組蛋白甲基轉移酶hSETD1A在直腸癌組織中的表達及對患者預后的判斷價值

王高翔 應家祺 李秀庚

直腸癌是當前臨床上常見的1種胃腸道惡性腫瘤，患者早期多數并沒有明顯的臨床癥狀，但是隨著病情的發展，患者會出現便秘、排血便、腹瀉以及腹痛等癥狀，晚期患者可出現體重下降和嚴重貧血等，死亡率較高[1-2]。當前手術治療為直腸癌患者根治的唯一途徑。雖然當前直腸癌的診斷與治療發展迅速，而且根治術與化療方案也在不斷更新，但是直腸癌患者的長期生存情況依然比較差，所以對直腸癌患者的病情診斷與預后判斷指標具有重要臨床價值。相關研究表明[3]，組蛋白甲基轉移酶是一種甲級轉移酶活性的酶，生物學功能廣泛，而且在不同的細胞中發揮著生殖細胞發育、腫瘤演化、信號傳遞、染色質重塑、翻譯調控、干細胞分化以及轉錄調控等多種生物學功能。因此本文選取我院2016年3月到2019年3月共收治的60例直腸癌患者作為研究對象，分析組蛋白甲基轉移酶hSETD1A在直腸癌組織中的表達水平及對患者預后判斷價值。具體報告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取我院2016年3月到2019年3月收治的60例直腸癌患者作為研究對象，所有患者未接受過抗癌治療和術前放化療，在患者知情同意的情況下收取手術標本，包含淋巴結轉移組織、配對癌旁正常組織及直腸癌組織。為了保證組蛋白甲基轉移酶hSETD1A的原始狀態表達，所有患者未在術前接受過化療與相關腫瘤治療。納入標準：均知情并簽署同意書；麻醉風險評分≥4分；無周圍組織廣泛浸潤；經過病理學和影像學檢查確診為結直腸癌。排除標準：存在精神障礙的患者；免疫功能和凝血功能障礙的患者；出現嚴重腹腔黏連、嚴重感染和遠端轉移的患者；既往有過腹腔部位手術史的患者。結直腸癌患者中男性34例，女性26例；年齡62～78歲，平均年齡(66.13±4.32)歲。

1.2 試驗方法

免疫組織化學原理，免疫組織化學主要是應用抗體特異性與抗原結合原理，利用化學反應標記抗體顯色劑顯色之后確定組織細胞之內的抗原，并對其進行定量、定性和定位研究。將所有標本置于3.7%的重型甲醛溶液中進行固定，隨后常規脫水處理，石蠟包埋組織塊進行連續切片，切成3 μm厚，并將石蠟切片與溫水之上展平，隨后將切片轉移到處理過之后的玻璃片上，并在室溫下稍微進行干燥，放入70 ℃恒溫烤箱之中，進行60 min烘烤。免疫組織化學應用瑞士羅氏公司的全自動免疫組織化學分析儀，并依照實驗步驟的說明書對標本進行免疫組織化學檢測。應用的兔抗人SETD1A抗體(貨號PA5-54254，工作濃度1∶200)購自美國Thermo Fisher Scientific公司，用已知陽性組織作為陽性對照，用PBS代替一抗作為陰性對照。

1.3 判定標準

組蛋白甲基轉移酶hSETD1A主要在細胞核中表達，通過染色后，陽性標記為棕黃色顆粒或者黃色。依照切片之中陽性腫瘤細胞占所有腫瘤細胞百分比進行判定，其中陽性腫瘤占比>50%是3分，26%～50%是2分，1%～25%是1分，無腫瘤細胞陽性是0分。依照陽性強度進行評分標準為：強陽性3分，中等強度陽性2分，微弱陽性1分。陽性強度評分×陽性百分比評分=最后總評分。其中總評分為6～9分屬強陽性，2～4分屬中-弱陽性，0～1分屬陰性[4]。

1.4 統計學方法

2 結果

2.1 組蛋白甲基轉移酶hSETD1A在不同組織中的表達分析

與正常組織相比組蛋白甲基轉移酶hSETD1A mRNA在腫瘤組織與轉移組織之中表達高于正常組織(P<0.05)；結直腸腫瘤Ⅰ～Ⅱ期患者組蛋白甲基轉移酶hSETD1A表達量明顯低于結直腸腫瘤Ⅲ～Ⅳ期患者(P<0.05)，如圖1所示。

