NCOA7在缺氧條件下通過AhR調(diào)控OSCC細(xì)胞糖酵解過程

羅笛 謝小燕 尹曉敏 程秀鳳 張妮 候雅 高義軍

中圖分類號:R739.8 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A doi:10.3969/j.issn.1001-3733.2021.06.014

據(jù)統(tǒng)計口腔鱗癌患者5年生存率約為50%[1]，且半數(shù)患者在初次治療后出現(xiàn)復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移[2]。低氧環(huán)境下的糖酵解途徑加強(qiáng)有助于促進(jìn)口腔鱗癌的遷移和侵襲[3-4]。而核受體輔激活蛋白7(nuclear receptor coactivator 7，NCOA7)是近年發(fā)現(xiàn)在口腔癌發(fā)生發(fā)展中可能有重要作用的因子，可作為芳香烴受體(Aryl hydrocarbon receptor,AhR)的核共激活因子發(fā)揮其作用[5]。研究表明激活A(yù)hR可在缺氧條件下明顯抑制CD4+T細(xì)胞糖酵解效應(yīng)，而在常氧條件下未產(chǎn)生這些作用[6]。這為研究低氧環(huán)境下口腔鱗癌的進(jìn)展提供了研究思路。

本研究在體外構(gòu)建了口腔鱗癌細(xì)胞株的缺氧模型，并確定了缺氧條件下NCOA7和AhR在口腔癌細(xì)胞株中的表達(dá)變化及對糖酵解效應(yīng)的調(diào)控作用，深入了解低氧環(huán)境下口腔鱗癌發(fā)生發(fā)展的具體機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 實驗標(biāo)本 收集2019 年07月～2019 年08 月在中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院收治的口腔鱗癌患者5 例，分別取每位患者舌部的OSCC組織和OSCC癌旁組織(約癌旁3 cm處)標(biāo)本，固定包埋，切片。本項研究已通過中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)[批準(zhǔn)號：(2019)倫審第(研138)]，并取得患者書面知情同意。

1.1.2 實驗試劑 氯化鈷(CoCl2·6H2O)(Sigma公司，美國)；豆蔻素(Cardamonin)(MedChemExpress，美國)；葡萄糖測定試劑盒和乳酸測定試劑盒(南京建成公司)；CCK8試劑盒(Dojindo公司，日本)；兔抗人NCOA7多克隆抗體(Abcam公司，英國)；鼠抗人AhR單克隆抗體(Santa Cruz Biotechnology，美國)；鼠抗人HIF1α多克隆抗體(Affinity Biosciences，美國)；鼠抗人β-actin多克隆抗體、兔，鼠二抗(Proteintech公司，美國)；jetPRIME?轉(zhuǎn)染試劑盒(jetPRIME?公司，瑞士)；SYBR Green qRCR 試劑盒(TaKaRa公司，日本)。

1.2 實驗方法

1.2.1 免疫熒光雙重染色 將標(biāo)本切片用二甲苯脫蠟，水化?！?br>