輸注后24 h CCI均≤4.5，表明輸注無效。楊乾坤等[8]研究結果表明，如果血小板抗體陽性患者不進行血小板交叉配型，而是隨機輸注血小板，有近七成的患者可能會出現輸注無效或是效果不理想的情況。目前，血小板輸注已成為有效預防或改善患者出血的重要手段，由此可見，對于血小板抗體強陽性患者建議臨床在輸注血小板之前進行配型，可以從血源降低血小板輸注無效風險。對于血小板抗體效價高的患兒尤為注意，一般情況下效價越高則輸注效果越差。這樣不僅提高了患兒血小板輸注有效率，而且節(jié)約了血液資源，促進了臨床輸注血小板工作安全合理有效的開展。

綜上所述，血小板強陽性（4+）患兒抗體效價分布不一，并且效價強度與輸血次數和疾病之間的關系尚有爭議，本研究也有研究病例數偏少的局限性。但血小板抗體效價對于預測血小板配型結果，提高血小板輸注的有效率有一定的幫助。由于檢測后進行血小板輸注的僅有5例，本研究未能對不同抗體效價患兒輸注效果進行統(tǒng)計學分析，有待進一步積累病例資料進行后續(xù)研究。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突