杏鮑菇氨基酸增強小鼠抗疲勞能力研究*

劉甲天，胡仁柳

（1.北京體育大學，北京 100084；2.九江職業技術學院，江西 九江 332000）

1 背景介紹

1.1 杏鮑菇相關研究進展

杏鮑菇（Pleurotus eryngii）屬擔子菌亞門（Basidiomycotina） 層菌綱 （Hymenomycetes） 傘菌目（Agaricales） 側耳科（Pleurotaceae） 側耳屬（Pleurotus），因具有杏仁的清香和鮑魚的口感而得名，其子實體質地脆嫩，味道鮮美，又被稱為“平菇王”[1]。1970年，在印控克什米爾高山上Henda首先發現杏鮑菇[2]；隨后Cailleux于1974年利用菌褶分離法獲得杏鮑菇菌株并成功栽培出杏鮑菇[3]。目前國內關于杏鮑菇的研究多集中在栽培和初加工方面，涉及深加工的很少，還有少數涉及杏鮑菇多糖，對其結構表征、功能特性及各種提取方法有相關研究[3]。國外則以深加工為主，主要涉及杏鮑菇的功能物質方面，包括理化研究和生物化學性質、分子結構的研究[3]。

與一般的食用菌如木耳（Auricularia auricula）、香菇等相比，杏鮑菇富含蛋白質，灰分含量也較高，含有較為豐富的甘露醇和游離氨基酸，脂肪含量和總糖含量相對較低[4]。因而杏鮑菇被認為是21世紀最具開發潛力的食（藥） 用菌之一，Mori等[5]研究了杏鮑菇的抗動脈粥樣硬化作用，發現其可以使小鼠粥樣硬化的病變速度明顯減緩。此外，杏鮑菇在降血壓、降血脂和降低膽固醇等方面也有一定效果[6]，探索杏鮑菇有效活性成分作用的途徑及機理，以開發出更多的功能產品。

1.2 杏鮑菇氨基酸

杏鮑菇中含有豐富的氨基酸，杏鮑菇干品中游離氨基酸的含量達2.36%[4]。除了缺少色氨酸（未測）、谷氨酰胺和天門冬酰胺3種之外，20種人體氨基酸中杏鮑菇含有17種，其中7種是人體必需氨基酸[4]。研究表明，長時間進行高強度的運動，會導致血漿內芳香族氨基酸含量升高，支鏈氨基酸含量下降，作為單胺類遞質的前體，芳香族氨基酸加速進入腦內，由于其在腦內含量升高，影響單胺類遞質的合成與釋放，進而誘發疲勞癥狀的出現[7-9]。補充外源性支鏈氨基酸則可以有效提高機體運動能力，延緩疲勞發生，促進疲勞恢復。本試驗對杏鮑菇氨基酸增強運動員抗疲勞能力進行研究。

2 試驗方法

2.1 材料和試劑

肌糖原（MG） 及肝糖原（HG） 檢測試劑盒、血乳酸（LA） 試劑盒、乳酸脫氫酶（LDH） 試劑盒、血清尿素氮（BUN） 試劑盒、超氧化物歧化酶（TSOD）試劑盒，由上海貝博生物科技有限公司提供。三氯乙酸，國產分析純，購自南京化學試劑股份有限公司。

2.2 儀器

FW 100型高速萬能粉碎機，天津市泰斯特儀器有限公司；BL 50A型立式壓力蒸汽滅菌器，上海博訊實業有限公司；752型紫外可見分光光度計，上海菁華科技儀器有限公司；游泳箱（30 cm×50 cm×70 cm），自制；電子天平，上海上平儀器有限公司；NCSY-1實驗室烘箱，蘇州耐氏干燥設備有限公司；JIDI-4D-WS離心機，廣州吉迪儀器有限公司；勻漿器，寧波新芝生物科技股份有限公司；恒溫水浴箱，蘇州威爾實驗用品有限公司；S433D/S433型氨基酸自動分析儀，上海仁特檢測儀器有限公司。

