ID-1、ILK蛋白表達與宮頸癌病理特征的關系

楊曉艷 董國玲 劉愛敏

宮頸癌是由正常宮頸黏膜組織經歷宮頸上皮內瘤變(CIN)而逐步演變而來的疾病，該過程受抑癌基因抑制和癌基因激活的共同作用，當抑癌基因和癌基因間失衡時，導致細胞無控性增殖及細胞凋亡受抑制[1-3]。細胞分化抑制因子(ID-1)與多種惡性腫瘤如乳腺癌、胃癌、卵巢癌的細胞分化有關[4]。有研究報道[5-6]ID-1通過激活Ki-67途徑誘導細胞增殖，從而對細胞分化起到負性調控作用，阻滯腫瘤細胞凋亡進程，誘使惡性腫瘤進展。但關于ID-1與宮頸癌發生發展的關系目前相關報道較少。本研究利用免疫組織化學方法對比分析宮頸癌組織標本、宮頸上皮瘤變(CIN)組織標本及正常宮頸組織標本中ID-1蛋白、ILK蛋白的表達，分析宮頸癌不同病理表現與ID-1蛋白、ILK蛋白表達的關系，旨在確定上述指標在宮頸癌診斷和預后評估中的臨床價值。現報告如下。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

選取2018年7月至2020年6月的84例宮頸癌組織標本(宮頸癌組)、同期獲取的宮頸上皮瘤變(CIN)組織標本40例(CIN組)、正常宮頸組織標本40例(對照組)。

宮頸癌組，年齡41～65歲，平均(54.1±8.2)歲；國際婦產聯盟分期(FIGO)：Ⅰ期17例、Ⅱ期32例、Ⅲ期26例、Ⅳ期9例；腫瘤分化程度：高∶中∶低為22∶35∶27；淋巴結轉移陽性46例；肌層浸潤深度≥1/2 35例、<1/2深度 49例；腫瘤病灶：≥3.0 cm 41例、<3.0 cm 43例。CIN組，年齡37～62歲，平均(50.3±8.0)歲；CIN分級：Ⅰ級11例、Ⅱ級19例、Ⅲ級10例。對照組，年齡40～65歲，平均(51.4±8.7)歲。3組的年齡比較，差異不具有統計學意義(P>0.05)。

診斷及入選標準：①所有標本已被病理學檢查所證實；②均為首次診斷，既往無放化療病史；③本研究符合醫學倫理學相關規定。排除標準：①其他類型或部位的癌癥；②手術后復發的宮頸癌患者；③未經病理學檢查證實。

1.2 免疫組化檢測

將3組組織樣本進行修正處理，隨后經石蠟包埋制備為標本，通過4%多聚甲醛溶液進行固定，總時長為3 d，取出后進行4 μm切片。制備載玻片并滴入5%多聚賴氨酸，隨后染色，待樣本出現棕黃色后停止，移至顯微鏡下，設置為400倍視野觀察樣本總細胞及陽性細胞數。

ID-1、ILK蛋白陽性染色主要定位于細胞質中，陽性表達均顯色為黃色、棕黃色、褐色。①根據免疫組化染色的深度：無色(0分)、淡黃色(1分)、棕黃色(2分)、褐色、黑色(3分)；②根據免疫組化染色的細胞占比情況進行評分：比例≤10%為1分、所占比例范圍>10%～50%為2分、所占比范圍>50%～75%為3分、所占比范圍>75%為4分。兩種積分相乘總分<3分為陰性、≥3分為陽性。

1.3 統計學方法

2 結果

2.1 宮頸癌組、CIN組和對照組的ILK蛋白、ID-1蛋白陽性表達率比較

宮頸癌組織中的ILK蛋白、ID-1蛋白陽性表達率分別為64.29%、70.24%均顯著高于CIN組(27.50%、35.00%)和對照組(12.50%、20.00%)，差異具有統計學意義(P<0.05)；CIN組和對照組的ILK蛋白、ID-1蛋白陽性表達率差異無統計學意義(P>0.05)(表1)。

表1 宮頸癌組、CIN組和對照組的ILK蛋白、ID-1蛋白陽性表達率比較(例，%)

2.2 宮頸癌組織中ILK蛋白、ID-1蛋白陽性表達率與病理學特征的關系

宮頸癌組織中的ID-1蛋白陽性表達率在不同FIGO分期、是否發生淋巴結轉移、不同肌層浸潤深度組織中比較，差異具有統計學意義(P<0.05)；宮頸癌組織中的ILK蛋白陽性表達率在不同組織學分化程度、是否發生淋巴結轉移、不同肌層浸潤深度組織中比較，差異具有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 宮頸癌組織中ID-1蛋白陽性表達率與病理學特征的關系(例，%)

