含乳飲料中乙酰磺胺酸鉀的檢測(cè)方法優(yōu)化

□ 謝 衍 中央儲(chǔ)備糧梧州直屬庫(kù)有限公司

乙酰磺胺酸鉀又名安賽蜜，為人工合成甜味劑，易溶于水，難溶于乙醇等有機(jī)溶劑，在空氣中不吸濕，對(duì)熱、酸穩(wěn)定，是目前世界上穩(wěn)定性最高的甜味劑之一。乙酰磺胺酸鉀可與其他甜味劑混合使用，適用于烘烤食品、酸性飲料及供糖尿病人的食品和低能量食品中[1]。

安賽蜜在1983年被FAO/WHO聯(lián)合食品添加劑專家委員會(huì)列為A級(jí)食品添加劑，并推薦日均攝入量為0～ 15 mg/kg。安賽蜜在人體內(nèi)不代謝、不積蓄，100%以原形物質(zhì)從尿中排出體外[2-3]。在GB 2760-2014中，對(duì)于飲料類，乙酰磺胺酸鉀的限值 為0.3g/kg[4]。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

市售乳飲料，4份；甲醇，色譜純；乙腈，分析純；乙酰磺胺酸鉀標(biāo)準(zhǔn)品，純度99.0%，Dr.Ehrenstorfer GmbH。乙酰磺胺酸鉀標(biāo)準(zhǔn)貯備液：稱取純度為99%的乙酰磺胺酸鉀標(biāo)準(zhǔn)品10.50 mg到10.00 mL容量瓶，用水定容至刻度，搖勻，配制成濃度為1.039 5 mg/mL的溶液。亞鐵氰化鉀溶液（92 g/L）：稱取92 g亞鐵氰化鉀，加入適量水溶解，用水定容至 1 000 mL。乙酸鋅溶液：稱取22.0 g乙酸鋅溶于少量水中，加入30 mL冰乙酸，用水定容至100 mL。10%硫酸溶液：量取10 mL濃硫酸，慢慢用水定容至100 mL。其余有機(jī)試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

1290液相色譜儀，美國(guó)安捷倫科技有限公司；AllegraX-15R離心機(jī)，美國(guó)貝克曼公司；CPA2250電子分析天平，賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司；VXR振蕩器，德國(guó)IKA公司。

1.3 方法

1.3.1 色譜條件

色譜柱：JADE-PAK ODS-AQ 3.5 μm 100 mm×2.1 mm；流動(dòng)相：0.02 moL/L乙酸銨-甲醇（90∶10）；流速： 0.40 mL/min；柱溫：35 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：214 nm；進(jìn)樣量：1 μL。

1.3.2 GB/T 5009.140-2003的方法

取樣品2.50 g，加水約20 mL搖勻后，離心15 min，待水溶液流至柱表面時(shí)，用0.02 mol/L硫酸銨-甲醇-乙腈-10%硫酸洗脫。收集洗脫液 25 mL，搖勻，經(jīng)0.22 μm微孔濾膜過(guò)濾，進(jìn)高效液相色譜儀分析。

1.3.3 改進(jìn)方法

取樣品2.50 g至50 mL離心管，加水20 mL，加入乙酸鉛2 mL和亞鐵氰化鉀2 mL，用水定容至 25.0 mL，振蕩離心3 min，取上清液5.00 mL至15 mL離心管中，再加入1.00 mL10%硫酸和5.00 mL乙腈，振蕩2 min，離心3 min，上清液乙腈層經(jīng)0.22 μm微孔濾膜過(guò)濾，進(jìn)高效液相色譜儀分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 GB/T 5009.140—2003檢測(cè)方法

2.1.1 國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法檢測(cè)結(jié)果

取市售的某4種含乳飲料，編號(hào)分別為T1、T2、T3和T4。稱取這4種樣品各2.50 g（精確到0.01 g），每份樣品稱取2份，并按照GB/T 5009.140-2003的方法進(jìn)行檢測(cè)，得到結(jié)果：T1為125 mg/kg，T2為 138 mg/kg，T3為230 mg/kg，T4未檢出。

2.1.2 國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法的回收率

稱取4份T4樣品各2.50 g，編號(hào)為T4-ADD-1、T4-ADD-2、T4-ADD-3和T4-ADD-4加入乙酰磺胺酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液0.80 mL，余下步驟按照GB/T 5009.140-2003的方法測(cè)定乙酰磺胺酸鉀的含量，回收率分別為90.8%、92.2%、91.9%和95.6%，平均回收率為92.6%。

2.2 改進(jìn)方法

2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

精密吸取乙酰磺胺酸鉀標(biāo)準(zhǔn)貯備液0.10 mL、0.20 mL、0.30 mL、0.40 mL、0.60 mL和1.20 mL分別至 不同的20.00 mL容量瓶，用乙腈稀釋至刻度，搖勻，配制成濃度為 5.197 5 μg/mL、10.395 μg/mL、20.790 μg/mL、41.580 μg/mL、62.370 μg/mL和127.74 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。結(jié)果表明，乙酰磺胺酸鉀在5.1975～127.74μg/mL濃 度 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2.2 改進(jìn)方法的精密度試驗(yàn)