2.3 提取杏鮑菇氨基酸

杏鮑菇購自超市，經除雜、干燥、粉碎后，得到杏鮑菇子實體干粉。采用高壓熱水浸提法提取杏鮑菇中的游離氨基酸[10]，取若干杏鮑菇干粉，準確稱取其質量，放入燒杯中，以料液比1∶35（g∶mL） 加入相應體積的蒸餾水，進行高壓熱水浸提，溫度為108℃，時間為50 min。提取后離心20 000 r·min-1離心 10 min，取上清液，70℃～80℃水浴，濃縮至原體積的1/2，合并濃縮液后加入15%的三氯乙酸溶液（體積比1∶3），靜置12 h。以3 500 r·min-1離心10 min，取上清液，得到杏鮑菇氨基酸提取液[11]。

2.4 杏鮑菇中氨基酸組成分析

稱取0.100 g杏鮑菇子實體干粉，加6 mol·L-1鹽酸抽真空后封管，于110℃下水解24 h，轉移至50 mL容量瓶定容。過濾后，取濾液1 mL，真空干燥濃縮，加入1 mL pH為2.2的緩沖溶液溶解，采用氨基酸自動分析儀測定氨基酸含量[12]。

2.5 抗疲勞試驗

健康雌性昆明鼠40只，SPF級，體重為（20±2） g，購于上海斯萊克實驗動物有限公司。在溫度為25℃，相對濕度為60%的環境下，給予標準實驗室飼料和自由飲水，適應性飼養1周。

將40只小鼠按體重隨機分為4組，即高劑量組、中劑量組、低劑量組和空白對照組，每組10只，分別以 20 mg·kg-1、60 mg·kg-1和 180 mg·kg-1劑量的杏鮑菇氨基酸提取液和同等劑量的生理鹽水灌胃，相同條件下飼養21 d，每日用量為小鼠體重乘以設置劑量，空白對照組灌胃生理鹽水，用量以低劑量組設置劑量為標準。

2.5.1 負重游泳試驗

最后1次灌胃0.5 h后，依次給各組小鼠尾端系上1 g重的鉛球，然后放入游泳箱中，游泳箱水深50 cm，水溫恒定在（30±1）℃，從小鼠放入游泳箱開始計時，驅趕小鼠不停地負重游泳，至小鼠頭部沒入水中且10 s內不浮出水面計時結束，記為每只小鼠負重游泳力竭時間，記錄每組10只小鼠的負重游泳時間。

2.5.2 血乳酸、乳酸脫氫酶、血清尿素氮、超氧化物歧化酶含量測定試驗、

負重游泳試驗結束后，立即對小鼠進行眼球靜脈采血，分離血清，利用血乳酸、乳酸脫氫酶、血清尿素氮、超氧化物歧化酶測定試劑盒結合紫外分光光度計法分別測定其血清血乳酸、乳酸脫氫酶、血清尿素氮、超氧化物歧化酶含量，記錄數據。

2.5.3 肌糖原及肝糖原含量測定

負重游泳試驗結束后，立即取出處死的小鼠的肌肉組織和肝臟組織，勻漿離心，分別采用肌糖原及肝糖原測定試劑盒結合紫外分光光度計法測定其肌糖原及肝糖原含量，記錄數據。

2.6 數據處理

以“平均值±標準差”的形式記錄全部數據，采用SPSS 16.0軟件對數據進行處理，多組間數據比較方差分析，2組間數據比較采用t檢驗，P＜0.05時有顯著性差異。

3 試驗結果

3.1 杏鮑菇中的氨基酸組成

經檢測，杏鮑菇中共有17種氨基酸，7種人體必需氨基酸（色氨酸除外） 含量總和為5.48%，占氨基酸總量的38.15%，天門冬氨酸、谷氨酸、賴氨酸含量較高，分別為1.34%、1.88%、1.21%，此外丙氨酸（1.08%）、亮氨酸（1.08%）、組氨酸（1.00%）的含量也相對較高，其余氨基酸的含量均不足1%。

