罕見抗-Tja合并自身抗體致疑難配血分析

許露萍 尹俊皓 王若涵

P血型為血型集合GLOB中的罕見表型，其中個體缺乏P，P1和PK抗原，其中P和PK是公共抗原，在這些個體的血清中通常會出現針對這些抗原的抗體，稱為抗Tja[1]，由于為隱性遺傳，在人群中的比例低[2]，屬于稀有血型。在日常配血工作中，我們發現1例由于血清中存在抗-Tja合并自身抗體引起的交叉配血困難標本，現報道如下。

材料與方法

1 一般資料 患者賈某，男，53歲，因泌尿系結石住院，擇期手術，既往體檢，無輸血史，術前Hb：67 g/L，擬術前輸血糾正貧血，申請輸血。在配血過程中發現不規則抗體篩查3個細胞均陽性, 凝集強度無強弱之分,與多位同型獻血者配血，主次側均不相合。

2 試劑與儀器 Ortho AutoVue Innova自動配血儀、微柱孵育器（OBHB-32型）、微柱凝膠卡離心機（01-BV-8260型）由奧森多醫療器械貿易公司提供、低速離心機（JW-1012型）由嘉文儀器裝備有限公司提供;電熱恒溫震蕩水槽（DKZ-2）由上海一恒科技有限公司提供。

ABO正反定型及RhD血型定型試劑卡（批號ABR203H）、抗人球蛋白（抗-IgG，C3b/C3d）檢測卡（微柱凝集法）（批號AHC162F）、人ABO血型反定型用3%紅細胞試劑盒（微柱凝集法）（批號A382Z）由奧森多醫療器械貿易公司提供；抗體篩選紅細胞試劑盒（批號20207038）由上海血液生物醫藥有限責任公司提供；紅細胞血型抗體鑒定細胞譜細胞（批號732019）、抗-Tja血清由廣州市血液中心提供。

3 實驗方法

3.1 血型鑒定：患者ABO、RhD血型鑒定采用血型血清學方法，參照輸血技術操作規程[3]進行。

3.2 直抗試驗：患者紅細胞與抗人球蛋白（抗-IgG，C3b/C3d）檢測卡反應，具體方法參照輸血技術操作規程[3]進行。

3.3 抗體篩查試驗：患者血清與抗體篩選紅細胞反應，判斷是否存在不規則抗體，參照《全國臨床檢驗操作規程》第4版[4]進行。

3.4 吸收放散實驗：使用ZZAP試劑處理自身DAT陽性紅細胞，用處理后的紅細胞做血漿的自身抗體吸收試驗，具體方法參照全國臨床檢驗操作過程第4版進行[4]，去除血漿中的自身抗體。

3.5 抗體鑒定：患者血清與抗體鑒定譜細胞反應，并比較血清56 ℃滅活前后和2-Me處理前后的結果，判斷血清中抗體的特異性。

結 果

1 血型鑒定試驗 患者ABO、RhD血型為O型RhD陽性，與A、B和O細胞鹽水立即離心均強凝集，置37 ℃ 溫浴10 min離心觀察均發生全部溶血，ABO、RhD血型結果見表1。

表1 患者ABO、RhD血型鑒定結果

2 自身抗體、DAT和不規則抗體篩查試驗 患者DAT結果為陽性；患者EDTA抗凝劑血漿、原血清和37 ℃溫浴10 min血清分別與抗體篩選紅細胞反應，自身抗體對照均陽性，結果見表2。

表2 不同樣本與抗體篩選紅細胞凝集反應結果

3 吸收試驗 通過吸收試驗，吸收血漿中的自身抗體后，自身抗體檢測為陰性，不規則抗體篩查試驗陽性。

4 抗體鑒定試驗 患者血清與1-11號抗體鑒定譜細胞反應及自身細胞反應，比較血清56 ℃滅活前后和2-Me處理前后的結果，判斷血清中抗體的特異性，結果見表3。

表3 血清與抗體鑒定譜細胞反應結果

5 P血型鑒定 患者紅細胞與抗-Tja血清呈陰性反應，O型對照細胞與抗-Tja血清呈陽性反應，說明患者血型為血清中含抗-Tja的P表型。

6 交叉配血結果 選擇科室所有庫存O型血液與該患者進行交叉配血，未能找到主次側相合的血液。

討 論

臨床上交叉配血不合的原因眾多，在進行血液篩查的每個環節都可能導致配血不合。在輸血前的血液檢測中，不規則抗體篩選陽性是導致不合的常見現象[5]。對于不規則抗體篩查陽性的患者，輸血前最好能進行抗體鑒定，但是國內大多醫院未能開展抗體鑒定，配血常常由當地中心血站幫忙完成[6]。