取濃度為62.370 μg/mL的乙酰磺胺酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照改進(jìn)方法連續(xù)進(jìn)樣5次。得到5次乙酰磺胺酸鉀的響應(yīng)值，其響應(yīng)值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.6%，小于2%，表明該方法精密度良好。

2.2.3 樣品的測(cè)定

取編號(hào)為T1、T2、T3、T4的4批含乳飲料，按改進(jìn)方法進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果：T1為132 mg/kg，T2為 132 mg/kg，T3為220 mg/kg，T4未檢出。檢測(cè)結(jié)果表明，用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法檢測(cè)的結(jié)果與改進(jìn)方法檢測(cè)的結(jié)果相近。

2.2.4 改進(jìn)方法的回收率試驗(yàn)

稱取T3樣品2.50 g（精確到0.01 g)共9份，編號(hào)分別為A、B、C、D、E、F、G、H、I。其中A、B、C樣品加入乙酰磺胺酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液0.40 mL；其中D、E、F樣品加入乙酰磺胺酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液 0.80 mL；其中G、H、I樣品加入酰磺胺酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液1.20 mL，然后按改進(jìn)方法進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果表明，該方法的回收率在91.71%～99.46%，RSD為0.8%～1.9%，說(shuō)明該方法的結(jié)果穩(wěn)定，數(shù)據(jù)可靠。

2.2.5 改進(jìn)方法的空白試驗(yàn)

不稱取樣品溶液，余下步驟按改進(jìn)方法操作。結(jié)果顯示，空白試驗(yàn)無(wú)干擾，對(duì)檢測(cè)結(jié)果沒(méi)有影響。

2.2.6 改進(jìn)方法的重現(xiàn)性試驗(yàn)

稱取6份T1樣品各2.50 g，編號(hào)分別為T1-1、T1-2、T1-3、T1-4、T1-5和T1-6，按照改進(jìn)方法操作，6份樣品響應(yīng)值分別為：134.1 mg/kg、 131.1 mg/kg、131.5 mg/kg、 129.3 mg/kg、134.2 mg/kg和 134.3 mg/kg，乙酰磺胺酸鉀含量平均值為132 mg/kg，RSD為1.6%。結(jié)果表明，該改進(jìn)方法的重現(xiàn)性好，結(jié)果穩(wěn)定。

2.2.7 改進(jìn)方法的檢出限試驗(yàn)

取T4樣品2.50 g，加入0.15 mL濃度為62.370 μg/mL的乙酰磺胺酸鉀標(biāo)準(zhǔn)液，然后按改進(jìn)方法操作，得到檢出限溶液，按1.3.1中色譜條件進(jìn)行測(cè)定，得到乙酰磺胺酸鉀的信噪比為7，檢出限為3.8 μg/g，優(yōu)于GB/T 5009.140-2003中4 μg/g的檢出限值。

2.3 結(jié)論

在改進(jìn)方法探究中，可先用水稀釋樣品，再利用亞鐵氰化鉀溶液和乙酸鋅溶液反應(yīng)產(chǎn)出沉淀的原理除去含乳飲料中的蛋白質(zhì)，然后利用2 g無(wú)水硫酸鎂和0.5 g氯化鈉、10%硫酸和乙腈進(jìn)行富集、凈化，從而促使操作簡(jiǎn)單化。

3 結(jié)論

本文采用的改進(jìn)方法通過(guò)用水稀釋樣品，用蛋白質(zhì)沉淀劑除去含乳飲料中的大量的蛋白質(zhì)。利用乙酰磺胺酸鉀呈弱酸性的特點(diǎn)，在酸性條件下，抑制乙酰磺胺酸鉀電離，并且利用乙腈和飽和鹽溶液分層的特點(diǎn)，從而得到乙腈層。高速離心讓水相乙腈層更好的分層，從而對(duì)樣品進(jìn)行凈化，并把乙腈層過(guò)濾，上機(jī)測(cè)定。

結(jié)果表明，改進(jìn)后的方法在 5.197 5～127.74 0 μg/mL范 圍 內(nèi)，相關(guān)系數(shù)為0.999，呈良好的線性關(guān)系；精密度與重現(xiàn)性的RSD均小于2%，滿足國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的要求；平均回收 率 為91.77%～99.46%，RSD為0.8%～1.9%；方法檢出限為3.8 μg/g，優(yōu)于國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)4 μg/g；市售的4批含乳飲料通過(guò)改進(jìn)方法與國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法檢測(cè)相比，結(jié)果相近，精密度均小于國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)10%的要求。由此可見(jiàn)，該方法有較高的可靠性和準(zhǔn)確性。