維生素C含量檢測方法的研究進展

□ 阮 麗 曾慶肖 張 文 西南科技大學生命科學與工程學院

維生素C是水溶性維生素的一種，也是具有不飽和結構的己糖酸內酯。作為一種較強的抗氧化劑及自由基清除劑，它主要具有預防衰老、增強機體的免疫和抗應激能力，以及調節機體代謝反應的功能[1]。維生素C在新鮮的水果、蔬菜中含量都較豐富，但人體不能合成及貯存維生素C[2]，必須從食物或藥品中獲得以維持機體的正常生理代謝過程。維生素C含量的測定對于飲食、保健、醫療等各個領域均有著非常重要的意義。目前，常采用的檢測方法有以下幾種。

1 滴定法

1.1 2,6-二氯靛酚滴定法

2,6-二氯靛酚也可稱作二氯酚靛酚，堿性條件下或其氧化態表現為深藍或藍色，反之則呈粉紅或紅色。2,6-二氯靛酚的標準溶液是一種堿性藍色染料，用于滴定含還原型維生素C的酸性樣液，維生素C發生氧化反應轉變成脫氫抗壞血酸，2,6-二氯靛酚染料則發生還原反應呈現無色。滴定終點處稍過量的染料使酸性樣液呈現微紅色。根據染料的消耗體積計算樣品中維生素C的含量。此方法檢測維生素C含量雖方便快捷，可以一次測定大量樣品，但只能測定還原型抗壞血酸，且易受其他還原性物質和有色物質[3]的干擾。

1.2 直接碘量法

直接碘量法或碘滴定法，常被應用于維生素C的檢測中，其檢測原理基于碘單質對維生素C的氧化能力。以淀粉作為指示終點的指示劑，用碘標準溶液對含維生素C的樣液進行滴定，待氧化還原反應完成時，多余的碘單質與指示劑將反應生成藍色的絡合物，指示滴定終點。由滴定過程中滴定液的消耗體積換算數量關系得到樣品中維生素C的含量。直接碘量法測量成本較低、變色敏銳、結果可靠，但碘溶液本身的腐蝕性和不穩定性導致其標準溶液配制和標定過程煩瑣，耗時較長[4]。

2 熒光法

熒光法或熒光分析法，以活性炭作為氧化劑，與樣品中沒有熒光的維生素C起氧化還原作用，生成脫氫抗壞血酸，脫氫抗壞血酸再與熒光底物鄰苯二胺反應生成熒光物質，其熒光強度與維生素C的濃度在某種條件下表現出正相關。在檢測試樣中的維生素C含量時，由于硼酸與脫氫抗壞血酸形成的絡合物不與鄰苯二胺發生反應，空白試驗組可加入硼酸作脫氫抗壞血酸的掩蔽劑，以此檢測試樣中各種雜質的總熒光值，排除其光譜干擾[6]。熒光法測定維生素C的靈敏度高、線性關系好，可實現對維生素C和脫氫抗壞血酸的定量分析，但鄰苯二胺本身具有一定的光譜干擾性，且活性炭可吸附維生素C[5]。

3 紫外-可見分光光度法

紫外-可見分光光度法，利用紫外可見分光光度計檢測維生素C，即在紫外光區200～400 nm范圍內，酸性條件下維生素C在紫外光譜 245 nm[6]左右有最大吸收峰，通過建立維生素C含量的標準曲線，對樣品中所含維生素C進行定量測定。該方法的操作簡單快速、檢測限低，不必再進行基準試劑的標定，且試劑易得，適用于維生素C的快速檢測[7]，但維生素C易受溫度、光照等的影響，儀器價格也較昂貴。

4 高效液相色譜法

高效液相色譜法是國家標準中食品中抗壞血酸含量的檢測方法之一，它以磷酸二氫鉀、十六烷基三甲基溴化銨、磷酸、甲醇的混合試劑為流動相，用偏磷酸溶液溶解樣品中的維生素C，再經過進一步的超聲提取、反向色譜柱分離后用液相色譜儀于 245 nm波長處測定。檢測并排除樣品中脫氫抗壞血酸的含量，需先使用L-半胱氨酸溶液還原脫氫抗壞血酸，再利用紫外檢測器于相同波長處測定其含量，或減去已測得的維生素C含量。使用HPLC檢測食品中維生素C含量，具有分離效率高、檢測靈敏、穩定性好等優點，廣泛應用于食品、藥品中維生素C含量的檢測研究，但HPLC檢測成本高、耗時長[8]，且偏磷酸帶有劇毒。

5 鉬藍比色法

鉬藍比色法常被應用于水果、蔬菜中還原型維生素C含量的測定[9]，其檢測原理基于分光比色法，利用鉬酸銨與偏磷酸-醋酸反應生成磷鉬酸銨，磷鉬酸銨與還原型維生素C發生氧化還原作用，生成一種藍色的鉬藍化合物，通過分光光度計檢測試樣中還原型維生素C的含量[10]。鉬藍比色法操作相對簡單、反應迅速、準確度較高，不易受樣液提取液顏色和其他還原性物質的影響[11]，但在檢測應用中，此方法的最大吸收波長各有不同，應根據具體試驗條件做進一步優化。

6 其他檢測方法

此外，國內外對于維生素C檢測還有許多常見或新型的檢測方法。例如，伏安法[12]可快速測定果汁中維生素C的含量。李詠梅等[13]利用2,4-二硝基苯肼比色法對熟制前后蔬菜的維生素C含量進行測定，驗證了該方法的可行性。在新型的檢測方法中，張巧云等[14]通過酸腐蝕制備納米多孔金，并用納米多孔金修飾玻碳電極成功構建納米多孔金電化學傳感器，實現對飲料中維生素C含量的快速檢測。

7 結語

因維生素C是人體重要的必需營養素之一，其含量檢測在食品、藥品等領域都具有重要意義，特別是在各種水果、蔬菜以及藥品的檢測中。關于維生素C含量的檢測方法還有很多，每種檢測方法都具有其相應的優缺點，應根據具體試驗條件選擇合適的維生素C含量檢測方法。