圖1 組蛋白甲基轉移酶hSETD1A在不同組織中的表達分析

2.2 60例直腸癌患者的臨床病理學特征

通過對60例直腸癌患者的臨床病理學特征觀察發現，hSETD1A陽性組與hSETD1A陰性組患者年齡、腫瘤大小、淋巴結轉移、TNM階段、T分期對比無明顯差異(P>0.05)，hSETD1A陽性組與hSETD1A陰性組患者性別和腫瘤分化對比差異顯著(P<0.05)，見表1。

表1 60例直腸癌患者的臨床病理學特征/例

2.3 組蛋白甲基轉移酶hSETD1A與患者臨床病理相關性分析

Spearman相關分析結果顯示：患者性別、腫瘤分化與組蛋白甲基轉移酶hSETD1A水平表達呈正相關(P<0.05)，如表2所示。

表2 組蛋白甲基轉移酶hSETD1A與患者臨床病理特征的相關性分析

2.4 影響直腸癌患者預后情況的多因素分析

多因素回歸分析顯示，后續治療、淋巴結轉移、T分期與組蛋白甲基轉移酶hSETD1A可作為直腸癌患者預后獨立因素(P<0.05)，如表3所示。

表3 影響直腸癌患者預后情況的多因素分析

3 討論

hSETD1A屬于組蛋白甲基轉移酶TrxG家族成員，它的甲基化位點在組蛋白H3第4位賴氨酸(H3K4)，而且H3K4的三甲基化(H3K4me3)是基因轉錄活躍的重要標志[5-7]。因此本文針對于組蛋白甲基轉移酶的研究主要對hSETD1A進行分析。SALZ等研究發現[8]，組蛋白甲基轉移酶hSETD1A可以利用和β-catenin相互作用招募到Wnt信號通路靶基因的啟動因子上，并對直腸癌細胞生物學行為進行調控。相關實體腫瘤研究中表明[9-10]，和癌旁組織相比較來說，乳腺癌、腸癌腫瘤組織中hSETD1A mRNA表達較高，并且其與乳腺癌患者的預后呈明顯相關性。

本研究結果表明，和正常組織相比組蛋白甲基轉移酶hSETD1A mRNA在腫瘤組織與轉移組織之中表達高于正常組織(P<0.05)，結直腸腫瘤Ⅰ～Ⅱ期患者組蛋白甲基轉移酶hSETD1A表達量明顯低于結直腸腫瘤Ⅲ～Ⅳ期患者(P<0.05)，由此證明，直腸腫瘤組織中hSETD1A mRNA表達明顯高于正常組織。相關研究表明[11]，在患者癌癥不同階段，無論是局部還是全身，患者的H3K4me3表達水平會出現明顯變化，在一定程度上可以作為疾病復發預警。另由研究表明[12]，H3K4me3與hSETD1A兩者的mRNA表達在很多腸癌細胞中明顯增加，而且證實了組蛋白H3K4me3主要是hSETD1A作用的結果，與本研究結果相符；通過對60例直腸癌患者的臨床病理學特征觀察發現，hSETD1A陽性組與hSETD1A陰性組患者年齡、腫瘤大小、淋巴結轉移、TNM階段、T分期對比無明顯差異(P>0.05)，hSETD1A陽性組與hSETD1A陰性組患者的性別和分化水平對比差異顯著(P<0.05)；Spearman相關分析結果顯示：患者的性別、分化水平與組蛋白甲基轉移酶hSETD1A水平表達正相關(P<0.05)由此證明，不同性別和不同分化水平的直腸癌患者中hSETD1A表達出現明顯差異。相關研究表明[13-14]，不同性別的直腸癌患者的發生了次和死亡率均存在差異，且中國男性直腸癌的放了從明顯高于女性患者。這種差異情況我們用技術來進行解釋。SLATTERY等研究表明[15]，雌激素可能會對抗直腸癌之中微衛星不穩定型保護因子，與本研究結果相符，而且本研究還觀察到hSETD1A與分化程度相關，由于數據量較小，其結果還有待更多的研究驗證；多因素回歸分析顯示，后續治療、淋巴結轉移、T分期與組蛋白甲基轉移酶hSETD1A可作為直腸癌患者預后獨立因素(P<0.05)，由此證明，可應用淋巴結轉移、T分期與組蛋白甲基轉移酶hSETD1A對患者的預后情況進行判斷。綜上所述，組蛋白甲基轉移酶在腫瘤組織表達中高于正常組織，而且能夠作為判斷直腸癌患者預后情況的獨立因素。