H5、H7亞型禽流感母源抗體對蛋雛雞首免日齡的影響

錢明珠，王申鋒*，王荷香，謝軍強，王德剛，朱紅標

（1．河南農業職業學院牧業工程學院，河南鄭州451450；2．鄭州航空港經濟綜合試驗區社會事業局，河南鄭州450019；3．湯陰縣畜牧獸醫總站，河南安陽456150；4．河南健恒動物藥業有限公司，河南鄭州451476）

禽流感（avian influenza，AI）是由A型流感病毒（AIV）引起的禽類的烈性傳染病，臨床上根據病毒致病力強弱不同將禽流感分為高致病性（HPAI）、低致病性（LPAI）和無致病性3種[1]。近年出現數起H5、H7亞型高致病性禽流感感染人的報道，禽流感對養禽業和人類公共安全造成巨大威脅[2]。研究表明，目前流行的H5亞型AIV主要為clade2.3.4.4和clade2.3.2.1分支毒株，其中優勢流行毒株為clade2.3.4.4[3-4]。2019年投入使用的疫苗（Re-11+Re-12株、rSD57株+rFJ56株）與當前流行AIV毒株的抗原性匹配度更高，在預防H5亞型禽流感方面發揮積極作用[5]。禽流感可引起蛋雞產蛋性能下降，造成巨大的直接經濟損失。目前尚無針對禽流感的特效治療藥物，必須通過疫苗接種進行控制[6]。禽類可通過卵黃獲得母源抗體，從而產生天然的被動免疫，但母源抗體具有一定的時效性，會隨著時間推移不斷衰減直至消失。接種禽流感疫苗可使其產生主動免疫應答，但母源抗體會對主動免疫應答產生影響，所以，應根據雛雞母源抗體的消長規律確定禽流感疫苗最佳首免時間[7-8]。本試驗對鄭州市某種雞場的蛋雛雞H5、H7亞型禽流感母源抗體消長規律進行了研究，以確定該雞場H5、H7亞型禽流感的首免時間，為種雞場制定科學合理的禽流感免疫程序提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 試驗動物

1日齡農大3號蛋雛雞母雛500只，飼養于鄭州某種雞場。

1.1.2 疫苗與試劑

疫苗：重組禽流感（H5+H7）三價滅活苗（H5N1Re-11+Re-12株、H7N9Re-2株、H5N2）購自哈爾濱維科生物技術有限公司。

試劑：禽流感病毒血凝抑制試驗抗原H5亞型（Re-11株）、（Re-12株）、H7亞型（Re-2株）以及禽流感病毒血凝抑制試驗陽性血清H5亞型（Re-11株）、（Re-12株）、H7亞型（Re-2株），均購自哈爾濱國生生物科技股份有限公司。

1.2 試驗方法

1.2.1 父母代蛋種雞的免疫

父母代蛋種雞免疫接種重組禽流感（H5+H7）三價滅活苗（H5N1Re-11+Re-12株、H7N9Re-2株、H5N2），首免日齡為14日齡，二免時間在45日齡，三免時間在105日齡。接種劑量按標簽說明，常規進行抗體檢測。

1.2.2 飼養管理

育雛雞舍取暖、照明、通風設施完善。蛋雛雞入舍前徹底清掃，密閉熏蒸消毒2次。蛋雛雞入舍后，先飲少量溫水，再飲糖水，3 h后開食。第1 d溫度控制在35℃左右，濕度65%~70%，以后每天降低0.5℃，一周后降至31℃。試驗期間通風與光照按飼養標準設定。喂水喂料2次/d。每2 d使用百毒殺和戊二醛噴霧消毒1次。定期采樣、接種疫苗，觀察并記錄蛋雛雞生長狀態。30日齡試驗結束。

1.2.3 血清制備

蛋雛雞飼養至1、2、5、10、15、20、25、30日齡時，隨機選取20只雞采集血樣。血液37℃恒溫培養箱中靜置20~35 min，待血清析出將血清轉至1.5 mL離心管并標記，-20℃保存。

1.2.4 禽流感抗體效價檢測

采用血凝（HA）和血凝抑制（HI）試驗進行禽流感抗體效價檢測，嚴格按照高致病性禽流感診斷技術（GB/T18936—2020）標準實施。

1.2.5 判定標準

按照王孝德等[9]、張雪花等[10]、馮艷男等[11]研究方法和臨床實踐，禽流感HI抗體效價≥6 log2判定為合格，＜4 log2判定為不合格。

1.3 數據統計與分析

數據采用GraphPad Prism 7進行統計處理，結果以“平均值±標準差”表示。

2 結果與分析

2.1 1日齡蛋雛雞禽流感母源抗體與父母代蛋種雞禽流感免疫抗體檢測結果（見表1）

由表1可知，父母代蛋種雞禽流感免疫抗體平均效價和抗體合格率均較高；1日齡蛋雛雞的禽流感母源抗體平均效價均大于6 log2，群體抗體合格率為99%，可保護蛋雛雞免受H5、H7亞型禽流感病毒的侵襲。

