阿克蘇地區某規模化奶牛場2020~2021年度牛布魯氏菌病感染情況調查

塔·賽日吉瑪，王 嵐，孫鵬亮，楊睿智，李蓮瑞*

（1．塔里木大學動物科學學院，新疆阿拉爾843300；2．新疆生產建設兵團塔里木畜牧科技重點實驗室，新疆阿拉爾843300；3．新疆生產建設兵團塔里木動物疫病診斷與防控工程實驗室，新疆阿拉爾843300）

布魯氏菌病（brucellosis，簡稱布病）是由布魯氏桿菌（Brucella）引起的嚴重危害人類健康和畜牧業發展的人獸共患傳染病[1]，是《中華人民共和國傳染病防治法》法定二類傳染病，并列入《國家中長期動物疫病防治規劃（2012~2020年）》優先防治的病種[2]。近年來，活畜調動較為頻繁，局部地區時有布病發生，關于牛場布魯氏桿菌病的報道越來越多[3]。布魯氏菌呈短桿狀或球桿狀，無芽孢以及鞭毛，革蘭染色呈陰性[4]。布氏桿菌會導致全身性的網狀內皮細胞增生，可能引起關節炎及膿毒血癥[5]。布病主要傳染源為染疫的家畜，特別是牛、羊、豬等，家畜感染布病后可導致流產、產弱死犢、不孕、睪丸炎，使動物的生產性能大幅度下降[6]。本試驗通過3種不同的試驗方法，對新疆阿克蘇地區某規模化奶牛場2020~2021年間采集的血清樣品進行感染情況調查，并對調查結果進行統計與分析，旨在了解該規模化奶牛場布病流行情況，為防控奶牛布病提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗樣本

本試驗于新疆阿克蘇地區某規模化奶牛場采集血樣，每份血樣3~4 mL。2020年間采集血樣共1 671份，其中成母牛883份、青年牛201份、育成牛367份、犢牛220份；2021年間采集血樣共1 582份，其中成母牛525份、青年牛122份、育成牛633份、犢牛302份。試驗共采集血樣3 253份。

1.2 試劑與儀器

試劑：虎紅平板凝集試驗抗原、試管凝集試驗抗原與布魯氏菌病國家標準陽性血清，均購自中國獸醫藥品監察所；牛布魯氏桿菌病抗體快速檢測卡（膠體金法）試劑盒購自河北帝準生物技術有限公司（生產批號20200509）。

儀器：KZ04273/KZ01448/JZ35758微量移液器（Eppendorf公司）、TDZ5-WS多管架自動平衡離心機（湖南湘儀實驗室儀器開發有限公司）、HVE-50高壓滅菌鍋（日本平山制作所株式會社）。

1.3 樣本預處理

血樣采集后，于多管架自動平衡離心機中3 000 r/min離心10 min，微量移液器吸取1 mL上層血清分裝于1.5 mL干凈無菌的EP管中，將其編號后置于－20℃保存，待檢。

1.4 檢測方法

檢測前，將待檢血清與試劑取出并恢復至室溫，采用虎紅平板凝集試驗和牛布魯氏桿菌病抗體快速檢測卡（膠體金法）試驗分別進行初步檢測，并將上述2種方法初檢中1項或2項均為陽性的樣品采用試管凝集試驗進行再次檢測，最終判斷其布病感染情況。

1.4.1 虎紅平板凝集試驗

虎紅平板凝集試驗的操作及結果判定嚴格按照《動物布魯氏菌病診斷技術GB/T 18646—2018》進行[7]。

1.4.2 牛布魯氏桿菌病抗體快速檢測卡（膠體金法）試驗

嚴格按照牛布魯氏桿菌病抗體快速檢測卡（膠體金法）試劑盒說明書測試步驟進行操作。

陽性：C線顯示紅色色帶，T線不顯示紅色色帶。陰性：C線顯示紅色色帶，T線顯示紅色色帶，無論顏色深淺，均判為陰性。無效：C線不顯示紅色色帶，無論T線是否顯示紅色色帶，均判為無效結果，需重新檢測。

1.4.3 試管凝集試驗

上述2種方法初檢中1項或2項均為陽性的樣品采用試管凝集試驗進行再次檢測。試管凝集試驗的操作及結果判定嚴格按照《動物布魯氏菌病診斷技術GB/T 18646—2018》進行[7]。

2 結果與分析

2.1 2020年虎紅平板凝集試驗結果（見表1、表2）

由表1可知，2020年間分離血清共1 671份，其中成母牛883份，青年牛201份，育成牛367份，犢牛220份，共檢出陽性樣本0份，總陽性率為0。

表1 2020年虎紅平板凝集試驗檢測結果Tab.1 Tiger Red plate agglutination test results in 2020

由表2可知，2021年間分離血清共1 582份，共檢出陽性樣本26份，其中成年母牛9份（個體陽性率為1.71%），青年牛10份（個體陽性率為8.20%），育成牛7份（個體陽性率為1.11%），犢牛0份（個體陽性率為0），總陽性率為1.64%。

