動物疫病監測的常用樣品采集方法及注意事項

吳學青 王志遠 李華林

1.寧夏吳忠市利通區扁擔溝鎮畜牧獸醫工作站，寧夏吳忠751100；2.寧夏吳忠市利通區金積鎮畜牧獸醫工作站，寧夏吳忠751100；3.寧夏吳忠市利通區東塔寺鄉畜牧獸醫工作站，寧夏吳忠751100

1 監測采樣的一般原則

1）應該遵循適時、典型、無菌、適量和生物統計的原則。

2）凡是急性死亡病例、發現有血液凝固不良、口鼻、肛門天然孔出血、尸僵不全等疑似炭疽癥狀表現的，應先采集耳尖血液制作血涂片染色鏡檢，發現呈竹節狀排列的大桿菌確診為炭疽病的，嚴禁解剖。

3）采樣時應先采集無菌心、肺、肝等實質器官，再采集胃腸、糞便等容易污染的組織，避免交叉感染。

4）要根據不同的檢驗目的要求和對病例的初步判斷分析采集樣品。采集的病料樣品應具有代表性，采集的組織器官病變要明顯。病因不明時，可對組織器官、分泌物、排泄物等進行全面采集。

5）采集血液、O-P 液等樣品應提前禁食4～6 h。采集血樣應根據不同采樣對象、檢驗項目及所需血量多少采取不同方法與部位。

6）采樣時做好個人生物安全防護，穿好防護服，佩戴好口罩、帽子、膠套、手套等防護用品，避免人畜共患病感染或環境污染發生。

7）采樣數量要求：診斷時，可采樣1～3 只（頭）病死動物的組織器官；疫苗免疫注射抗體效果主動監測時，免疫后21 d 每個場（戶）采集30 份血樣；種群疫病監測凈化，制定方案確定采樣次數和采樣日期，逐頭采樣。疫情監測或流行病學調查時，采樣數量要符合生物統計學的要求。

2 常用監測樣品的采集方法及技術要求

1）抗凝血：即加抗凝劑的血液，常用來作細菌或病毒檢驗樣品。采集的血液立即與抗凝劑充分混勻，防止凝固，密封貼上標簽，冷藏。

2）非抗凝血：即不需要加抗凝劑的血液，待血液凝固后血清析出，常用來作血清學試驗。血清制備方法：血樣在室溫下（不能冷藏）傾斜放置2～4 h（有利于血清析出），待血液凝固自然析出血清，再經離心機離心5 min，分離出血清，將血清移入2 mL 塑料離心管中，封口貼標，4 ℃冷藏。若需長期保存，將血清置于-20 ℃冷凍。

3）禽泄殖腔拭子：將滅菌的拭子插入泄殖腔大約深1.5～5.0 cm 旋轉并刮取黏膜表層的組織或糞便，立即將樣品端置于含有多種抗生素、15%以上甘油的PBS 液的2 mL 離心管中，做好標記，密封低溫保存。主要用來監測高致病性禽流感等疫病。

4）禽喉氣管拭子：將消毒滅菌的棉拭子從口腔插入至咽的后部直達喉氣管，輕柔擦拭并緩慢旋轉，將拭子置于保存緩沖液之中。主要用來監測高致病性禽流感等疫病。

5）鼻腔拭子：主要用來監測羊小反芻獸疫、非洲豬瘟等疫病。用滅菌的棉拭子伸入鼻腔采集分泌物，隨即將拭子置于有雙抗的PBS 保存液中，密封低溫保存。

6）牛羊O-P 液（咽食道分泌物）：探杯在采樣前經0.2%檸檬酸或1%～2%氫氧化鈉溶液中浸泡3～5 min，再用與動物體溫一致的清水沖洗探杯后使用，每采集完1 頭后，探杯要進行消毒并反復清洗以防止酸堿灼傷動物食道。采樣時要保定好動物，將探杯隨吞咽動作小心插入食道5～10 cm 處，輕輕來回抽動2～3 次，然后將探杯拉出，取出5～10 mL O-P 液，倒入含有等量細胞培養液或磷酸緩沖液的滅菌瓶或離心管中，充分搖勻密封，冷藏送檢。主要用于PCR試驗，監測動物口蹄疫等疫病。

7）皮膚樣品：活體動物的病變皮膚，如有新鮮的水泡皮、結節、痂皮等可直接剪取3～5 g，置于保存液中。疑似口蹄疫發病后期，采樣直接取舌體皮膚檢測效果好。

8）實質器官：動物心、肺、肝、脾、腎、淋巴結等實質器官，病料要求新鮮、無污染。必須采用無菌操作技術和已消毒的配套器械，若器械污染，在取組織樣品之前，應用酒精燈火焰消毒手術刀、剪、鑷等器械，所采樣品分別放入滅菌袋中，密封貼標，注明動物、組織名稱、日期，防止病料相互感染，冷藏送檢。若運送時間較長，可作冰凍狀態保存。

9）腸管的采集：在病變腸管兩端用縫合線扎緊打結,從結扎線外側端剪斷，把該段腸管放置于滅菌袋或器皿中，冷藏送檢。

10）牛、羊腦采集：主要用于海綿狀腦病的監測。在枕骨大孔處用剪刀剪開腦硬膜，目的是便于插入采樣勺。然后用食指伸入枕骨大孔中，沿著腔壁轉1 圈，目的是分離切斷腦髓與腔壁相連的神經和血管，以便于腦髓順利挖出。緊貼枕骨大孔的腔壁插入采樣勺，以免破壞腦髓。插入5～7 cm 深度（羊腦則為4 cm），然后扳住勺子手柄，往外挖出腦組織，延腦即可完整取出，注意腦組織采樣需在動物死亡之后盡快采集并-70 ℃冷凍保存。

3 樣品采集、保存、記錄、運送環節注意事項

1）心、肝、腎等實質器官采樣，必須包括病灶及臨近正常組織，以便于對照。死亡動物要盡快采樣，夏天高溫不能超過6 h，冬天不得超過24 h。

2）血液、O-P 液等樣品在采集前禁食8～12 h，可少量飲水，以免胃內容物反流污染O-P 液。

3）樣品信息記錄要填寫完整：所有樣品都要認真填寫采樣表，包括場戶名、場址、畜種、年齡、聯系人及電話、采樣數量、名稱、編號、養殖規模、免疫情況、臨床表現、發病數量、死亡數量及時間、治療用藥記錄、飼料類型等。不同樣品應獨立密封包裝，樣品標簽用記號筆注明樣品名稱、編號、采樣日期，采樣人和被采樣單位簽字或蓋章確認，應將采樣表及所采樣品一起送實驗室。

4）樣品保存：血清、咽-泄殖腔拭子等樣品為便于保存，可加入青霉素、鏈霉素防止腐敗、抑制雜菌繁殖。

5）樣品運送：采集的樣品以最快最直接的途徑送實驗室檢驗。樣品24 h 內送達，可放在4 ℃冷藏箱內運送；24 h 內不能送達的可把樣品進行冷凍，并以此狀態運送。