表1 1日齡蛋雛雞禽流感母源抗體與父母代蛋種雞禽流感免疫抗體檢測結果Tab.1 Detection results of maternal antibody avian influenza in one-day-old layer chicks and parental layer breeder avian influenza antibody

2.2 不同日齡蛋雛雞AIV H5亞型母源抗體效價（見表2）

由表2可知，H5亞型禽流感R-11、R-12母源抗體效價和群體抗體合格率均在2日齡時最高；5日齡時，H5亞型禽流感母源抗體平均效價和群體抗體合格率呈緩慢下降，但平均效價仍高于6 log2；7日齡時，其母源抗體平均效價和群體抗體合格率均急劇下降，說明雞群已經面臨禽流感的威脅。10日齡后，抗體在4 log2以下，表明H5亞型禽流感母源抗體已不能抵抗禽流感病毒侵襲；20日齡后，母源抗體平均效價和群體抗體合格率逐漸下降至0。

表2 不同日齡蛋雛雞AIV H5亞型母源抗體效價Tab.2 Titer of maternal antibody of AIV H5 subtype in layer chicks of different ages

2.3 不同日齡蛋雛雞AIV H7亞型Re-2母源抗體效價（見表3）

表3 不同日齡蛋雛雞AIV H7亞型Re-2母源抗體效價Tab.3 Titer of maternal antibody of AIV Hsubtype Re-2 in layer chicks of different ages

由表3可知，蛋雛雞H7亞型禽流感母源抗體效價和群體抗體合格率在2日齡時最高，為7.59 log2，之后隨著日齡增加逐漸下降；5日齡時，H7亞型禽流感母源抗體接近抗體合格的臨界值（6 log2）；7日齡以后，H7亞型禽流感母源抗體效價急劇下降至抗體保護效價（4 log2）以下，表明雛雞已經處于禽流感病毒感染的危險期。

2.4 蛋雛雞群禽流感H5、H7亞型不同日齡母源抗體間的關系（見圖1、圖2）

由圖1可知，H5和H7亞型禽流感母源抗體效價下降趨勢基本一致。2~7日齡，試驗蛋雛雞群母源抗體呈緩慢下降趨勢；7~20日齡時，母源抗體下降幅度較大；20~30日齡，母源抗體均在2 log2以下。

由圖2可知，2~7日齡時，試驗蛋雛雞群H5亞型禽流感母源抗體合格率在80%以上；10日齡后試驗蛋雛雞群母源抗體合格率急劇下降；20日齡以后母源抗體合格率在20%以下。5日齡前，試驗蛋雛雞群H7亞型禽流感母源抗體合格率在90%以上；5日齡后試驗蛋雛雞群母源抗體合格率急劇下降；20日齡以后母源抗體合格率在20%以下。

3 討論

2013年起，我國出現多起H7N9流感病毒感染，對養禽業造成了巨大的損失，嚴重阻礙了行業的健康發展[12-14]。H5和H7亞型禽流感病毒引起的高致病性禽流感（HPAI）已被世界動物衛生組織列為一類動物疫病[15]。AIV不斷變異，導致我國流行的AIV存在多血清型、多基因型、多致病性等特點[16]。但強制免疫能有效阻止禽流感在家禽和人之間的流行[17]。

本試驗中，采用重組禽流感（H5+H7）三價滅活疫苗（H5N1Re-11株+Re-12株、H7N9Re-2株、H5N2）對父母代蛋種雞進行免疫，監測蛋雛雞H5和H7亞型禽流感母源抗體的消減規律。臨床判定認為禽流感母源抗體≥6 log2時可完全保護，在4 log2時可獲得大群保護。結果表明，蛋雛雞H5、H7亞型禽流感母源抗體效價和群體抗體合格率在5日齡前均維持高水平，之后隨著日齡增加而逐漸下降；7日齡后呈直線下降趨勢。試驗蛋雛雞群H5亞型禽流感母源抗體水平在10日齡時處在4 log2以上，群體保護率70%以上；H7亞型禽流感母源抗體水平在10日齡時處在4 log2以下，群體保護率60%，表明試驗蛋雛雞群已經面臨禽流感威脅。雞群從接種滅活疫苗到產生抗體需要7~14 d，同時需避免母源抗體對疫苗免疫應答的干擾作用。結果表明，該種雞場蛋雛雞H5、H7亞型禽流感最佳首免時間應在7日齡為最佳。

李叔偉等[18]為了評估重組禽流感病毒H5+H7亞型三價滅活疫苗（H5N1Re-11株、Re-12株、H7N9Re-2株）對白羽肉雞免疫效果以及最佳免疫時間，選取3個廠家的重組禽流感病毒H5+H7亞型三價滅活疫苗分別于1日齡和7日齡接種白羽肉雞，結果表明，1日齡接種抗體效價要好于7日齡接種時產生的抗體效價。有條件的蛋雞場可考慮將H5、H7亞型禽流感的首免時間放在1日齡，但建議先進行小群試驗，再大群推廣。

4 結論

建議該種雞場H5、H7亞型禽流感的首免時間為7日齡，條件成熟后可考慮提前到1日齡。