表2 2021年虎紅平板凝集試驗檢測結果Tab.2 Tiger Red plate agglutination test results in 2021

2.2 牛布魯氏桿菌病抗體快速檢測卡（膠體金法）試驗結果（見表3、表4）

由表3可知，2020年間分離血清共1 671份，其中成母牛883份，青年牛201份，育成牛367份，犢牛220份，共檢出陽性樣本0份，總陽性率為0。

表3 2020年牛布魯氏桿菌病抗體快速檢測卡（膠體金法）試驗檢測結果Tab.3 Bovine brucellosis antibody rapid test card(colloidal gold method)test results in 2020

由表4可知，2021年間采集血樣共1 582份，成年母牛5份（個體陽性率為0.95%），青年牛4份（個體陽性率為3.28%），育成牛3份（個體陽性率為0.47%），犢牛0份（個體陽性率為0），總陽性率為0.76%。

表4 2021年牛布魯氏桿菌病抗體快速檢測卡（膠體金法）試驗檢測結果Tab.4 Bovine brucellosis antibody rapid test card(colloidal gold method)test results in 2021

2.3 試管凝集試驗結果（見表5、表6）

表5 2021年虎紅平板試驗陽性樣本試管凝集試驗檢測結果Tab.5 Tiger Red plate test positive sample test tube agglutination test results in 2021

由表5、表6可知，對于2021年間分離的1 582份血清，采用虎紅平板凝集試驗和牛布魯氏桿菌病抗體快速檢測卡（膠體金法）試驗分別檢測出陽性樣本26份和12份，然后對其進行試管凝集試驗。結果顯示，對虎紅平板凝集試驗檢出的陽性樣本，再次進行試管凝集試驗檢測出的陽性率為46.15%，對牛布魯氏桿菌病抗體快速檢測卡（膠體金法）試驗檢出的陽性樣本，再次進行試管凝集試驗檢測出的陽性率為100.00%。

表6 2021年牛布魯氏桿菌病抗體快速檢測卡(膠體金法)試驗陽性樣本試管凝集試驗檢測結果Tab.6 Bovine brucellosis antibody rapid test card(colloidal gold method)test positive sample test tube agglutination test results in 2021

3 討論

近年來，在新疆政府部門出具的防控布病文件[8]的指導下，新疆防控布魯氏桿菌病的工作力度逐年加大，防控措施取得有效結果，但受到牛、羊市場交易越發頻繁、基層防疫體系薄弱等因素影響，布魯氏桿菌病的防控工作仍然面臨著較大的困難和壓力[9]。為做好牛布魯氏桿菌病防控工作，應遵循“預防為主”的方針，在預防方面加大力度，使奶牛場工作人員更加了解布魯氏桿菌病的防治知識及具備自我防范的技能。如奶牛接產時應注意個人防護，穿戴好防護服、口罩及橡膠手套[10]等；消毒工作也是開展防控工作中重要的一環，應該安排專門人員對奶牛場進行周期性的徹底消毒[11]，避免有害病菌的產生；加強奶牛場的引種管理[12]，以避免外來牛只對奶牛場可能的污染，因此新購進的奶牛必須隔離30 d以上，并在混群之前還需要進行進一步的檢測；接種疫苗是一種較為常用的防控措施[13-14]，應嚴格按照國家規定的牛布病疫苗接種措施進行操作。牛布魯氏桿菌病的疫苗種類較多，效果較好且較常使用的是19號布魯菌苗和流產布氏菌素45/20仿劑苗，這2種菌苗能提高奶牛的抗感染能力，在許多養殖場被應用。因而在養殖中必須做好該病的防治工作，以防該病出現大范圍的暴發。

本試驗結果表明，2020~2021年間阿克蘇地區該規模化奶牛場中，2020年布病陽性率為0，2021年布病陽性率為0.76%。牛布病陽性率低于國家控制區標準（牛1.00%）[8]。該規模化奶牛場對布魯氏桿菌病的防控做得比較好，但是仍有不足之處。尚無針對牛布魯氏桿菌病的特效藥，該病主要呈慢性經過，且具有廣泛的傳播渠道，早期感染不易發現，一旦發生不僅損害奶牛場的經濟效益，還會影響人體健康[15]。因此，布魯氏桿菌病的防控對于該奶牛場的生產來說仍是重中之重。

本試驗中，虎紅平板凝集試驗檢測結果與試管凝集試驗檢測結果不符，可能是由于虎紅平板凝集試驗受到非特異性抗體的干擾，也可能是纖維蛋白原與虎紅試劑發生非特異性凝集反應，產生的非特異性凝集[16]，出現假陽性結果。因此，在布病檢測的實際臨床應用中，應需2種或2種以上的方法相互配合使用[17]，通過對不同檢測方法的結果進行比較分析，綜合判斷樣品的檢測結果。

4 結論

本試驗結果表明，阿克蘇地區該規模化奶牛場2020~2021年度布病防控總體良好，但仍有不足之處，應注意布魯氏桿菌病的防控。