3.2 對小鼠負重游泳時間的影響

不同杏鮑菇氨基酸劑量對小鼠負重游泳時間的影響見表1。

運動耐力被看作是反映抗疲勞能力最客觀、直接的指標，通常通過負重游泳試驗來測定運動耐力[13]。從表1可以看出，與空白對照組相比，灌胃杏鮑菇氨基酸的試驗組小鼠負重游泳時間明顯延長，且隨著劑量增加，負重游泳時間呈正比例增長，高劑量組延長率達163.0%，增長最為顯著（P＜0.05）。由此可見，杏鮑菇氨基酸對于提高運動耐力，增強抗疲勞能力有一定效果。

3.3 對小鼠血清生化指標的影響

不同杏鮑菇氨基酸劑量對小鼠血清生化指標的影響見表2。

血乳酸是肌肉無氧運動的主要代謝產物，是評價機體疲勞的重要標志物[14]。乳酸脫氫酶影響機體組織的能量代謝，而血清尿素氮含量可反映體內蛋白質分解情況，2項指標也是反映機體組織疲勞程度的重要參考[15]。超氧化物歧化酶是一種重要的抗氧化酶，能夠有效地、特異地清除超氧自由基，緩解機體疲勞癥狀[16]。如表2所示，在小鼠血清生化指標中，血乳酸、乳酸脫氫酶含量和血清尿素氮活性隨杏鮑菇氨基酸劑量的增加而顯著降低，且試驗組均低于空白對照組；超氧化物歧化酶的活性隨杏鮑菇氨基酸劑量的增加而顯著升高，且試驗組均高于空白對照組。由此可見，杏鮑菇氨基酸能夠有效降低運動后小鼠血清血乳酸含量和乳酸脫氫酶含量，對血清中血清尿素氮活性也有一定抑制作用，并在一定程度上提高超氧化物歧化酶的活性，起到延緩疲勞作用。

3.4 對小鼠肌糖原及肝糖原含量的影響

杏鮑菇氨基酸對小鼠肌糖原及肝糖原含量的影響見表3。

糖原的含量能反映疲勞發生的快慢和程度[14]。由表3可知，與灌胃生理鹽水的空白對照組相比，灌胃杏鮑菇氨基酸的試驗組小鼠肌糖原和肝糖原含量明顯升高（P＜0.05），其中高劑量組小鼠含量最高，分別為4.97 mg·g-1和5.08 mg·g-1，表明杏鮑菇氨基酸能夠減少肌糖原和肝糖原的消耗，增加其儲備，有效緩解疲勞。

4 討論

運動性疲勞是人體在長時間高強度運動過程中發生的一種運動能力和身體機能短暫下降的正常生理現象[17]。隨著競技體育運動的飛速發展，運動員們面臨著越來越大的競爭壓力，通過補充能夠改善身體機能的營養物質，增強抗疲勞能力以更好地進行鍛煉，充分發揮運動潛力，獲得更好的成績，是一種方便、快捷且有效的輔助手段，對于抗運動性疲勞功能性物質的研究也是一個熱點課題。

運動過程中，蛋白質的分解代謝加強，過量的氨基酸損耗會嚴重影響機體的正常功能，產生運動性疲勞[18]。補充外源性氨基酸不僅可以促進能量的儲備和利用，而且能夠延緩疲勞出現的時間，改善細胞免疫功能，有助于疲勞的恢復[7]。

試驗結果表明，杏鮑菇氨基酸能減少血乳酸、血清尿素氮的產生，抑制乳酸脫氫酶的活性，并在一定程度上增強超氧化物歧化酶的活性，提高運動后體內肌糖原和肝糖原的含量，增加糖原儲備，減輕疲勞程度。而目前對于杏鮑菇的認識還停留在直接食用的水平，研究其更多的功能效果，開發出具有抗疲勞功效的保健產品和藥品，可以幫助運動員取得更好的成績，有助于促進體育事業的發展。

5 結論

綜上所述，杏鮑菇氨基酸能夠有效提升運動耐力，降低血乳酸、血清尿素氮含量，抑制乳酸脫氫酶活性，促進超氧化物歧化酶活性，增加肌糖原和肝糖原的含量，對于延緩疲勞的產生，加快疲勞的消除有一定作用，能夠有效增強抗疲勞能力。