3 討論

宮頸癌是一種侵襲力較強，常伴隨淋巴結轉移，且預后效果差的女性高發腫瘤疾病。據流行病學統計[7]大陸地區女性宮頸癌術后5年生存率不足30%，嚴重威脅婦女的生命安全。根治切除術是本病目前最有效的干預手段，但目前臨床上僅僅依靠婦科腫瘤指標對手術指征的指導和手術預后評估效果檢查，臨床上尚需要更具特異性的腫瘤標志物。

整合素連接激酶(ILK)是一種在多種生物中廣泛存在的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，ILK內含3個高度保守的結構域[8]。有研究報道[9]ILK與細胞分裂、增殖和上皮性間質細胞間的轉移和信息傳導有關。有研究報道[10]ILK在惡性腫瘤如乳腺癌、肺小細胞癌、結直腸癌等組織中異常高表達，且表達水平與惡性腫瘤的分化程度、淋巴結轉移與否、肌層浸潤程度等密切相關。有學者解釋ILK參與細胞增殖分化及細胞間信息傳遞的分子學機制，主要表現如下：ILK通過與整合素β亞單位結合，異常激活下游與細胞核內轉錄因子活性相關的PI3K/PKB/AKT信號通路，進而介導細胞間信號傳遞因子，連接蛋白的表達，破壞細胞間的連接狀態、促進細胞形態學的改變，有利于細胞向間質部位的侵襲[11]。故相關學者表示[12]ILK水平尤其在上皮性惡性腫瘤組織中高表達。有研究報道[13]ILK通過激活PI3K通路，并增強上皮細胞內波形蛋白的表達，損傷上皮細胞間連接狀態，降低抑制上皮細胞向間質細胞轉化的E-cadherin蛋白的表達。但ILK作用宮頸癌、宮頸上皮內瘤變的具體機制，臨床研究較少。僅有部分學者發現[14]ILK在宮頸癌組織中異常高表達。本研究發現較CIN和正常宮頸黏膜組織，宮頸癌組織中ILK水平顯著升高，與既往研究報道一致[15]。本研究還發現宮頸癌組織中的ILK蛋白陽性表達率在不同組織學分化程度、淋巴結轉移與否、肌層浸潤深度程度比較，差異顯著(P<0.05)。既往研究報道僅發現ILK在肺癌組織中不同病理組織學分型中的差異(肺小細胞癌組織中ILK異常表達高于其它亞型肺部組織如腺癌)而IL較少研究發現ILK與宮頸癌亞型的相關性。本研究發現ILK與宮頸癌亞型、淋巴結轉移的相關性是本文的創新性。提示，ILK廣泛參與宮頸癌的遠處轉移和侵襲過程，可作為預后評估的有效指標。

有研究報道[16]惡性腫瘤的遠處轉移和侵襲不僅與上皮細胞間的信息傳遞改變導致的細胞間聯系降低有關，還與抑癌基因和癌基因的表達失調、腫瘤細胞新生微血管的形成有關。ID-1位于人類染色體22q11，由155個氨基酸殘基組成，包括2個外顯子和1個內顯子，在激活癌基因異常表達，抑制抑癌基因表達方面具有重要作用，其作為細胞分化的負性調控因子已有實驗證實其在多種惡性腫瘤如乳腺癌、胃癌、結直腸癌組織中的異常高表達，進而抑制細胞凋亡、老化，并提高瘤體血管新生及轉移能力。本研究結果顯示，宮頸癌組織的ID-1陽性率遠高于健康宮頸黏膜和CIN病變組織。說明，ID-1高表達或可能是正常宮頸上皮向宮頸上皮內瘤變，及宮頸癌轉變進程的促進因子，該指標或可用于宮頸癌變早期預測工作中，這與既往研究報道一致[17-19]。另外，本研究還發現，ID-1在宮頸癌組織的表達水平與組織學分化程度、淋巴結轉移和肌層浸潤深度有關。再次確定ID-1高表達在宮頸癌遠處轉移和浸潤的重要作用，可能是通過誘導基質金屬蛋白酶-9表達，誘導腫瘤微血管形成，及上調腫瘤血管內皮因子及其受體，從而促進微血管新生，最終為宮頸癌的浸潤和轉移提供條件。

綜上所述，ID-1蛋白、ILK蛋白在宮頸癌組織中呈典型的高表達，可能與促進宮頸癌的發生發展有關。本研究創新處，明確ID-1、ILK在宮頸癌診斷中的價值，且確定其與宮頸癌遠處轉移和浸潤的相關性，為臨床宮頸癌的診斷和預后評估提供科學依據，有利于治療方案的選擇，具有重要的臨床意義。