P血型系統是Landsteiner和Levine在用人紅細胞注射家兔來觀察多態性時發現的又一血型系統，是第3個被發現的人類紅細胞血型系統，包括P、PK、P1三種抗原[7]。極少數人的紅細胞上缺乏P1、P和PK抗原，則稱為P表型，這是一種十分罕見的表型[2]。P表型個體的血清中天然存在抗-PP1PK，也稱為抗-Tja，該抗體具有一定的臨床意義，可凝集除P表型之外的所有表型紅細胞，并能結合補體造成溶血，能引起嚴重的輸血反應[8]。P血型抗原特異性決定簇是多糖，其生物合成分為紅細胞糖苷酯(產生PK、P抗原) 和類紅細胞糖苷酯（產生P1抗原) 兩條途徑。在P基因作用下，將N-乙酰-D半乳糖加到三己糖神經酰胺上，將PK轉變為P。在歐洲每百萬人群中有5.8例，而在中國香港人篩選了100萬人群才發現1例。這種P表現型的特征是在其血清內發現有強溶血性IgM抗體，具有抗-P1+P+PK特異性，這種抗-Tja既可以是IgM型的（鹽水介質中發生溶血），也可以是IgG型的（在去除補體作用后抗人球蛋白介質中出現凝集）[9]。

在實施疑難配血操作前要經過鑒定ABO血型、不規則抗體篩查等一系列操作，然后再進行交叉配血，繼而有效保證安全輸血[10]。自身抗體合并同種抗體病例，常常造成臨床輸血過程中抗體篩查陽性及交叉配血不相合[11]。我科采用吸收試驗去除自身抗體，排除自身抗體對抗體鑒定的干擾后，進一步進行抗體鑒定。患者為O型，37 ℃溫浴后反定型出現溶血反應，抗體鑒定格局顯示其除與P表型紅細胞不反應外，與所有譜細胞反應，表明含有具高頻抗原的抗體，與P表型不反應可判定其是該血型集合中的抗體。患者血清56℃滅活前與抗體鑒定譜細胞有凝集反應，37 ℃水浴后出現溶血反應，而滅活補體后不出現溶血反應，證明血清中的抗體有補體活性。此外，該血清經2-Me處理后IAT呈陽性，顯示具有IgG性質抗體，表明該抗體是IgM和IgG混合型。這些均符合抗-PP1PK的抗體特性，而患者紅細胞與抗-PP1PK血清均無反應。同時因其血清中能檢出抗-PP1PK抗體，證明患者為P表型[12]。患者血清中存在抗-Tja合并自身抗體，交叉配血試驗受抗-Tja合并自身抗體影響，與多名供血者進行交叉配血均不相合，未能找到PP1PK抗原陰性的同型懸浮紅細胞。根據輸血技術規范規定，對于稀有血型患者，應采用自身輸血、同型輸血或配合型輸血。2011年，中國稀有血型網站開通（http：//www.chinarareblood.cn/）[13]，通過信息共享，為高頻抗原抗體患者解決輸血難題已可進行跨區域乃至國際合作[14]，為臨床稀有血型患者的輸血提供更有效的安全保障。

面對譜細胞全陽性的格局，需要運用多樣的血清學方法，對照高頻抗原抗體的特點，推測可能的抗體類別。因實驗室條件限制，未能運用分子生物學技術對其進行基因分型鑒定和測序。目前的研究認為抗-Tja可以導致妊娠早期女性的習慣性流產[15]，可追蹤調查該患者家族史，進一步研究其抗-Tja基因的遺傳特點。

（特別鳴謝廣州血液中心血型參比室老師對本次試驗的支持與幫助!）

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突