大麻二酚對人牙齦間充質干細胞體外成骨分化的影響

王偉峰 李娜

中圖分類號:R329.2 文獻標志碼：A doi:10.3969/j.issn.1001-3733.2021.06.007

人牙齦間充質干細胞(bone marrow mesenchymal stem cell，hGMSCs)具有可塑性強、無免疫排斥、易于獲取、來源廣泛等優點，是研究細胞骨向分化、骨組織改建等生理過程的理想材料，被越來越多的應用于修復牙組織缺損的研究，如何促進其成骨分化成為研究的熱點[1-3]。大麻二酚(cannabidiol,CBD)是從大麻提取的化合物，無神經致幻作用，且藥用價值越加明顯，可通過腺苷A1途徑抑制凋亡、抗氧化自由基等方式治療多發性硬化、舞蹈病、炎癥等[4-5]，但CBD對hGMSCs成骨分化的影響，相關報道較少。本研究擬通過研究CBD對hGMSCs成骨分化的影響，為牙組織工程修復提供研究參考。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

堿性磷酸酶(alkaline Phosphatase, ALP)試劑盒(武漢艾美捷科技有限公司)；CBD(上海源葉生物科技有限公司)；逆轉錄試劑盒(DBI公司，德國)；Trizol試劑盒(Gibco-BRL公司，美國)；紫外線分光光度儀(Eppendorf，德國)；熒光定量PCR分析儀(BIO-RAD公司，美國)；CCK-8試劑盒(南京建成生物工程研究所)；BCA蛋白濃度測定檢測試劑盒(上海碧云天生物技術公司)；茜素紅、Notch信號通路抑制劑DAPT(Sigma公司，美國)。

1.2 實驗方法

1.2.1 hGMSCs的分離提取和培養 收集進行牙拔除術的健康牙齦組織進行原代培養。將牙齦組織剪碎至1 mm3左右，接種于含適量間充質干細胞培養基(15%FBS、1%青-鏈霉素、100 mmol/L維生素C)的無菌培養皿中，置于37 ℃、5%CO2的條件下的培養箱中繼續培養。每3 d進行1 次換液，當細胞融合到80%～90%的程度時進行傳代培養。

1.2.2 hGMSCs的鑒定 取生長狀態較好的第三代hGMSCs進行TrypLE消化，離心后制成細胞懸液(5×105/mL)，加入1 μL hGMSCs表面標記物CD73、CD90及CD105抗體。室溫避光孵育15 min，加入1×FACSTM裂解液，室……