利用綠色熒光蛋白報(bào)告基因篩選植物乳桿菌強(qiáng)啟動(dòng)子

薩初拉，吳青海，，白蘇樂(lè)，其布日，，高 娃，，連海飛，蘇少鋒，常 琰，付紹印，呼 和

（1.內(nèi)蒙古自治區(qū)農(nóng)牧業(yè)科學(xué)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010031；2.天津科技大學(xué)，天津 300457；3.巴彥淖爾市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，內(nèi)蒙古 臨河區(qū) 015000）

乳酸菌被公認(rèn)為是安全的食品級(jí)微生物（GRAS）［1-2］，植物乳桿菌在發(fā)酵飼料、青貯飼料、微生態(tài)制劑、醫(yī)藥及食品等領(lǐng)域廣泛應(yīng)用［3-5］。 使用基因工程手段修飾改造植物乳桿菌， 可釋放更大的應(yīng)用潛力。 植物乳桿菌具有高氧耐受能力和生長(zhǎng)發(fā)酵穩(wěn)定性， 作為宿主表達(dá)重組蛋白方面的應(yīng)用越來(lái)越受到人們的重視［6-8］。 隨著基因工程技術(shù)的迅猛發(fā)展，目前綜合利用基因組學(xué)、轉(zhuǎn)錄組學(xué)及細(xì)胞工程手段［9-10］提高化合物、代謝產(chǎn)物及酶產(chǎn)量的研究已成為熱點(diǎn)［11］。 Van Kranenburg 等［12］對(duì)來(lái)自植物乳桿菌隱蔽質(zhì)粒pWCFS101、pWCFS102進(jìn)行了分析，同時(shí)利用其復(fù)制子構(gòu)建了克隆載體。在植物乳桿菌表達(dá)系統(tǒng)中， 研究比較成熟的是pSIP 系統(tǒng)。 S?rvig 等［13-14］在pSIP300 和pSIP400 系列基礎(chǔ)上構(gòu)建了通用表達(dá)載體。在此基礎(chǔ)上，通過(guò)引入乳桿菌素A 及乳桿菌素P 基因的啟動(dòng)子進(jìn)一步構(gòu)建了pSIP500 系列載體。 pSIP 系統(tǒng)是以細(xì)菌素Sakacin A 為誘導(dǎo)物的誘導(dǎo)型表達(dá)系統(tǒng)，該表達(dá)系統(tǒng)避免了宿主細(xì)胞過(guò)表達(dá)而中毒及新陳代謝的干擾，但需要添加細(xì)菌素Sakacin A 誘導(dǎo)表達(dá)，因此，不適合應(yīng)用于飼料及食品的發(fā)酵和腸道環(huán)境［15］。

國(guó)內(nèi)植物乳桿菌作為外源基因表達(dá)宿主的研究起步較晚， 近些年來(lái)的研究主要集中在植物乳桿菌內(nèi)含質(zhì)粒研究及利用pSIP 系統(tǒng)表達(dá)異源蛋白上， 而自主研發(fā)植物乳桿菌表達(dá)載體方面報(bào)道較少。……